【正文】 放射性核素的半衰期長短不同 (表 )，在自顯影實驗中多選用半衰期較長者。 7. 掃描透射電子顯微鏡 (scanning transmission electron microscopy， STEM) 既有透射電子顯微鏡又有掃描電子顯微鏡的顯微鏡。 8. 高 壓 電 子 顯 微 鏡 (highvoltage electron microscopy， HVEM) 同透射電子顯微鏡基本相同，只是電壓特別高。由于電子密度高的重金屬鹽包埋了樣品中低電子密度的背景，增強了背景散射電子的能力以提高反差，這樣，在圖像中背景是黑暗的，而未被包埋的樣品顆 粒則透明光亮，這種染色稱為負(fù)染技術(shù)。②在真空裝置中將樣品鍍上一層重金屬 (金或鉑金 )，噴鍍時的加熱絲具有一定的角度 。 11. 冰凍斷裂復(fù)型 (freezefracture replication)技術(shù) 先將生物樣品在液氮中 (196℃ )進行快速冷凍，防止形成冰晶。 12. 冰凍蝕刻 (freezeetching)技術(shù) 是在冰凍斷裂技術(shù)的基礎(chǔ)上發(fā)展起來的更復(fù)雜的復(fù)型技術(shù)。當(dāng)針尖和樣品表面距離很近時 (1nm以下 )， 針尖和樣品表面之間會產(chǎn)生電壓。連續(xù)的掃描可以建立起原子級分辨率的表面 像。由于沒有高能電子束， 對表面沒有破壞作用 (如輻射， 熱損傷等 )所以能對生理狀態(tài)下生物大分子和活細(xì)胞膜表面的結(jié)構(gòu)進行研究，樣品不會受到損傷而保持完好。這種在酶作用下產(chǎn)生反應(yīng)產(chǎn)物， 經(jīng)捕捉反應(yīng)來間接證明酶定位的反應(yīng)稱為酶的細(xì)胞化學(xué)反應(yīng)。 16. 免疫電鏡 (immunoelectron microscopy) 將抗體進行特殊標(biāo)記后用電子顯微鏡觀察免疫反應(yīng)的結(jié)果。 17. 染色體分選 (chromosome sorting) 用流式細(xì)胞計分選特定的染色體，基本過程與細(xì)胞分選相似。 18. 顯微分光光度術(shù) (microspectrophotometry) 將顯微鏡技術(shù)與分光光度計結(jié)合起來的技術(shù)。 20 核磁共振技術(shù) (nuclear magic resonance， NMR) 核磁共振技術(shù)可以直接研究溶液和活細(xì)胞中相對分子質(zhì)量較小 (20， 000 道爾頓以下 )的蛋白質(zhì)、核酸以及其它分子的 結(jié)構(gòu)， 而不損傷細(xì)胞。這時原子核進動與電磁波產(chǎn)生共振， 叫核磁共振。 21. 細(xì)胞工程技術(shù) (cell engineering) 細(xì)胞工程技術(shù)是細(xì)胞生物學(xué)與遺傳學(xué)的交叉領(lǐng)域，主要利用細(xì)胞生物學(xué)的原理和方法，結(jié)合工程學(xué)的技術(shù)手段，按照人們預(yù)先的設(shè)計，有計劃地改變或創(chuàng)造細(xì)胞遺傳性的技術(shù)。因此，較為嚴(yán)格地說是指成功傳代之前的培養(yǎng)，此時的細(xì)胞保持原有細(xì)胞的基本性質(zhì)，如果是正常細(xì)胞，仍然保留二倍體數(shù)。 分散培養(yǎng)則是將組織塊用機械法或化學(xué)法使細(xì)胞分散。在植物組織培養(yǎng)中的愈傷組織是指植物細(xì)胞在組織培養(yǎng)過程中形成的無一定結(jié)構(gòu)的組織團塊，在適宜的條件下，愈傷組織可再分化，形成芽、根，再生成植株。 自發(fā)的動物細(xì)胞融合機率很低， 1962 年 Okada 和Tadokoro 發(fā)現(xiàn)滅活的仙臺病毒有促進細(xì)胞融合的作用。 25. 單 克 隆 抗 體 技 術(shù) (monoclonal antibody technique) 1975 年英國科學(xué)家 Milstein 和 Kohler 所發(fā)明， 并獲得 1984 年諾貝爾醫(yī)學(xué)獎。