xxxx-9-16bt第2講基因工程第1講-概論-預覽頁
【正文】 5．破譯了全部生物 遺傳密碼 ， 確定了它在生物界的通用 性，人類更加具體地了解 遺傳信息表達規(guī)律。有 3個： UAA、 UAG、 UGA ? 代表氨基酸的密碼 ： 64 ?3 = 61 ? 起始密碼： AUG 在 mRNA起始部位時為起始密碼。 2) 方向性 ? mRNA分子上由起始密碼 AUG開始，從5?→3 ?方向閱讀密碼子，直至終止密碼。 37 4) 簡并性 目 錄 ?即有多個密碼子特異地破譯同一個氨基酸． ?遺傳密碼中，除色氨酸和甲硫氨酸僅對應一個密碼子外，其余氨基酸均有一個以上密碼子為其編碼。 理論上的可行性。 （縫紉機、漿糊） ? DNA、 RNA聚合酶和反轉錄酶等合成酶 。 載體（ vector) 是能攜帶外源 DNA、能自我復制的小 DNA分子。 45 大腸桿菌 DNA轉化體系 建立 1970年發(fā)現(xiàn)氯化鈣處理過的細胞易于吸收接納外源 DNA； 1972年 Cohen C報道，質粒 DNA也能被大腸桿菌吸收。 才能得到創(chuàng)新的發(fā)明、發(fā)現(xiàn) 和成果。 50 1972年 Berg等人使用 EcoRI在體外對猴病毒 SV40的 DNA和 λ 噬菌體 的 DNA分別酶消化，再用 T4DNA連接酶將兩種片段連接起來，得到 SV40和 λ DNA 的重組雜種DNA分子 ， 率先完成了世界上第一次成功的 DNA體外 不同物種之間 的 DNA重組實驗（片段重組）。 他的工作是世界上第一次成功的 基因克隆實驗，并有基因表達及新的表型 。 56 1974年， 首次實現(xiàn)異源間基因重組。 58 1978年 ， 人類的第一個基因被克隆。 人胰島素基因的 cDNA 被克隆、成功表達和開始成為商品上市。 本階段的操作有三個主要環(huán)節(jié)： （ 1） 分 離：提取、分離含目的基因的 DNA分子和載體 DNA分子，在分離提取過程中，注意質、量，減少損傷。 為目的基因提供在受體細胞中 復制 或 整合 能力。 （ 1） 轉 移：利用 DNA轉移技術，把構建的重組體導入到受體菌或受體細胞中，獲得工程菌或工程細胞 。 71 基因載體 目的基因 質粒 噬菌體 病毒 PCR cDNA 人工合成 基因文庫 限制性內切酶 有切口的載體 有切口的目的基因 DNA連接酶 重組體 轉化 轉染 體外包裝 帶重組體的宿主細胞 表型篩選 電泳法 核酸雜交 免疫學方法 目的基因的表達 72 圖 21 基因工程技術流程圖 73 基因工程表達依據的基本原理 提高外源基因的劑量 ——分子遺傳學原理 篩選修飾重組基因表達的轉錄調控元件，如： 啟動子、增強子、操作子、終止子、 上游調控序列等 ——分子生物學原理 修飾構建蛋白質生物合成的翻譯調控元件，如： SD序列、 mRNA非編碼區(qū)、密碼子等 ——分子生物學原理 基因工程菌（ 微型生物反應器 ）增殖及穩(wěn)定生產 —— 生化工程學原理 74 基因工程的支撐技術 核酸凝膠電泳技術 核酸分子雜交技術 細菌轉化轉染技術 DNA序列分析技術 寡核苷酸合成技術 基因定點突變技術 聚合酶鏈反應（ PCR）技術 75 ? 運輸工具： ? 細菌質粒 ? 病毒 ? DNA操作技術 ? 純化 DNA ? 剪切 DNA分子 ? 分析 DNA片段大小 ? 連接 DNA分子 ? 受體細胞的制備 ? 將 DNA轉入受體細胞并擴增 ? 重組子的篩選和鑒定 ? 目的基因的表達 76 Thank You for Your Attention! 謝 謝 77 演講完畢，謝謝觀看！
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