【正文】 主代種子庫(kù) II 工作種 子庫(kù) III 三、生產(chǎn)工藝 減少或增加工藝步驟 II 病毒滅活方法變更 I 培養(yǎng)時(shí)間變更 II 分離、純化方法變更 II 參數(shù)變更 II 緩沖液 III 生產(chǎn)規(guī)模改變 II 四、配制 防腐劑 II 佐劑（新佐劑除外） II 賦型劑 II 穩(wěn)定劑 II 稀釋劑（新稀釋劑除外） III 五、成品 檢定方法 I 質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn) I 六、主要生產(chǎn)設(shè)備（如消毒、凍干、分裝、發(fā) 酵罐血液制品生產(chǎn) I 用離心機(jī)、壓濾機(jī)） 一般生產(chǎn)設(shè)備 II ─────────────────────────────────────── （二）生產(chǎn)過(guò)程變更均應(yīng)進(jìn)行相關(guān)的技術(shù)評(píng)價(jià)，并應(yīng)進(jìn)行驗(yàn)證。 4．生產(chǎn)工 藝部分變更，如增加、減少分離步驟或由精制改為柱層析 * 變更原因說(shuō)明； * 工藝驗(yàn)證資料； * 連續(xù) 3 批產(chǎn)品質(zhì)量分析資料，包括生產(chǎn)各關(guān)鍵階段中間品及終產(chǎn)品的分析、生物學(xué)檢測(cè)； * 兩種工藝條件下產(chǎn)品主要有效成分生物有效性和質(zhì)量的比較及穩(wěn)定性研究； * 應(yīng)根據(jù)生產(chǎn)工藝變更的具體情況，進(jìn)行必要的安全、有效性研究，必要時(shí)進(jìn)行臨床試驗(yàn)。 8．緩沖液、參數(shù)改變； * 變更原因及變更前后緩沖液組成對(duì)比； * 變更前后主要有效成分生物學(xué)變化數(shù)據(jù)資料； * 連續(xù) 3 批產(chǎn)品質(zhì)量分析資料，包括生產(chǎn)各關(guān)鍵階段中間品及終產(chǎn)品的分析、生物學(xué)檢測(cè)及穩(wěn)定性研究資料； * 應(yīng)進(jìn)行適當(dāng)?shù)呐R床試驗(yàn)。如果將載體疫苗和偶聯(lián)疫苗的載體菌或偶聯(lián)的載體成分所引起的疾病也作為其適應(yīng)癥時(shí)，則載體疫苗和偶聯(lián)疫苗也屬于聯(lián)合疫苗。 一、聯(lián)合疫苗研究開(kāi)發(fā)中應(yīng)考慮的問(wèn)題 聯(lián)合疫苗的研發(fā)過(guò)程中，應(yīng)對(duì)聯(lián)合后疫苗各組分間的相互作用，以 及防腐劑、佐劑和非活性成分等對(duì)聯(lián)合后活性成分的影響等進(jìn)行研究。因此，在開(kāi)展臨床試驗(yàn)前，應(yīng)對(duì)聯(lián)合疫苗中各組分間的相容性進(jìn)行驗(yàn)證。因此，應(yīng)當(dāng)測(cè)定組分在單價(jià)時(shí)和聯(lián)合時(shí)是否有恢復(fù)變異的趨勢(shì)。對(duì)于未被吸附（游離）的組分在配制后吸附情況，例如未被吸附的組分是否會(huì)被吸附；已吸附的組分是否會(huì)被解離下來(lái)，即研究存放時(shí)間對(duì)佐劑吸附抗原的影響等。由于疫苗的有效期是從成品的效力試驗(yàn)開(kāi)始計(jì)算的，所以還應(yīng)考慮以下三個(gè)方面對(duì)疫苗有效期的影響， 即生產(chǎn)過(guò)程中和配制前每一組分的保存時(shí)間、效力試驗(yàn)開(kāi)始前后的聯(lián)合疫苗的保存時(shí)間。 二、聯(lián)合疫苗生產(chǎn)中應(yīng)考慮的問(wèn)題 生產(chǎn)過(guò)程中應(yīng)考慮的主要問(wèn)題是生產(chǎn)的一致性，即生產(chǎn)的穩(wěn)定性，應(yīng)證明在已確定的生產(chǎn)條件下生產(chǎn)出的產(chǎn)品是穩(wěn)定和一致的 。采用這種方式配制可減少成品的批數(shù)。如果不能達(dá)到規(guī)程要求時(shí)，應(yīng)證明其效價(jià)降低是由于聯(lián)合疫苗中組分間的相互作用所致，并證明降低的效價(jià)不會(huì)導(dǎo)致人群免疫后低的免疫應(yīng)答。