將這兩種細(xì)胞融合后得到的雜交瘤細(xì)胞具有兩種親本細(xì)胞的特性。起始的離心速度較低，讓較大的顆粒沉降到管底，小的顆粒仍然懸浮在上清液中。在此方法中，分離介質(zhì)對被分離的物質(zhì)必須是中性無害的，并且密度梯度較低，底部的密度比管頂部的密度大，建立密度梯度的目的是防止擴散。在這種離心分離方法中，要用介質(zhì)產(chǎn)生一種密度梯度， 這種密度梯度覆蓋了待分離物質(zhì)的密度，這樣，通過離心使不同密度的顆粒懸浮到相應(yīng)的介質(zhì)密度區(qū)。在等密度梯度離心中蔗糖或甘油的梯度的作用與移動區(qū)帶離心中梯度原理是不同的，在移動區(qū)帶離心中梯度的惟一目的是減少樣品的擴散， 即使是在離心管的底部，顆粒的密度也比介質(zhì)大。在氯化銫形成的密度梯度中，離心管頂部的密度為 :，底部為 :。流動相的流動取決于引力和壓力，而不需要電流。層析柱中的填料是某些惰性的多孔網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)物質(zhì)，多是交聯(lián)的聚糖 (如葡聚糖或瓊脂糖 )類物質(zhì)，使蛋白質(zhì)混合物中的物質(zhì)按分子大小的不同進行分離。生物分子間的這種結(jié)合能力稱為親和力。 34. 基因克隆 (gene cloning) 是 70 年代發(fā)展起來的一項具有革命性的研究技術(shù)，可概括為∶分、切、連、轉(zhuǎn)、選。人為的將小鼠的某一種有功能的基因完全缺失的技術(shù)就稱為基因敲除技術(shù)。 基因敲除是一套組合技術(shù)，包括基因重組、細(xì)胞分離培養(yǎng)、轉(zhuǎn)基因等。 3. 胞質(zhì)膜 (cytoplasmic membrane) 存在于細(xì)胞質(zhì)中各膜結(jié)合細(xì)胞器中的膜，包括核膜、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)膜、高爾基體膜、溶酶體膜、線粒體膜、葉綠體膜、過氧化物酶體膜等。 真核生物除了具有細(xì)胞表面膜外，細(xì)胞質(zhì)中還有許多由膜分隔成的各種細(xì)胞器，這些細(xì)胞器的膜結(jié)構(gòu)與質(zhì)膜相似，但功能有所不同，這些膜稱為內(nèi)膜(internal membrane), 或胞質(zhì)膜 (cytoplasmic membrane)。生物膜是細(xì)胞的基本結(jié)構(gòu)，它不僅具有界膜的功能 ,還參與全部的生命活動。 7. 血影蛋白 (spectrin) 又 稱收縮蛋白，是紅細(xì)胞膜骨架的主要成份 ,但不是紅細(xì)胞膜蛋白的成份 ,約占膜提取蛋白的 30%。這些血影蛋白在整個細(xì)胞膜的細(xì)胞質(zhì)面下面形成可變形的網(wǎng)架結(jié)構(gòu) ,以維持紅細(xì)胞的雙凹圓盤形狀。血型糖蛋白 A是一種單次跨膜糖蛋白 , 由 131個氨基酸組成 , 其親水的氨基端露在膜的外側(cè) , 結(jié)合 16 個低聚糖側(cè)鏈。由于帶 3蛋白具有陰離子轉(zhuǎn)運功能，所以帶3 蛋白又被稱為“陰離子通道”。錨定蛋白一方面與血影蛋白相連 , 另一方面與跨膜的帶 3蛋白的細(xì)胞質(zhì)結(jié)構(gòu)域部分相連 , 這樣，錨定蛋白借助于帶 3 蛋白將血影蛋白連接到細(xì)胞膜上，也就將骨架固定到質(zhì)膜上。它的形態(tài)似不規(guī)則的盤狀物，高 ,直徑 。磷脂分子的極性端是各種磷脂酰堿基 , 稱作頭部。 磷脂分子的疏水端是兩條長短不一的烴鏈 , 稱為尾部 , 一般含有 14～ 24 個偶數(shù)碳原子。 14. 膽固醇 (cholesterol) 膽固醇存在于真核細(xì)胞膜中。膽固醇分子是扁平和環(huán)狀的 ,對磷脂的脂肪酸尾部的運動具有干擾作用 ,所以膽固醇對調(diào)節(jié)膜的流動性、加強膜的穩(wěn)定性有重要作用。