畢業(yè)論文巴西橡膠樹(shù)乙烯途徑中抑制因子ein3的western印跡-預(yù)覽頁(yè)
【正文】 Acrylamid Triscl 10% SDS 70181。l 1M Triscl 630181。每片葉片都用鑷子在其正反兩面進(jìn)行刮傷，刮傷完成之后兩株各取一片用鋁箔包裹保存于80度冰箱。提取完成后稱其重量配平后在14000rpm的離心機(jī)中離心10min。影響B(tài)radford 法的主要因素有甘油、乙酸、去污劑和一些堿性緩沖系統(tǒng)。尿素和β巰基乙醇會(huì)干擾BCA 法的測(cè)定, 所以BCA 法不適于含有尿素和β巰基乙醇的變性液中蛋白含量的測(cè)定。（4） 干燥后置于培養(yǎng)皿中，加入配置好的Esen fixing buffer在搖床上固定蛋白5min。（8） 取恢復(fù)室溫后的液體1ml在分光光度計(jì)中測(cè)OD612。 ，按照試劑配方配置一定量的上樣緩沖液，在各個(gè)樣品中加入等體積的上樣緩沖液混勻后在95度氣浴鍋中煮10min。 電泳完成后將兩塊膠分別拆下去掉濃縮膠后在其右上角切去一小塊膠以確定膠的正反面。（1）取膠：電泳完成后將膠取下后用去離子水沖洗。裝板全過(guò)程在盛有轉(zhuǎn)移液的培養(yǎng)皿中進(jìn)行，濾紙之間以及濾紙和PVDF膜要趕走所有的氣泡。第二天觀察經(jīng)過(guò)染色脫色后的凝膠上是否還有條帶，以確定轉(zhuǎn)膜是否成功。 ④TBS漂洗5min，加入含10%的脫脂奶粉的TBS封閉液在4度的環(huán)境下封閉過(guò)夜。 ②二抗清洗：用1TBS搖床清洗3次，每次20min。取二氨基聯(lián)苯胺40倍濃縮液、雙氧水40倍濃縮液、TBS40倍濃縮液各一滴于2ml試管中，加入2ml的去離子水震蕩使其混合均勻。首先，配置的標(biāo)準(zhǔn)濃度的牛血清蛋白液做標(biāo)準(zhǔn)曲線時(shí)，Esen method和BCA法測(cè)得的牛血清蛋白相同濃度的OD值接近，而B(niǎo)radford法把牛血清蛋白稀釋了20倍左右后所得OD值與另外兩種方法相差很大，說(shuō)明稀釋過(guò)程中操作不當(dāng)引起了濃度的誤差。通過(guò)十二烷基硫酸鈉聚丙烯酰胺凝膠電泳所得的凝膠染色脫色后與雙色預(yù)染寬分子量蛋白Marker的說(shuō)明書(shū)中的條帶大小進(jìn)行比對(duì)得出橡膠葉片總蛋白的大小介于40kD55kD之間。阿姆利,[J].云南熱作科技,1980,04:6068.[2]蔣菊生,[A]..中國(guó)科協(xié)2004年學(xué)術(shù)年會(huì)海南論文集[C].:,2004:5.[3]黃炎,郭慶水,徐立新,[J].安徽農(nóng)業(yè)科學(xué),2008,02:442445+456.[4]祁棟靈,王秀全,張志揚(yáng),[J].熱帶農(nóng)業(yè)科學(xué),2013,02:7987.[5]潘延云,郭毅,趙軍峰,[J].浙江大學(xué)學(xué)報(bào)(農(nóng)業(yè)與生命科學(xué)版),2003,04:101108.[6]Reid, M. S. and pratt, H. K. Effects of ethylene on potato tuber respiration. Plant Physiol. 1972, 49: 252255[7]范思偉,[J].熱帶作物研究,1991,03:6977.[8]楊少瓊,[J].熱帶作物研究,1982,04:1113.[9]Chao Q, Rothenberg M, Solano R, et al. Activation of the ethylene gas response pathway in Arabidopsis by the nuclear protein ETHYLENEINSENSITIVE3 and related proteins. Cell, 1997, 89: 1133–1144[10]Yamasaki K, Kigawa T, Inoue M, et al. Solution structure of the major DNAbinding domain of Arabidopsis thaliana ethyleneinsensitive3like3. J Mol Biol, 2005, 348: 253–264[1] Toyama H , Nishibayashi E , Saeki M, et required for thecatalyt ic reaction of PqqC/ D which produces pyrroloquinoline quinine[ J] .Biochem Biophys Res Commun , 2007 , 354(1):290295 .[2]Springer A L , Ramamoorthi R, Lidstrom Marye E .Characterization andnucleotide sequence of pqqE and pqqF in Methylobacterium extorquensAM1[ J] .J Bacteriol , 1996 ,178(7):21542157.。翟老師以認(rèn)真、負(fù)責(zé)、嚴(yán)謹(jǐn)?shù)慕虒W(xué)態(tài)度讓我受益匪淺。最后，我要感謝大學(xué)里所有教導(dǎo)我的每一位老師和關(guān)心過(guò)我的每一位同學(xué)同學(xué)，感謝在背后默默支持我的家人，感謝你們?cè)谖覍W(xué)習(xí)和成長(zhǎng)過(guò)程中給予的巨大幫助和
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