【正文】 、Phe、Pro）；（3）(ArgCysTrp、Tyr)；（4）(CysPhe)。 SSAlaCysPheProLysArgTrpCysArgArgVal_CysS CysTyrCysPheCys解：嗜熱菌蛋白酶作用專一性較差，根據(jù)題中已知條件： （2）由鏈1序列可得該肽段序列為：PheProLysArg；一個(gè)十肽的氨基酸分析表明其水解液中存在下列產(chǎn)物：NH4+ GluTyrArgMetProLysSerPhe并觀察下列事實(shí)：（1）用羧肽酶A和B處理該十肽無(wú)效；（2）胰蛋白酶處理產(chǎn)生兩各四肽和游離的Lys；（3）梭菌蛋白酶處理產(chǎn)生一個(gè)四肽和一個(gè)六肽；（4）溴化氫處理產(chǎn)生一個(gè)八肽和一個(gè)二肽，用單字母符號(hào)表示其序列位NP；（5）胰凝乳蛋白酶處理產(chǎn)生兩個(gè)三肽和一個(gè)四肽，N末端的胰凝乳蛋白酶水解肽段在中性pH時(shí)攜帶1凈電荷，在pH12時(shí)攜帶3凈電荷；（6）一輪Edman降解給出下面的PTH衍生物：（圖略）寫出該十肽的氨基酸序列。 [YRMP]解：胰蛋白酶酶專一水解Lys和Arg殘基的羧基參與形成的肽鍵，故該四肽中含Lys或Arg；一肽段在280nm附近有強(qiáng)光吸收且Pauly反應(yīng)和坂口反應(yīng)（檢測(cè)胍基的）呈陽(yáng)性，說明該肽段含Tyr和Arg；溴化氰專一斷裂Met殘基的羧基參加形成的肽鍵，又因生成了與茚三酮反應(yīng)呈黃色的氨基酸，故該肽段為MetPro；所以該四肽的氨基酸組成為TyrArgMetPro，即YRMP。如果你打算向LysAla加入一個(gè)亮氨酸殘基使成三肽，可能會(huì)掉進(jìn)什么樣的“陷坑”？第五章此外紫外差光譜、熒光和熒光偏振、圓二色性、核磁共振和重氫交換等被用于研究溶液中的蛋白質(zhì)構(gòu)像。就其主鏈而言，由于肽鏈?zhǔn)怯啥鄠€(gè)相鄰的肽平面構(gòu)成的，主鏈上只有α碳的二平面角Φ和Ψ能自由旋轉(zhuǎn)，但也受到很大限制。最常見的二級(jí)結(jié)構(gòu)元件有α螺旋、β轉(zhuǎn)角等。α角蛋白是毛、發(fā)、甲、蹄中的纖維狀蛋白質(zhì)，它幾乎完全由α螺旋構(gòu)成的多肽鏈構(gòu)成。大多數(shù)β折疊股和β折疊片都有右手扭曲的傾向，以緩解側(cè)鏈之間的空間應(yīng)力（steric strain）。彈性蛋白是結(jié)締組織中另一主要的結(jié)構(gòu)蛋白質(zhì)。蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)一般被分為4個(gè)組織層次（折疊層次），一級(jí)、二級(jí)、三級(jí)和四級(jí)結(jié)構(gòu)。超二級(jí)結(jié)構(gòu)有3中基本形式：αα（螺旋束）、βαβ（如Rossman折疊）、ββ（β曲折和希臘鑰匙拓?fù)浣Y(jié)構(gòu)）。球狀蛋白質(zhì)可根據(jù)它們的結(jié)構(gòu)分為全α結(jié)構(gòu)蛋白質(zhì)、α、β結(jié)構(gòu)蛋白質(zhì)、全β結(jié)構(gòu)蛋白質(zhì)和富含金屬或二硫鍵蛋白質(zhì)等。球狀蛋白質(zhì)種類很多，結(jié)構(gòu)也很復(fù)雜，各有自己獨(dú)特的三維結(jié)構(gòu)。有些變性是可逆的。蛋白質(zhì)折疊不是通過隨機(jī)搜索找到自由能最低構(gòu)象的。習(xí)題1.（1）計(jì)算一個(gè)含有78個(gè)氨基酸的α螺旋的軸長(zhǎng)。完全伸展的α螺旋長(zhǎng)度約為：（78247。試計(jì)算：α螺旋占該多肽鏈的百分?jǐn)?shù)。試解釋這種差別的原因。ψ=+120176。時(shí)可知該螺旋為左手性。]。該蛋白質(zhì)的折疊形式在25℃時(shí)是否穩(wěn)定？[（a）W=2200=1060；（b）ΔS折疊= kj/（K?mol）（c）ΔH折疊100（5 kj/mol）=500 kj/mol；注意，這里我們沒有考慮在螺旋末端處某些氫鍵不能形成這一事實(shí)，但考慮與否差別很小。