在構(gòu)建導(dǎo)彈人工脂質(zhì)體時 ,不僅要將被運載的分子或藥物包入脂質(zhì)體的內(nèi)部水相 ,同時要在脂質(zhì)體的膜上做些修飾 ,如插入抗體便于脂質(zhì)體進入機體后尋靶。整合蛋白所含疏水氨基酸的成分較高。這種蛋白完全外露在脂 雙層的內(nèi)外兩側(cè) ,主要是通過非共價健附著在脂的極性頭部 , 或整合蛋白親水區(qū)的一側(cè) , 間接與膜結(jié)合。外周蛋白可以增加膜的強度 ,或是作為酶起某種特定的反應(yīng) ,或是參與信號分子的識別和信號轉(zhuǎn)導(dǎo)。之所以能夠在膜上發(fā)現(xiàn)這類脂錨定蛋白 ,是因為用特異識別和切割含有肌醇磷脂的磷脂酶處理細(xì)胞膜能 釋放出蛋白質(zhì)。目前至少發(fā)現(xiàn)兩種蛋白 (Src 和 Ras)是通過這種方式被錨定在質(zhì)膜的細(xì)胞質(zhì)面 ,提示這種錨定方式與細(xì)胞從正常狀態(tài)向惡性狀態(tài)轉(zhuǎn)化有關(guān)。 1954年對該模型進行了修改：膜上有一些二維伸展的孔 , 孔的表面也是由蛋白質(zhì)包被的 ,這樣使孔具有極性 ,可提高水對膜的通透性。并推測 :暗層是蛋白質(zhì) , 透明層是脂 ,并建議將這種結(jié)構(gòu)稱為單位膜。另外 ,單位膜模型還認(rèn)為膜的外側(cè)表面的膜蛋白是糖蛋白 ,而且膜蛋白在兩側(cè)的分布是不對稱的。 21. 流動鑲嵌模型 (fluid mosaic model) 1972 年 Singer 和 Nicolson 總結(jié)了當(dāng)時有關(guān)膜結(jié)構(gòu)模型及各種研究新技術(shù)的成就，提出了流動鑲嵌模型，認(rèn)為球形膜蛋白分子以各種鑲嵌形式與脂雙分子層相結(jié)合 , 有的附在內(nèi)外表面 , 有的全部或部分嵌入膜中 , 有的貫穿膜的全層 , 這些大多是功能蛋白。 這一模型強調(diào)了膜的流動由性和不對稱性 ,較好地體現(xiàn)細(xì)胞的功能特點 ,被廣泛接受 ,也得到許多實驗的支持。 23. 冰凍斷裂 (freeze fracture) 一種制備電子顯微鏡樣品的方法。由于過氧化物酶的分子較大而不能透過細(xì)胞膜 ,這樣可以用于標(biāo)記膜 外表面的蛋白 ,包括外周蛋白和整合蛋白的外部分。 膜的流動性主要是由膜的雙脂層的狀態(tài)變化引起的。 26. 側(cè)向擴散 (lateral diffusion) 又稱側(cè)向遷移。它是指脂分子從脂雙 層的一個層面翻轉(zhuǎn)至另一個層面的運動?；具^程包括細(xì)胞融合導(dǎo)致異核體 (heterokaryon)的形成 , 異核體通過細(xì)胞有絲分裂導(dǎo)致核的融合 , 形成單核 的雜種細(xì)胞。在 37℃下 40 分鐘后 , 兩種顏色的熒光在融合的雜種細(xì)胞表面呈均勻分布，這說明抗原蛋白在膜平面內(nèi)經(jīng) 擴散運動而重新分布。 29. 成斑 (patching)、成帽 (capping)反應(yīng) 淋巴細(xì)胞通過產(chǎn)生抗體對外源蛋白進行應(yīng)答 ,抗體分子位于細(xì)胞質(zhì)膜上。導(dǎo)致這種現(xiàn)象的原因是抗體是多價的 ,每一個兔子的抗體能夠同小鼠細(xì)胞質(zhì)膜表面的多個抗體分子反應(yīng) ,也就是說小鼠的每一個膜抗體將同多個兔子的抗體反應(yīng)。 30. 光脫色熒光恢復(fù)技術(shù) (fluorescence recovery after photobleaching FRAP) 研究膜流動性的一種方法?？梢杂梅翘禺愋缘?染料 , 如 異 硫 氰 酸 熒 光 素 (fluorescein isothiocyanate,FITC)將細(xì)胞膜蛋白全部進行標(biāo)記。 根據(jù)熒光恢復(fù)的速度 , 可推算膜脂的擴散速度為每秒鐘為幾個微米，而膜蛋白的擴散速度變化幅度較大，少數(shù)膜蛋白的擴散速度可達到膜脂的速度，大多數(shù)蛋白的擴散速度都比膜脂慢，還有一些膜蛋白完全限于某一個區(qū)域。