22基因工程載體-噬菌體載體xxxx09-預(yù)覽頁
【正文】 103~105/ μgDNA 。 插入式載體可攜帶的外源ＤＮＡ片段較替換式為小。用途： cDNA文庫。優(yōu)越性：1. 單鏈 DNA噬菌體的復(fù)制，是以雙鏈環(huán)形的 DNA為媒介的，這種復(fù)制形式 的 DNA簡稱 RFDNA；2. 不論是 RFDNA還是 ssDNA都能感染大腸桿菌；3. 單鏈 DNA噬菌體顆粒的大小，是受其 DNA的多制約的，不存在包裝限制 問題；4. 容易測定外源 DNA片斷的插入取向；5. 可產(chǎn)生含外源片斷的單鏈 DNA分子。M13噬菌體載體? M13是一種含單鍵（ +） DNA（ ssDNA）的絲狀大腸桿菌噬菌體，其基因組大小為 。 ?成熟的噬菌體顆粒僅能感染 F+細胞，這是因為這種噬菌體的感染位點在性散毛上。 M13單鏈DNA噬菌體的生命周期RF DNAPhage M13 replication in the host cell:+RNA pol DNA polIII177。(2)加入酶切位點① 在 IG區(qū)內(nèi)加入單一內(nèi)切酶位點第一個 M13載體： M13mp1：M13 RFBsuI不完全消化各種長度的線性片斷（其中應(yīng)有只在IG上切開的線性全長 M13） lac基因的HindII片斷 (lacI、lacP、 lacO、 lacZ’）連接 M13mp1JM101宿主只有在 IG區(qū)插入 lacZ’才能存活并在 Xgal上出現(xiàn)互補的藍噬菌斑（三） M13系列載體的優(yōu)點系列載體的優(yōu)點1） 有 MCS，便于克隆不同的酶切片段2） Xgal顯色反應(yīng)，可供直接選擇3）無包裝限制，克隆能力大4）可以克隆雙鏈 DNA分子中的每一條鏈子代 M13噬菌體中包含的是單鏈 +DNA。 ? 可以定向地克隆 DNA片段，克隆在 M13 RF DNA分子上的雙鏈 DNA片段，到了子代噬菌體便成了單鏈的形式。 M13克隆載體分子結(jié)構(gòu)圖三、噬菌粒載體噬菌粒載體 由質(zhì)粒載體和單鏈噬菌體載體結(jié)合而成的新型的載體系列。③ 兩種復(fù)制形式① 分子量小噬菌粒載體的特點既具有質(zhì)粒的復(fù)制起點，又具有噬菌體的復(fù)制起點 。T7T3用于體外轉(zhuǎn)錄3 PCR產(chǎn)物克隆載體 T 載體pCR系列載體Invitrogen公司開發(fā)的 線性 噬菌粒載體。T vector的克隆過程的克隆過程 ———— 簡便！簡便！A AT TT vector PCR productT4 DNA ligaseAA四、柯斯質(zhì)粒載體柯斯質(zhì)粒 (cosmid) 一種人工構(gòu)建的克隆載體，包含了 λ噬菌體的 cos基因。（ 1）具有 cos位點，能高效地轉(zhuǎn)化大腸桿菌，能在大腸桿菌中實現(xiàn)自身環(huán)化，并能在大腸桿菌中復(fù)制；216。已有多種粘粒載體可用于基因克隆， pJB8是最常用的粘粒載體之一1.（ 4) 多種單一酶切位點，便于克隆 粘粒載體的優(yōu)點柯斯質(zhì)粒載體的特點1. 具有 λ噬菌體的特性；2. 具有質(zhì)粒載體的特性；3. 具有較高容量的克隆能力；4. 具有與同源性序列的質(zhì)粒進行重組的能力 特點：1. 可插入長達 27～ 41kb的外源基因，方便地用于 克隆大片段 DNA。這是一類用于克隆大片段 DNA的載體，它是由 λ 噬菌體的cos（ cohesive）末端及質(zhì)粒（ plasmid）重組而成的載體。其上的 cos位點的一個重要作用是識別噬菌體的外殼蛋白。DigestionLigationC) Packaging and infectFormation of a cosmid cloneLigation to cleaved cosmid vector molecules can produce vectortarget concatemers, resulting in a large exogenous DNA fragment flanked by cos sequences.采用柯斯質(zhì)粒作載體的困難① 載體自身只相當(dāng)于可以插入片段的 1/10左右，因此往往會出現(xiàn)載體同載體自身連接，結(jié)果在一個重組分子內(nèi)可有幾個柯斯質(zhì)粒載體連在一起
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