[在亞基亞基相互作用中疏水相互作用經(jīng)常起主要作用，參與四聚體B4的亞基亞基相互作用的表面可能比單體A的對(duì)應(yīng)表面具有較多的疏水殘基。殘基2023很可能形成β轉(zhuǎn)角]，完全暴露在水環(huán)境中和完全埋藏在蛋白質(zhì)分子非極性內(nèi)部的兩種多肽片段，哪一種更容易形成α螺旋？為什么？[埋藏在蛋白質(zhì)的非極性內(nèi)部時(shí)更容易形成α螺旋。用β巰基乙醇（能還原二硫橋）處理時(shí)，大的失去催化能力，并且它的沉降速度減小，但沉降圖案上只呈現(xiàn)一個(gè)峰（參見第7章）。關(guān)于此蛋白的結(jié)構(gòu)，你能做出什么結(jié)論？[該毒素蛋白由兩條不同的多肽鏈通過鏈間二硫鍵交聯(lián)而成，每條多肽鏈的相對(duì)分子質(zhì)量各在13000左右。問它的最高對(duì)稱性是什么？[（a）C4和D2，C4是通過異種相互作用締合在一起，D2是通過同種相互作用締合在一起，（b）C2因?yàn)槊總€(gè)αβ二聚體是一個(gè)不對(duì)稱的原聚體]。[（1）有缺陷復(fù)合物的平均頻率是6000108=6105][（2）由于有缺陷的二聚體可被剔除，因此有缺陷復(fù)合物的平均率只是最后階段的操作次數(shù)（5此操作裝配6個(gè)亞基）乘以錯(cuò)誤頻率，即：5108。蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)與功能的關(guān)系提要肌紅蛋白（Mb）和血紅蛋白（Hb）是脊椎動(dòng)物中的載氧蛋白質(zhì)。它是一個(gè)取代的卟啉，在其中央有一個(gè)鐵原子。Mb內(nèi)部幾乎都是非極性殘基。此近側(cè)His（H8）占據(jù)5個(gè)配位位置。對(duì)單體蛋白質(zhì)如Mb來說，被配體（如）O2占據(jù)的結(jié)合部位的分?jǐn)?shù)是配體濃度的雙曲線函數(shù)，如Mb的氧集合曲線。血紅蛋白以兩種可以相互轉(zhuǎn)化的構(gòu)象態(tài)存在，稱T（緊張）和R（松弛）態(tài)。氧與血紅蛋白的結(jié)合是別構(gòu)結(jié)合行為的一個(gè)典型例證。氧與一個(gè)血紅素結(jié)合有助于氧與同一分子中的其他血紅素結(jié)合。第三，血紅蛋白對(duì)O2的親和力還受3二磷酸甘油酸（BPG）調(diào)節(jié)，BPG是一個(gè)負(fù)電荷密度很高的小分子。 導(dǎo)致一個(gè)蛋白質(zhì)中氨基酸改變的基因突變能產(chǎn)生所謂分子病，這是一種遺傳病。純合子的病人出現(xiàn)慢性貧血而死亡。所有的細(xì)胞都能產(chǎn)生MHC蛋白，它們?cè)诩?xì)胞表面展示宿主（自我）肽或抗原（非自我）肽。人類具有5個(gè)類別的免疫球蛋白，每一類別的生物學(xué)功能都是不同的。結(jié)合經(jīng)常涉及IgG的構(gòu)象變化，以便域抗原誘導(dǎo)契合。肌球蛋白是由纖維狀的尾和球狀的頭組成的棒狀分子，在肌肉中倍組織成粗絲。因此肌球蛋白沿肌動(dòng)蛋白細(xì)絲滑動(dòng)。（a）哪個(gè)蛋白質(zhì)對(duì)配體X的親和力更高？（b）將這兩個(gè)蛋白質(zhì)的Kd轉(zhuǎn)換為結(jié)合常數(shù)Ka。 肺中[100 torr p（O2）]結(jié)合的氧有百分之多少輸送給組織[30 torr p（O2）]？（c） ，可利用方程（615）Y/（1Y）=[ p（O2）/ P50]n計(jì)算Y（血紅蛋白氧分?jǐn)?shù)飽和度）。并說出協(xié)同氧結(jié)合對(duì)血紅蛋白輸氧效率的影響。 如果這樣的血用于輸血可能會(huì)產(chǎn)生什么后果？[貯存過時(shí)的紅血球經(jīng)酵解途徑代謝BPG。為什么HbA具有這一效應(yīng)？[去氧HbA含有一個(gè)互補(bǔ)部位，因而它能加到去氧HbS纖維上。（a）結(jié)合的標(biāo)準(zhǔn)自由能（25℃和pH7時(shí)）是多少？（b）此Fab的親和力結(jié)合常數(shù)是多少？（c）從該復(fù)合體中釋放半抗原的速度常數(shù)為120S1。（b）根據(jù)Scatchard方程，利用下列數(shù)據(jù)作圖求出抗體抗原反應(yīng)的n和Ka值。 （a） 各種蛋白質(zhì)都有自己特定的等電點(diǎn)。測(cè)定蛋白質(zhì)相對(duì)分子質(zhì)量（Mr）的最重要的方法是利用超速離心機(jī)的沉降速度法和沉降平衡法。SDS聚丙乙酰胺凝膠電泳（PAEG）用于測(cè)定單體蛋白質(zhì)或亞基的Mr。分離蛋白質(zhì)混合物的各種方法主要根據(jù)蛋白質(zhì)在溶液中的下列性質(zhì)：（1）分子大??；（2）溶解度；（3）電荷；（4）吸附性質(zhì)；（5）對(duì)配體分子特異的生物學(xué)親和力。移動(dòng)界面電泳、各種形式的區(qū)帶電泳，特別是圓盤凝膠電泳、毛細(xì)血管電泳以及等電聚焦具有很高的分辨率。如果制品是純的，在這些分析的圖譜上只呈現(xiàn)一個(gè)峰或一條帶。%=13100 （2）a=108cm/s2；（3）a=233061g]解：（1）ω=580002π/60=（3）108/=23316326,當(dāng)溫度校正為20℃，溶劑校正為水時(shí)擴(kuò)散系數(shù)（）107cm2/（）。計(jì)算該化合物的有效分配系數(shù)（Keff），也稱容量因子（capacity）。[52000]，下述蛋白質(zhì)在電場(chǎng)中相哪個(gè)方向移動(dòng)，即向正極、負(fù)極還是不動(dòng)？（根據(jù)表72的數(shù)據(jù)判斷。帶負(fù)電，向正極移動(dòng)；帶正電，向負(fù)極移動(dòng)；帶負(fù)電，向正極移動(dòng)；凈電荷為零，不移動(dòng)；pH=11對(duì)適當(dāng)?shù)目瞻诇y(cè)定595nm波長(zhǎng)處的光吸收（A595）。 （）。酶的化學(xué)本質(zhì)除有催化活性的RNA分子之外都是蛋白質(zhì)。按規(guī)定每種酶都有一個(gè)習(xí)慣名稱和國(guó)際系統(tǒng)名稱，并且有一個(gè)編號(hào)。用“誘導(dǎo)契合說”解釋酶的專一性已被人們所接受。酶活力是指在一定條件下酶催化某一化學(xué)反應(yīng)的能力，可用反應(yīng)初速率來表示。有催化分子內(nèi)和分分子間反應(yīng)的核酶。根據(jù)酶催化的過度態(tài)理論，設(shè)計(jì)各種過度態(tài)類似物作為半抗原免疫動(dòng)物，篩選具有催化活性的單抗。酶工程是將酶學(xué)原理與化學(xué)工程技術(shù)及基因重組技術(shù)有機(jī)結(jié)合而形成的新型應(yīng)用技術(shù)，是生物工程的支柱。？酶的專一性有哪些？如何解釋酶作用的專一性？研究酶的專一性有何意義？答：酶的專一性是指酶對(duì)催化的反應(yīng)和反映物有嚴(yán)格的選擇性。它有利于闡明生物體內(nèi)有序的代謝過程，酶的作用機(jī)制等。調(diào)節(jié)酶的濃度：主要有2種方式：誘導(dǎo)或抑制酶的合成；調(diào)節(jié)酶的降解；（2）反饋抑制調(diào)節(jié)酶活性：許多小分子物質(zhì)的合成是由一連串的反應(yīng)組成的，催化此物質(zhì)合成的第一步的酶，往往被他們終端產(chǎn)物抑制；（4）其他調(diào)節(jié)方式：通過別構(gòu)酶、酶原的激活、酶的可逆共價(jià)修飾和同工酶來調(diào)節(jié)酶活性。它們的區(qū)別只在于它們與脫輔酶結(jié)合的牢固程度不同。分別利用6來表示。編號(hào)之間冠以EC（Enzyme Commision）。隨時(shí)間的延長(zhǎng)，酶促反應(yīng)中底物濃度降低，產(chǎn)物濃度增加，加速逆反應(yīng)的進(jìn)行，產(chǎn)物對(duì)酶抑制或激活作用以及隨時(shí)間的延長(zhǎng)引起酶本身部分分子失活等，酶促反應(yīng)速率降低，因此測(cè)定活力，應(yīng)測(cè)定酶促反應(yīng)的初速率，從而避免上述種種復(fù)雜因素對(duì)反應(yīng)速率的影響。因此很可能RNA早于蛋白質(zhì)和DNA，是生命起源中首先出現(xiàn)的生物大分子，而一些有酶活性的內(nèi)含子可能是生物進(jìn)化過程中殘存的分子“化石”。 固定化酶：將水溶性酶用物理或化學(xué)方法處理，使之成為不溶于水的、但仍具有酶活性的狀態(tài)。 