【正文】 菌生長,第二十四頁，共一百二十一頁。,第二十五頁，共一百二十一頁。)應進一步鑒定，并逐一保藏。n)有可能引起微生物污染的因素 供試品管中生長的微生物經(jīng)鑒定后，確證是因無菌試驗中所使用的物品和〔或〕無菌操作技術不當引起的。opǐn)無菌檢查法,要點 一個標準(biāozhǔn)的SOP，物料進場，外圍消毒劑消毒外表，撤除外包裝，潔凈傳遞，風淋、紫外照射，過氧化氫滅菌等，由低級別向高級別遞進，最后到達A級核心區(qū) 人員進場，合理的更衣程序，A/B級：應用頭罩將所有頭發(fā)以及胡須等相關部位全部遮蓋，必要時戴防護目鏡。,第二十八頁，共一百二十一頁。,2022年版藥典(y224。,2022年版藥典(y224。,2022年版藥典(y224。,2022年版藥典(y224。oji224。ngzh236。ng)實驗室,潔凈室的定義及分級(fēn j237。ng)實驗室,潔凈室的定義與分級 藥品(y224。,潔凈(ji233。)〔等級19級〕 ISO14698潔凈室及其相關控制環(huán)境,第三十八頁，共一百二十一頁。ixiān)建立了由懸浮粒子含量規(guī)定空氣潔凈度的分級標準，以每立方英尺空氣所含最大允許微粒的數(shù)量確定，分為100、1000、10000、100000六個級別。j236。j236。lǐ)參數(shù),空氣懸浮粒子,微生物,浮游菌,沉降菌,外表微生物,空氣過濾器完整性，氣流組織、空氣流 速，換氣次數(shù)、壓差、溫度和相對濕度,參數(shù)確認,執(zhí)行標準?潔凈室施工及驗收標準?附錄D3 高效空氣過濾器現(xiàn)場掃描檢漏方法粒子計數(shù)器法、 附錄E12 氣流的檢測、 附錄E1 風量和風速的檢測、 附錄E2 靜壓差的檢測、附錄E5 溫濕度的檢測,第四十一頁，共一百二十一頁。,潔凈(ji233。,第四十三頁，共一百二十一頁。)的空氣懸浮粒子尺寸范圍在0.1μm1000μm的固體和液體粒子。ng)實驗室,方法：GB/T162922022?醫(yī)藥工業(yè)潔凈室〔區(qū)〕懸浮粒子的測試方法? 采樣點數(shù)目：最少采樣數(shù)，兩種方法， 一、 NL—最少采樣點 A—潔凈室或被控潔凈區(qū)的面積，單位為平方米〔單向流，垂直于氣流(q236。j236。ng)實驗室,采樣點位置與分布： 離地面0.8m高度的水平面上均勻分布 采樣點多于(duō yj236。j236。,潔凈(ji233。u)菌、沉降菌：,第五十頁，共一百二十一頁。 可在關鍵設備或關鍵工作活動范圍處增加(zēngjiā)測點。ng)實驗室,最小采樣(cǎi y224。 為防止培養(yǎng)皿運輸或搬動過程的影響，應對培養(yǎng)皿做陰性對照〔不暴露采樣〕，應無菌生長。,第五十二頁，共一百二十一頁。ngd249。j236。,潔凈(ji233。,潔凈(ji233。 接觸碟法——將充滿規(guī)定的瓊脂培養(yǎng)基的接觸碟對規(guī)那么外表或平面進行取樣，然后置適宜的溫度下培養(yǎng)一定時間并計數(shù)，每碟取樣面積約為25 cm2，微生物計數(shù)結果以cfu/碟報告； 擦拭法——接觸碟法的補充，用于不規(guī)那么外表的微生物監(jiān)測，特別是設備的不規(guī)那么外表。,潔凈(ji233。)工程,第五十七頁，共一百二十一頁。,第五十八頁，共一百二十一頁。,潔凈(ji233。 有助于評估清潔/消毒方法(fāngfǎ)、消毒劑的有效性。j236。j236。,潔凈(ji233。,第六十二頁，共一百二十一頁。