效力試驗(yàn)可以用動(dòng)物免疫原性試驗(yàn)，對(duì)每一種抗原的免疫應(yīng)答以及應(yīng)答的質(zhì)量都應(yīng)進(jìn)行研究，這些研究應(yīng)當(dāng)包括測(cè)定抗體的分類(lèi)、親和力、親和性、抗體動(dòng)態(tài)變化或功能，例如測(cè)定中和靶抗原或毒素的能力。保護(hù)力試驗(yàn)應(yīng)當(dāng)采用擬預(yù)防疾病的有毒株來(lái)攻擊。 （四）無(wú)菌檢查 聯(lián)合疫苗中的各組份以及成品疫苗均應(yīng)符合無(wú)菌試驗(yàn)的要求。此外，對(duì)組分進(jìn)行純度測(cè)定用的 SDSPAGE檢測(cè)，也不適用于成品。臨床試驗(yàn)應(yīng)是隨機(jī)的，且應(yīng)設(shè)對(duì)照組，如分別在不同部位同時(shí)注射聯(lián)合疫苗中所含有的單價(jià)組份疫苗的對(duì)照。 （二）免疫原性研究 應(yīng)當(dāng)對(duì)聯(lián)合疫苗中所有組分的免疫原性進(jìn)行研究。 評(píng)價(jià)每一組分的免疫原性的參數(shù)是非常關(guān)鍵的，應(yīng)廣泛征求有關(guān)專(zhuān)家的意見(jiàn)，確定評(píng)價(jià)疫苗免疫原性的參數(shù)以及各參數(shù)的合格標(biāo)準(zhǔn)。研究的設(shè)計(jì)應(yīng)能 證明聯(lián)合疫苗與原單價(jià)疫苗的免疫原性相一致，應(yīng)能證明和排除在臨床上抗體幾何平均滴度（ GMTs）和 /或者血清陽(yáng)轉(zhuǎn)率方面的顯著性差別，同時(shí)應(yīng)考慮測(cè)定方法和受試者的內(nèi)在變化的影響。但是，在某些情況下，例如制品中含有未獲生產(chǎn)文號(hào)的組分時(shí)，臨床驗(yàn)證時(shí)應(yīng)使用更多的批數(shù)，應(yīng)至少有一批是用于生產(chǎn)一致性研究的制品，并且，應(yīng)采用制備聯(lián)合疫苗的同批單價(jià)疫苗進(jìn)行接種的對(duì)照組試驗(yàn)，以避免由于批間的不同而引起免疫原性的不同。比較理想的臨床試驗(yàn)是前瞻性的、隨機(jī)的和有對(duì)照的。具有一定滴度的某些類(lèi)別的抗體與保護(hù)性具有相關(guān)性，例如免疫后破傷風(fēng)抗毒素的中和抗體單位大于 ，則認(rèn)為可保護(hù)受試者免于破傷風(fēng)的發(fā)生。 在評(píng)價(jià)制品有效性時(shí)，一般不選用病例對(duì)照試驗(yàn)（ casecontrol）。應(yīng)當(dāng)根據(jù)目標(biāo)人群中相應(yīng)血清型疾病的發(fā)病 率設(shè)計(jì)此類(lèi)疫苗有效性的臨床試驗(yàn)。 （四）數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì) 臨床研究中很重要的一個(gè)問(wèn)題是確定受試人群的大小。 為了證明聯(lián)合疫苗與單價(jià)疫苗等效性的臨床試驗(yàn)，應(yīng)當(dāng)設(shè)計(jì)一個(gè)拒絕有區(qū)別的假設(shè)試驗(yàn)，而不是傳統(tǒng)意義上的無(wú)區(qū)別的 “無(wú)效 ”假設(shè)試驗(yàn)。對(duì)于要排除事先規(guī)定的差別的臨床試驗(yàn)規(guī)模，應(yīng)計(jì)算考慮受試人群的大小。在沒(méi)有保護(hù)性替代指標(biāo)的情況下，如果沒(méi)有陽(yáng)轉(zhuǎn)率與 GMT 間的分析和評(píng)價(jià)是很難得出結(jié)論。還應(yīng)考慮到在個(gè)體內(nèi)的不同組分間的相互作用。在臨床試驗(yàn)時(shí)，應(yīng)采用聯(lián)合疫苗中各組分分別但同時(shí)接種作為對(duì)照組，由于對(duì)照組是多部位接種，給不良反應(yīng)的評(píng)價(jià)帶來(lái)了困難，同時(shí)還應(yīng)充分考慮各組分在體內(nèi)的相互作用而產(chǎn)生的影響。多肽疫苗由于完全是合成的，不存在毒力回升或滅活不全的問(wèn)題。因此，應(yīng)采取適當(dāng)可 行的途徑對(duì)這種潛能疫苗進(jìn)行生產(chǎn)及質(zhì)控，并在其生產(chǎn)過(guò)程中積累經(jīng)驗(yàn)，為此，應(yīng)加強(qiáng)咨詢(xún)和論證，以便提出一個(gè)確保安全有效而又適合實(shí)際的申報(bào)資料。