第一 ,它只能檢測膜蛋白的群體移動 ,而不能觀察單個蛋白的移動。在該技術(shù)中將一個含有不配對的電子基團 (通常是硝基氧基團 )加到磷脂的脂肪酸尾端，這就是所謂的自旋標(biāo)記(spinlabel )。如細(xì)胞從血液中吸收葡萄糖以及細(xì)胞質(zhì)膜上的離子泵將 Na+泵出、將 K+泵入細(xì)胞都屬于這種運輸范疇。在多細(xì)胞生物中 ,整個細(xì)胞層作為半滲透性的障礙，而不僅僅是細(xì)胞質(zhì)膜。 36. 離子載體 (ionophore) 離子載體是一些能夠極大提高膜對某些離子通透性的載體分子?？杀欢虠U菌肽 A 離子通道運輸?shù)年栯x子有∶H+ 〉 NH4+〉 K+ 〉 Na+ 〉 Li+。纈氨酶素可使 K+的擴散速率提高 100， 000倍，但是它不能有效地提高 Na+的擴散速度。如果改變膜兩側(cè)的條件，如加熱或加壓，就有可能改變物質(zhì)的流動方向，其原因就是改變了自由能。 41. 簡單擴散 (simple diffusion) 簡單擴散是被動運輸?shù)幕痉绞?,不需要膜蛋白的幫助 ,也不消耗 ATP,而只靠膜兩側(cè)保持一定的濃度差 ,通過擴散發(fā)生的物質(zhì)運輸。是指非脂溶性物質(zhì)或親水性物質(zhì) , 如氨基酸、糖和金屬離子等借助細(xì)胞膜上的膜蛋白的幫助順濃度梯度或順電化學(xué)濃度梯度 , 不消耗 ATP 進入膜內(nèi)的一種運輸方式。如運輸?shù)鞍啄軌驇椭咸烟强焖龠\輸 ,但不幫助與葡萄糖結(jié)構(gòu)類似的糖類運輸。通道蛋白可以是單體蛋白 ,也可以是多亞基組成的蛋白 ,它們都是通過疏水的氨基酸鏈進行重排 ,形成水性通道。 44. 電位 門控通道 (voltagegated channels) 這類通道的構(gòu)型變化依據(jù)細(xì)胞內(nèi)外帶電離子的狀態(tài)，主要是通過膜電位的變化使其構(gòu)型發(fā)生改變 , 從而將“門”打開。 電位 門控通道在神經(jīng)細(xì)胞的信號傳導(dǎo)中起主要作用 , 電位 門控通道也存在于其他的一些細(xì)胞 ,包括肌細(xì)胞、卵細(xì)胞、原生動物和植物細(xì)胞。聲音的振動推開協(xié)迫門控通道，允許離子進入毛狀細(xì)胞，這樣建立起一種電信號，并且從毛狀細(xì)胞傳遞到聽覺神經(jīng)，然后傳遞到腦。 載體蛋白既參與被動的物質(zhì)運輸，也參與主動的物質(zhì) 運輸。 48. 水通道蛋白 (aquaporin) 一種水的分子通道。它可以使紅細(xì)胞快速膨脹和收縮以適應(yīng)細(xì)胞間滲透性的變化。另外 ,AQP1 的氨基端和羧基端的氨基酸序列是嚴(yán)格對稱的 ,因此 ,同源跨膜區(qū) (1,2, 3,6)在質(zhì)膜的脂雙層中的方向相反。共有四種類型的運輸 ATPase: ① P 型離子泵 (Ptype ion pump),或稱 P 型ATPase 。這種泵主要存在于細(xì)菌質(zhì)膜、線粒體膜和葉綠體的膜中 , 它們在能量轉(zhuǎn)換中起重要作用 , 是氧化磷酸化或光合磷酸化偶聯(lián)因子 (F 即 fector 的縮寫 )。運輸時需要先建立電化學(xué)梯度，在動物細(xì)胞主要是靠鈉泵，在植物細(xì)胞則是由 H+泵建立的 H＋質(zhì)子梯度。在細(xì)胞內(nèi)釋放的 Na+又被 Na+/K+泵泵出細(xì)胞外維持 Na+離子的電位梯度。其 機理是通過對被轉(zhuǎn)運到細(xì)胞內(nèi)的分子進行共價修飾（主要是進行磷酸化）使其在細(xì)胞中始終維持“較低”的濃度 , 從而保證這種物質(zhì)不斷地沿濃度梯度從細(xì)胞外向細(xì)胞內(nèi)轉(zhuǎn)運。在結(jié)構(gòu)上包括細(xì)胞被 (cell coat)和細(xì)胞質(zhì)膜。糖被通常含有由細(xì)胞分泌出來的細(xì)胞外基質(zhì)，厚約 5nm，其中的糖類是與質(zhì)膜的蛋白質(zhì)分子、脂類分子共價結(jié)合形成糖蛋白和糖脂分