nd236。ng)實驗室,別離純化 純培養(yǎng)(p233。ng)實驗室,初篩試驗(sh236。j236。j236。j236。ng)實驗室,第六十九頁，共一百二十一頁。 —基因鑒定法不但(b249。j236。,潔凈(ji233。j236。ng)實驗室,隔離系統(tǒng)的驗證 操作驗證 隔離器完整性驗證 滅菌驗證 滅菌循環(huán)(xj236。 減少人員干預，人是最大的污染源，標準人員進出潔凈區(qū)的程序，嚴格按照A/B潔凈區(qū)的要求做好人員防護。,潔凈(ji233。,潔凈(ji233。 yǎnɡ hu224。用含氯、二氧化氯、過氧乙酸、過氧化氫、含溴消毒劑、臭氧、二溴海因等甲基乙內(nèi)酰脲類化合物和一些復配的消毒劑等消毒因子進行消毒的方法。,第七十七頁，共一百二十一頁。ng)實驗室,消毒劑的配制： 按供給商的使用說明配制和儲存。)、微生物的數(shù)量和種類,第七十九頁，共一百二十一頁。 根據(jù)使用說明，標準使用濃度和作用時間 根據(jù)待消毒外表的材質。)、腐蝕、粘膜刺激〕 和清潔劑，其他消毒劑的相容性 選用多種類的消毒劑，交替使用，防止微生物對其產(chǎn)生耐受性。ng)實驗室,幾種空間滅菌方法： 熏蒸滅菌概念 1980年收錄于USP，在一定溫度(wēnd249。殺孢子劑 通常推薦12小時滅菌時間，排氣、通風至少24小時，過程漫長，有致癌作用，現(xiàn)在已很少使用 臭氧：對所有微生物都有殺滅作用。,第八十一頁，共一百二十一頁。)的應用 紫外線：空氣消毒、物體外表消毒 用UV進行外表消毒時，要求燈管距離污染外表不超過1m，30WUV燈照射時，照射時間不應短于30分鐘，燈管周圍1.52.0m為消毒有效區(qū)。s/cm2 。j236。應到達100000μw.s /cm2。 CMCC中國醫(yī)學菌種保藏中心(zhōngxīn) CMCC〔F〕\CMCC〔B〕,F真菌；B細菌 ATCC美國標準菌種收藏中心,第八十四頁，共一百二十一頁。應進行純度和特性確認。,第八十五頁，共一百二十一頁。 菌種復活：冷凍菌種的復活，無菌操作翻開玻璃管，用相應的液體培養(yǎng)基0.51ml溶解冷凍菌種，轉移至適宜的培養(yǎng)基中復活。 甘油冷凍保藏：液體培養(yǎng)物參加等體積的20%甘油，混勻，分裝于1ml的小管，80℃30℃保存；或菌苔刮取后分散于無菌水中，參加等體積20%甘油的TSB中。u)冰箱保存。,菌種的管理(guǎnlǐ),傳代：工作菌株的傳代次數(shù)不得超過5 代〔標準菌株為第0 代〕。 使用：使用工作菌種制備菌液，做好記錄。,菌種的管理(guǎnlǐ),菌種的標識(biāozh236。 例如2：大CMCC(B)44102儲〔瓷〕140606/2/10，其中“大〞表示大腸埃希菌，“儲〞代表標準儲藏菌株， “瓷〞表示用瓷珠保藏法來保藏此菌種，“140606〞指標準儲藏菌株的傳代日期即2022年6月6日，“10〞代表是一共制備了10支。) 生物平安柜的分類與特點 二級生物平安柜的使用,第九十二頁，共一百二十一頁。)平安實驗室操作。,生物(shēngw249。 吸入 〔病原微生物污染的空氣〕〔氣溶膠－0.001100μm的固態(tài)、液態(tài)微小粒子懸浮在氣體介質中形成的相對穩(wěn)定的分散體系〕 感染性病原微生物氣溶膠的吸入是造成實驗室相關感染的主要因素。在實驗室的工作區(qū)外還應當提供另外的可長期使用的儲存間。實驗臺面應是防水的，并可耐消毒劑、酸、堿、有機溶劑和中等熱度的作用。