【正文】 、甲苯取液顯色數(shù)據(jù)測定及處理37℃恒溫中培養(yǎng)24h測定土壤蔗糖酶活性滴定分組注入H2O2測定過氧化氫酶活性測定土壤脲酶活性原料制備水稻秸稈烘干、粉碎、制炭、過篩磚紅壤風(fēng)干、過篩有機肥烘干、粉碎、過篩分組培養(yǎng)土壤中加入2%有機肥和5%生物炭土壤中加入2%有機肥和2%生物炭純土壤培養(yǎng)，不加有機肥，不加生物炭土壤中加入2%有機肥，不加生物炭土壤中加入2%%生物炭38℃恒溫下培養(yǎng)5h取液顯色數(shù)據(jù)測定及處理分析數(shù)據(jù)，篩選單位土壤最適生物炭施用量 技術(shù)路線2 實驗部分 實驗材料的準(zhǔn)備實驗主要研究添加不同量水稻秸稈生物炭對施用有機肥料的土壤中重要酶（蔗糖酶、過氧化氫酶、脲酶）活性的影響。把馬弗爐調(diào)整到500℃，將粉碎后的水稻秸稈粉碎干粉放入鐵盒中，放入馬沸爐中加熱分解。 土壤的處理方法將采集回來的土壤風(fēng)干，過2mm土壤篩，儲存?zhèn)溆谩?土壤預(yù)培養(yǎng)實驗將所需土壤的含水量調(diào)整到約田間持水量的60%（一般加水量為土壤量的15%到20%之間，以不粘結(jié)但很濕潤為準(zhǔn)），將土壤容器用塑料薄膜封蓋以免水分過快損失，將塑料薄膜用針扎一些小孔，以保持氣體流通，保證土壤重要酶的活性。雙氧水在常溫下易分解成H2O和O2，故該溶液需要現(xiàn)配現(xiàn)用。稱取5g土壤，置于150ml三角瓶中，%過氧化氫。破碎大顆粒后，密封處理，室溫下振蕩培養(yǎng)。中生物炭組處理：培養(yǎng)等量的土壤，含有2%的有機肥和2%的生物炭。稱取5g土壤，置于150ml三角瓶中，%過氧化氫。，做如下處理：培養(yǎng)結(jié)束后，立即向各三角瓶中注入5ml mol/L的硫酸終止反應(yīng)，過濾。 注意事項實驗需每隔1周采用重量法測定含水量并補充水分1次，使各處理的含水量保持一致。實驗需要重復(fù)3次。在培養(yǎng)開始后的第10天、第20天、第35天、第50天測定土壤脲酶活性。純土壤組處理：培養(yǎng)一定量的純土壤，不加任何有機肥和生物炭。無生物炭組處理：培養(yǎng)等量的土壤，含有2%的有機肥培養(yǎng)，不加生物炭。低生物炭組處理：培養(yǎng)等量的土壤，含有2%%的生物炭。中生物炭組處理：培養(yǎng)等量的土壤，含有2%的有機肥和2%的生物炭。高生物炭組處理：培養(yǎng)等量的土壤，含有2%的有機肥和5%的生物炭。上述處理在38℃恒溫下培養(yǎng)5h后，做如下處理：培養(yǎng)結(jié)束后，向溶液中加入20ml 2mol/L KCl，振蕩10min，過濾。 生物炭對土壤蔗糖酶活性影響測定 實驗設(shè)置實驗使用一種土壤（磚紅壤），設(shè)置三個實驗組（低生物炭組：培養(yǎng)一定量的土壤，含有一定量的有機肥和少量的生物炭；中生物炭組：培養(yǎng)等量的土壤，含有等量的有機肥和中量（2%)的生物炭；高生物炭組：培養(yǎng)等量的土壤，含有等量的有機肥和高量（5%)的生物炭），一個純土壤組（添加等量土壤但不添加任何有機肥和生物炭），一個無生物炭組（添加等量土壤和有機肥但不添加任何生物炭），每組實驗重復(fù)3次，共35n？個樣。每隔3天，補水一次。取5ml1/15M磷酸氫二鈉溶液和95ml1/15M磷酸二氫鉀溶液均勻混合，即得100ml 。純土壤組處理：培養(yǎng)一定量的純土壤，不加任何有機肥和生物炭。稱取2g土樣，置于50ml三角瓶中，注入15ml 8%蔗糖溶液，5ml ，搖勻混合物。將三角瓶密封，置于37℃恒溫中培養(yǎng)。高生物炭組處理：培養(yǎng)等量的土壤，含有2%的有機肥和5%的生物炭。用葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)溶液做標(biāo)準(zhǔn)曲線，取濾液加入顯色劑加熱，待其顯色后，用蒸餾水稀釋，并在分光光度計上于波長508nm處進行比色。幾乎在所有生物體內(nèi)都有過氧化氫酶，在某些細(xì)菌里，其數(shù)量約為細(xì)胞干重的1%。 操作步驟標(biāo)準(zhǔn)含量測定：取對照組濾液20ml。脲酶是一種高度專性的酶，能酶促尿素的水解，生成二氧化碳和氨。該溶液需要現(xiàn)用現(xiàn)配。取濾液1ml置于50ml容量瓶中（標(biāo)準(zhǔn)曲線也是取1ml置于50ml容量瓶中），注入入10ml蒸餾水，4ml苯酚鈉溶液，3ml次氯酸鈉溶液，混勻。 