寡聚酶：由兩個(gè)以上亞基組成的酶。 （7） 反饋抑制：許多小分子物質(zhì)的合成是由一聯(lián)串的反應(yīng)組成的，催化此物質(zhì)生成的第一步的酶，往往被它們終端產(chǎn)物抑制。多酶復(fù)合體：由幾種酶靠非共價(jià)鍵彼此嵌合而成。[]解：（1）比活力=[107 mol/L]解：1/610440247。問：（1）酶mg酶在每秒鐘內(nèi)水解多少mol 底物？[105mol]。（2）1103/1201036=5108 mol另取2ml酶液，若以每分鐘產(chǎn)生1μg 酪氨酸的酶量為1個(gè)活力單位計(jì)算，根據(jù)以上數(shù)據(jù)，求出：（1）1ml酶液中所含蛋白質(zhì)量及活力單位。（225/25）= （3）247。 （25/25）247。[比活力：180U/mg蛋白質(zhì)，百分產(chǎn)量：17%，純化倍數(shù)：9倍]活力單位/（U/ml）200810（2）8105247。（200/10）=9第九章化學(xué)動(dòng)力學(xué)中在研究化學(xué)反應(yīng)速率與反應(yīng)無(wú)濃度的關(guān)系時(shí)，常分為一級(jí)反應(yīng)、二級(jí)反應(yīng)及零級(jí)反應(yīng)。kcat/Km常用來比較酶催化效率的參數(shù)。競(jìng)爭(zhēng)性抑制可以通過增加底物濃度而解除，其動(dòng)力學(xué)常數(shù)Kˊm變大，Vmax不變；非競(jìng)爭(zhēng)性抑制Km不變，Vˊmax變??；反競(jìng)爭(zhēng)性抑制Kˊm及Vˊmax均變小。研究酶的抑制作用是研究酶的結(jié)構(gòu)與功能、酶的催化機(jī)制、闡明代謝途徑以及設(shè)計(jì)新藥物的重要手段。[80%]解：fES=[S]/（Km+[S]）=100103/(102+100103)=80%→P測(cè)得如下數(shù)據(jù)：[S]/molL1105103（1） 試計(jì)算：（1）競(jìng)爭(zhēng)性抑制劑，（2）非競(jìng)爭(zhēng)性抑制劑，（3）反競(jìng)爭(zhēng)性抑制劑的濃度均為5104 molL1時(shí)的酶催化反映速率？這3中情況的Ki值都是3104 molL1，（4）上述3種情況下，抑制百分?jǐn)?shù)是多少？[（1） min1，24%；（2） min1，%；（3） min1，%]解：（1）競(jìng)爭(zhēng)性抑制劑的米氏方程為：V=Vmax[S]/(Km(1+[I]/Ki)+[S])代入數(shù)據(jù)得：V= min1i%=（1a）100%=（1Vi/Vo）100%=24%（2）非競(jìng)爭(zhēng)性抑制劑的米氏方程為：V=Vmax[S]/((Km+[S])(1+[I]/Ki))代入數(shù)據(jù)得：V= min1i%=（1a）100%=（1Vi/Vo）100%=%（3）反競(jìng)爭(zhēng)性抑制劑的米氏方程：V=Vmax[S]/(Km+[S](1+[I]/Ki))代入數(shù)據(jù)得：V= min1i%=（1a）100%=（1Vi/Vo）100%=%6．今制得酶濃度相同、底物濃度不同的幾個(gè)反應(yīng)混合液，并測(cè)得反應(yīng)初速率，數(shù)據(jù)見下表。V/μmolL1min11041101046210538105[無(wú)抑制劑時(shí)Km=105 molL1，Vmax=50μmolL1min1，有抑制劑時(shí)：Km=105 molL1，Vmax=50μmolL1min1]（2）EI復(fù)合物的解理常數(shù)Ki。 （1）Km；（2）Vmax；（3）kcat/Km；(4)轉(zhuǎn)換數(shù)。胰凝乳蛋白酶結(jié)合第五比DNA聚合酶有更高的親和性。 （3） 試問：底物濃度分別為102molL103molL1和106molL1時(shí)的反應(yīng)初速率是多少？[1107 molL1min1，5108 molL1min1]解：∵Km=1106molL1《[S]= ∴V=Vmax=將題中數(shù)據(jù)代入米氏方程：V=Vmax[S]/(Km+[S])得：設(shè)[S]=xKmV=Vmax?xKm/((x+1)K