凝膠層析分離血紅蛋白與魚(yú)精蛋白-預(yù)覽頁(yè)
【正文】 形成表面，其中一個(gè)相的物質(zhì)或溶解在其中的溶質(zhì)在此表面密集現(xiàn)象稱(chēng)為吸附，利用吸附劑對(duì)不同物質(zhì)具有不同吸附力使混合物得到分的現(xiàn)象就叫吸附層析。紙層析是最廣泛的一種分配層析。 相關(guān)的概念（一）： 分配系數(shù)：當(dāng)一種溶質(zhì)分布在兩個(gè)互不相溶的溶劑中時(shí)，它在固定相和流動(dòng)相兩相內(nèi)的濃度之比是個(gè)常數(shù)，稱(chēng)為分配系數(shù) (Kd)。 Rf = 色斑中心至原點(diǎn)中心的距離 溶劑前緣至原點(diǎn)中心的距離 親和層析法 ? 親和層析（ Affinity Chromatography）是利用生物分子間專(zhuān)一性親和力而進(jìn)行分離的一種層析技術(shù)。 ? 親和層析純化過(guò)程簡(jiǎn)單、迅速，且分離效率高。 ? 離子交換層析的固定相是離子交換劑，它是由一類(lèi)不溶于水的惰性高分子聚合物基質(zhì)通過(guò)一定的化學(xué)反應(yīng)共價(jià)結(jié)合上某種電荷基團(tuán)形成的。平衡離子是結(jié)合于電荷基團(tuán)上的相反離子，它能與溶液中其它的離子基團(tuán)發(fā)生可逆的交換反應(yīng)。 凝膠層析的原理 1. 分子大小不同混合物上柱； 2. 洗脫開(kāi)始 ， 小分子擴(kuò)散進(jìn)人凝膠顆粒內(nèi) ， 大分子被排阻于顆粒之外； 3. 大小分子分開(kāi)： 4. 大分子行程較短 ， 已洗脫出層析柱 ， 小分子尚在進(jìn)行中 。 ? 基質(zhì)體積是指凝膠顆粒實(shí)際骨架體積。 樣品的量 洗脫體積 實(shí)驗(yàn)原理 由于 Hb（紅色，分子量 64500） 與二硝苯 魚(yú)精蛋白 （黃色，分子量 202212022）的分子量不同 ， 通過(guò)交聯(lián)葡聚糖凝膠 G50（ sephadex）層析柱用蒸餾水洗脫分離。交聯(lián)度越大，網(wǎng)孔越小，吸水膨脹就越小。 X數(shù)字越大，交聯(lián)度越小，網(wǎng)孔越大，適用于分離高分子生化產(chǎn)品?？捎貌０魯嚢枋贡砻嫫秸? 3. 平衡：反復(fù)加蒸餾水 ,平衡 10分鐘 .使蒸餾水維持在 34cm高度； 4. 加樣：待蒸餾水流至柱平面時(shí)（不可使柱平面干掉），馬上靠近柱平面小心滴加4滴樣品（注意盡量不要使床面攪動(dòng)），待樣品浸入到凝膠中后馬上加入 3－ 4滴蒸餾水 (動(dòng)作輕柔 )，反復(fù)兩次，然后加大量蒸餾水洗脫； 5. 收集樣品：樣品一旦加入后馬上用量筒收集流出液，注意向柱床上不斷加水，記錄紅色流出一半時(shí)的毫升數(shù)（血紅蛋白的 Ve，也即 Vo），繼續(xù)收集，記錄黃色流出一半時(shí)體積（魚(yú)精蛋白 Ve）； 實(shí)驗(yàn)操作
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