要有可靠和充足的電力供給和應急照明，以保證人員平安離開實驗室。要保證實驗室水源和飲用水源的供給管道之間沒有交叉連接。 (6) BSL2實驗室，應在靠近實驗室的位置配備高壓滅菌器或其他去除污染的工具。必須使用(shǐy242。,第九十六頁，共一百二十一頁。)平安實驗室,防護要求 在實驗室工作時，必須穿著適宜的工作服或防護服。 為了防止眼睛或面部受到噴濺物的污染(wūrǎn)、碰撞或人工紫外線輻射的傷害，必須戴適宜的平安眼鏡、面罩〔面具〕或其他防護設備。 禁止在實驗室工作區(qū)域儲存食品和飲料。)平安實驗室,生物平安柜〔 Biosafety Cabinet BSC) 負壓過濾排風柜－在生物因子操作過程中用來保 護操作人員、環(huán)境和〔或〕實驗(sh237。 平安柜分級：Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ 三個級別。)平安柜種類 BSC有三個級別，一共有六種。 前窗操作口向內(nèi)吸入的負 壓氣流保護(bǎoh249。,A前窗操作口 B觀察窗 C排氣過濾器 D負壓排氣通路 Ⅰ級平安柜結構和氣流(q236。)平安實驗室,Ⅱ級生物平安柜根據(jù)結構特點和氣流(q236。,生物(shēngw249。,生物(shēngw249。) HEPA 過濾的空氣 負壓的污染空氣,第一百零四頁，共一百二十一頁。,第一百零五頁，共一百二十一頁。)平安實驗室,Ⅱ級B1型生物平安柜 操作口流入氣流的最低速率為0.50m/s； 下降氣流大局部由未污染的流入氣流循環(huán)提供(t237。ng)排氣管道排到大氣中，不允許回到平安柜和 實驗室中； 所有污染部位均處于負壓狀態(tài)，污染氣體過濾后 被全部外排〔不在工作區(qū)循環(huán)〕； B2型平安柜可以用于以揮發(fā)性有毒化學品和放射 性核素為輔助劑的微生物實驗。shī) 操作； 平安柜內(nèi)對實驗室的負壓應不低于120Pa； 下降氣流經(jīng)高效過濾器過濾后進入平安柜； 排出氣流一般經(jīng)兩道高效過濾器過濾。) 預留出空間連接管道，外接的排氣口要比樓層高2米 A/B3型和 B2型平安柜要放置在專用房間 定好儀器后再確定施工方案,第一百一十頁，共一百二十一頁。,第一百一十一頁，共一百二十一頁。n)用品轉移到生物平安柜內(nèi)，并合理布置。 如有容易產(chǎn)生氣溶膠的設備時，應該靠近平安柜的后部放置。)平安實驗室,生物平安柜的使用 凈化 工作開始前，至少讓平安柜運行(y249。,第一百一十三頁，共一百二十一頁。 在生物平安柜里操作時，不能進行文字工作。nɡ)進行，并能夠通過玻璃觀察擋板看到。,生物(shēngw249。y224。,生物(shēngw249。)器皿中。,第一百一十六頁，共一百二十一頁。n)完畢，密閉所有試劑瓶，蓋好裝有未用完清潔Tip頭、清潔玻璃器皿、待培養(yǎng)平皿〔瓶〕等實驗材料的容器蓋，并用消毒劑消毒容器外外表，扎好裝有待消毒廢料的塑料袋口，等待2～3分鐘后，先移出主要實驗物品，再移出剩余實驗物品。)平安實驗室,生物平安柜的使用 清理平安柜內(nèi)物品時應遵循以下原那么： 所有物品取出平安柜之前需要進行外表消毒處理〔一般為70%乙醇〕。 所有敞口托盤、容器蓋好蓋后，所有口袋封口后再移出平安柜。擦拭時應無遺漏，無死角(sǐjiǎo)。,第一百一十九頁，共一百二十一頁。ng)總結,藥品無菌檢查及相關知識。A1型平安柜不能用于揮發(fā)性有毒化學品和揮發(fā)性。假設使用漂白劑等腐蝕性消毒劑后，還必須用無菌水再次(z22