合成中等大小的多肽也會(huì)涉及眾多反應(yīng)，每加入一個(gè)氨基酸需多次反應(yīng)，在一個(gè)氨基酸的 α 氨基與另一個(gè)氨基酸的羧基縮合 形成肽鏈之前，必須使其中一個(gè)形成高反應(yīng)的活化狀態(tài)，這個(gè)選擇自然落到羧基上，合成因而從 C 到 N 端。合成結(jié)束后必須除去所有的保護(hù)性基團(tuán)以得到所需的多肽。首先合成數(shù)條小肽，經(jīng)純化和去保護(hù)后結(jié)合成較長(zhǎng)的肽，直到最后所需的序列。在疫苗合成領(lǐng)域中，由于肽鏈聯(lián)接或裝配到需要的結(jié)構(gòu)（ TADPs）及免疫原性構(gòu)架（ MAPs）所用技術(shù)的引進(jìn)，加上肽鏈經(jīng)脂質(zhì)或碳水化合物的修飾作用，使得合成問(wèn)題變得更加復(fù)雜 。內(nèi)容包括對(duì)每個(gè)表位來(lái)源的說(shuō)明，當(dāng)不止一個(gè)表位時(shí)，應(yīng)說(shuō)明把不同表位相互結(jié)合到一個(gè)已知序列內(nèi)的理由，此外還應(yīng)對(duì)表位的類(lèi)型（ B、 Th、 Tc 等）及特殊組合方式進(jìn)行說(shuō)明。 （四）如果肽單體為中間產(chǎn)物，應(yīng)當(dāng)對(duì)其分離鑒定并提供下述確證依據(jù)。對(duì)肽的純度、總雜質(zhì)、每種主要及次要雜質(zhì)都應(yīng)規(guī)定限度要求。 （九） 載體 肽可以聯(lián)接或結(jié)合到載體上，選擇載體時(shí)應(yīng)謹(jǐn)慎，因?yàn)閷?duì)載體的免疫應(yīng)答可能會(huì)掩蔽對(duì)肽的免疫應(yīng)答。對(duì)不同成分及雜質(zhì)應(yīng)鑒別定性并加以定量測(cè)定，對(duì)于生物來(lái)源的載體應(yīng)當(dāng)采取措 施，確保檢測(cè)不出感染因子。其中許多會(huì)產(chǎn)生自身的毒性，而且可能因與抗原聯(lián)合使用而顯著改變免疫反應(yīng)，從而引起安全性方面的其它顧慮。對(duì)于添加劑，應(yīng)提供所有成分的明確說(shuō)明，闡述使用的理由。單劑量制劑不應(yīng)添加防腐劑。 三、產(chǎn)品的質(zhì) 量與檢定要求 保證多肽制品的一致性極其重要，應(yīng)廣泛使用分析技術(shù)。 （三）產(chǎn)品相關(guān)的雜質(zhì) （四）與生產(chǎn)過(guò)程相關(guān)的雜質(zhì) （五）人為修飾的檢測(cè) （六）效力試驗(yàn) 效力試驗(yàn)并非一定反映出在人體內(nèi)的作用機(jī)制或功能活動(dòng)。這種試驗(yàn)應(yīng)將制品同時(shí)與參考品做比較，而且試驗(yàn)結(jié)果經(jīng)過(guò)統(tǒng) 計(jì)學(xué)檢驗(yàn)。此外，選取合適的一批中間產(chǎn)品及終產(chǎn)品（最好是選擇經(jīng)過(guò)臨床評(píng)價(jià)的制品），就其化學(xué)成分、純度及生物學(xué)活性進(jìn)行全面檢定，而后保存下來(lái)作為化學(xué)或生物參考品，可依此制定每批產(chǎn)品的標(biāo)準(zhǔn)要求。但推薦供化學(xué)藥使用的臨床安全及毒性試驗(yàn)對(duì)于合成肽疫苗不甚相關(guān)。因此，應(yīng)篩查單體肽固有的毒性或藥理作用。 抗肽抗體可能與人體組織產(chǎn)生意想不到的交叉反應(yīng)，也可引發(fā)自身免疫反應(yīng)。對(duì)于臨床前安全性試驗(yàn)，應(yīng)廣泛使用生物學(xué)、生物化學(xué)、免疫學(xué)、毒理學(xué)及組織病理學(xué)等適當(dāng)?shù)难芯考夹g(shù)，在適當(dāng)?shù)那闆r下，可采用多個(gè)相關(guān)劑量并包括急性及慢性試驗(yàn)。 本原則適用于多糖 蛋白結(jié)合疫苗生產(chǎn)的質(zhì)量控制和臨床研究。 一、結(jié)合疫苗生產(chǎn)的質(zhì)量控制原則 （一）多糖抗原生產(chǎn)的質(zhì)量控制 1．生產(chǎn)用菌種和培養(yǎng)基：生產(chǎn)用菌種須經(jīng)國(guó)家食品藥品管理當(dāng)局批準(zhǔn)方可用于制備多糖抗原。