ngs測(cè)序技術(shù)與分析流程圖-預(yù)覽頁
【正文】 自含有 20個(gè)堿基的 PCR 引物序列、 20個(gè)堿基的測(cè)序引物序列和 4個(gè)堿基的對(duì)照序列（ TACG），除此之外， B銜接子的 5’端還標(biāo)記有一個(gè)生物素基團(tuán)，供后續(xù)的分離合適的測(cè)序模板使用。第一代測(cè)序技術(shù) ? Sanger測(cè)序 1977年， 桑 格測(cè)定了第一個(gè)基因組序列，是噬菌體 X174的，全長 5375個(gè)堿基 ? Sanger法核心原理是：由于 ddNTP的 2’和 3’都不含羥基，其在 DNA的合成過程中不能形成磷酸二酯鍵，因此可以用來中斷 DNA合成反應(yīng)，在 4個(gè) DNA合成反應(yīng)體系中分別加入一定比例帶有放射性同位素標(biāo)記的 ddNTP（分為：ddATP,ddCTP,ddGTP和 ddTTP），通過凝膠電泳和放射自顯影后可以根據(jù)電泳帶的位置確定待測(cè)分子的 DNA序列 新一代測(cè)序 介紹 ? 三大測(cè)序平臺(tái)的前世今生 Lynx MPSS Solexa ABI SOLiD 454 Ion Torrent Helicos SMRT Illumina Solexa Roche 454 Polony Seq ABI Ion Torrent Pacific Biosciences Roche454 ? 454公司可謂新一代測(cè)序技術(shù)的奠基人。 ? 454測(cè)序原理 測(cè)序?qū)嶒?yàn)流程： ? 文庫制備：根據(jù)樣品的種類和實(shí)驗(yàn)?zāi)康?，將基因組 DNA/cDNA片段化處理至 400800bp間，經(jīng)末端修復(fù)與特異性接頭連接等修飾后變性處理回收單鏈的 DNA（ sstDNA） ； 然后和兩個(gè) 44個(gè)堿基長的銜接子（ adaptor） A、B進(jìn)行平端連接。整個(gè)片段文庫的擴(kuò)增平行進(jìn)行。然后將 PTP板放置在 GS FLX中，測(cè)序開始。$!(amp。 1 基本數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)， 比對(duì)參考序列 2 序列在 基因組上在分布 3 測(cè)序 深度 分析、隨機(jī)性評(píng)估和基因 差異表達(dá) 分析 4 新基因 預(yù)測(cè)，基因 可變剪接 鑒定和 基因融合 鑒
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