溶液中葡萄糖含量的測定方法實驗用3,5二硝基水楊酸比色法測定溶液中葡萄糖含量 適用范圍適于成批樣品測定，且在測定土壤蔗糖酶活性時，溶液為在酸性介質(zhì)中，均以蔗糖為基質(zhì)，蔗糖液濃度范圍為520%。標(biāo)準(zhǔn)葡萄糖溶液：，）中。將容量瓶移至自來水流下冷卻3min。3 結(jié)果與分析 生物炭對土壤主要酶活性的影響 生物炭對土壤過氧化氫酶活性的影響圖1 不同量生物炭對有機肥土壤過氧化氫酶活性的影響Fig. 1 Different Amounts of Biochar on Soil Organic Fertilizer Over the Activity of Hydrogen Peroxide由圖1可知，隨著時間變化，純土壤中過氧化氫酶活性會先上升后緩慢降低的變化；施用有機肥會對過氧化氫酶活性有一定的促進作用，但在10d之后其總體活性也會不斷降低；在施用有機肥土壤中加入低量（%)生物炭，過氧化氫酶活性在相同時間段里相對于未加生物炭的施用有機肥土壤雖有所變化，但從整個時間段的情況來看，其活性變化影響不是很大；在施用有機肥土壤中加入中量（2%)生物炭，從第10d、第20d、第35d、第50d的數(shù)據(jù)來看，過氧化氫酶活性相對于未加生物炭的施用有機肥土壤總體上提高了5%～20%；在施用有機肥土壤中加入高量（5%)生物炭，從第10d、第20d、第35d、第50d的數(shù)據(jù)來看，過氧化氫酶活性相對于未加生物炭的施用有機肥土壤總體上提高了10%～40%。在施用有機肥土壤中加入高量（5%)生物炭，雖開始土壤脲酶活性增強幅度相對于低量（%)、中量（2%)生物炭的環(huán)境下明顯，但對脲酶活性增強幅度影響不斷上升，在第35d后超過加入低量（%)、中量（2%)生物炭的環(huán)境下的脲酶活性。在純土壤和施用有機肥土壤的環(huán)境中，從初始時間到第35d，土壤中生物酶活性達到峰值，隨后開始下降，甚至低于初始值，但加入生物炭后情況有所改變，且隨加入生物炭量增多而增強。隨著生物炭研究的開展，會對這些現(xiàn)象的改善產(chǎn)生積極作用。其中，對脲酶的活性影響最大，其活性在整個時間段增強了130%左右；蔗糖酶次之，其活性在整個時間段增強50%左右；對過氧化氫酶的活性影響幅度最低，只有10%左右。這說明生物炭能增強土壤重要酶的活性，但對其提升量有所限值。在施用有機肥土壤中施加生物炭不會對土壤溫度產(chǎn)生太大影響，但能夠顯著地改變地土壤中的含水量，這將會對土壤中的微生物產(chǎn)生積極的影響[11]。在今后，對生物炭利用的研究仍需進一步深入開展。（2）雖然，目前的研究表明，生物炭的利用存在的諸多不確定因素，但其在農(nóng)業(yè)、環(huán)境、能源等方面產(chǎn)生的積極作用是顯而易見的。 Biochemistry, 2011, 43:18121836.[17] Dempster D N, Gleeson D B, Solaiman Z M, et al. Decreased soil microbial biomass and nitrogen mineralisation with Eucalyptus biochar addition to a coarse textured soil[J]. Plant and Soil, 2012, 354:311324[18] Warnock D D, Mummey D L, Mcbride B, et al. Influences of nonherbaceous biochar on arbuscular mycorrhizal fungal abundances in roots and soils: Results from growthchamber and field experiments[J]. Applied Soil Ecology, 2010, 46:450456.[19] ]陳心想,耿增超,王森,趙宏飛. 施用生物炭后塿土土壤微生物及酶活性變化特征[J]. 農(nóng)業(yè)環(huán)境科學(xué)學(xué)報,2014,04:751758.[20] 黃超,劉麗君,章明奎. 生物質(zhì)炭對紅壤性質(zhì)和黑麥草生長的影響[J]. 浙江大學(xué)學(xué)報(農(nóng)業(yè)與生命科學(xué)版),2011,04:439445.[21] [J].化學(xué)工程師,2010,12:2124.致 謝附錄