[理學(xué)]如何做好酶切-預(yù)覽頁(yè)
【正文】 下就可以保溫了。部分從耐熱菌制備的酶需要在37度以上的溫度反應(yīng)，如Taq I的最適溫度為65度，37度保溫，效率僅為前者的1/10。在使用高酶量的時(shí)候需要注意甘油的最終濃度不要超過(guò)5%，也就是說(shuō)10ul的體系，酶的用量不要超過(guò)1ul。鑒定酶的活性高低不是用您待切的DNA模板，也不是別的公司的酶來(lái)判定。我們公司銷售的SibEnzyme公司的酶，在分裝前嚴(yán)格檢驗(yàn)過(guò)，不合格的東西（很少）都退回原廠，所以不合格的產(chǎn)品是不會(huì)送到用戶手頭的。 還有一個(gè)問(wèn)題是有些時(shí)候DNA是從別人那里得到的，背景不清楚也造成困惑。仔細(xì)看看使用的酶對(duì)甲基化的敏感情況，或許能找到酶切效率低或根本不能酶切的根源。 6) 酶稀釋和添加方式是否正確：一般要求在最后加酶，但是對(duì)同時(shí)做多個(gè)相同反應(yīng)的時(shí)候，最后加酶有可能不很方便。 3．如何設(shè)定PCR引物的保護(hù)堿基？ 如果您想直接對(duì)PCR產(chǎn)物酶切，同時(shí)想獲得理想的酶切效果，一般情況下需要在酶切位點(diǎn)序列5’端方向增加額外的保護(hù)堿基。我個(gè)人認(rèn)為需要對(duì)PCR產(chǎn)物進(jìn)行酶切分析通常是為了或基因表型分析，由于Taq，Pfu等高溫聚合酶在酶切溫度（37度或更高）下，仍然保持一定的活性，高溫聚合酶所具有的聚合或無(wú)模板添A或外切修正的功能仍在一定的程度上表現(xiàn)出來(lái)，可能會(huì)影響到酶切產(chǎn)物末端的正確性。
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