主種子批和工作種子批菌種的各種特性應(yīng)與原始種子批一致。必要時(shí)可采 用核磁共振（ 1H 或 13C）、核苷酸序列分析等特殊鑒定方法。若發(fā)現(xiàn)染有雜菌應(yīng)廢棄。為控制精制純 化多糖的質(zhì)量所進(jìn)行的測(cè)定包括： （ 1）鑒別試驗(yàn)：通常應(yīng)用血清學(xué)反應(yīng)進(jìn)行多糖鑒別試驗(yàn)； （ 2）分子大小分布：應(yīng)采用凝膠過(guò)濾或高效液相色譜（ HPLC）等適宜方法測(cè)定純化多糖的分子大小分布，并建立相應(yīng)的 KD 值合格標(biāo)準(zhǔn)，不同批純化多糖的 KD 值應(yīng)保持一致； （ 3）采用凍干保存的純化多糖 ,其水分含量應(yīng)合格； （ 4）多糖含量：應(yīng)采用特定的方法測(cè)定糖含量，如磷含量測(cè)定、唾液酸含量測(cè)定和核糖含量測(cè)定等方法； （ 5）雜蛋白含量：應(yīng)采用 Lowry 法、 BCA 法等方法測(cè)定純化多糖中蛋白雜質(zhì)的含量，應(yīng)同時(shí)采用 相應(yīng)的國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)品作蛋白測(cè)定對(duì)照； （ 6）核酸雜質(zhì)含量：應(yīng)采用紫外 260nm 測(cè)定等方法測(cè)定純化多糖中核酸雜質(zhì)含量； （ 7）應(yīng)采用家兔熱原試驗(yàn)或鱟試驗(yàn)定量測(cè)定方法測(cè)定純化多糖中的熱原質(zhì)及內(nèi)毒素含量； 3．修飾處理后的多糖：多糖與載體蛋白結(jié)合前通常需先經(jīng)化學(xué)修飾，即活化（例如可采用溴化氰活化多糖）。 如果采用已有國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)的破傷風(fēng)類(lèi)毒素和白喉類(lèi)毒素等作為載體，其各項(xiàng)質(zhì)量指標(biāo)應(yīng)符合現(xiàn)行版《中國(guó)藥典》的要求，尤其要注意確保載體蛋白的純度。 采用上述以外的其它蛋白作為載體，應(yīng)參照上述蛋白載體質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)要求，結(jié)合其自身特點(diǎn)建立相應(yīng)的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，并進(jìn)行嚴(yán)格的質(zhì)量檢測(cè)和復(fù)核。 （三）多糖 蛋白結(jié)合物原液的質(zhì)量控制 不同的結(jié)合疫苗可能采用不同的多糖 蛋白結(jié)合工藝，但均需要進(jìn)行多步反應(yīng)。未被結(jié)合的游離多糖不得超過(guò)一定比例。多價(jià)結(jié)合疫苗既可在各單價(jià)結(jié)合物原液混合后加入佐劑、防腐劑及保護(hù)劑，也可在各單價(jià)結(jié)合物原液中加入佐劑、 防腐劑及保護(hù)劑后再混合。如果疫苗中加入了防腐劑，應(yīng)采用符合國(guó)家規(guī)定的方法測(cè)定成品中防腐劑的含量。 （六）其他 結(jié)合疫苗的包裝、標(biāo)簽、配送、運(yùn)輸和儲(chǔ)存均應(yīng)符合中國(guó)藥品 GMP 要求及國(guó)家有關(guān)規(guī)定。如果生產(chǎn)工藝的改變可能影響產(chǎn)品的穩(wěn)定性，應(yīng)進(jìn)行穩(wěn)定性試驗(yàn)對(duì)新方法進(jìn)行驗(yàn)證。如果生產(chǎn)工藝發(fā)生重大改變，或是將多價(jià)疫苗作為一種新聯(lián)合疫苗的組分時(shí)，應(yīng)考慮重新進(jìn)行臨床研究。如果偶聯(lián)疫苗的適應(yīng)證包括載體蛋白來(lái)源細(xì)菌所導(dǎo)致的疾病，可設(shè)置載體菌疫苗對(duì)照組。 標(biāo)準(zhǔn)化的不良反應(yīng)評(píng)價(jià)分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)，已逐漸被廣泛用于評(píng)估治療用藥物在特定疾病的患者人群中的安全性，但這些分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)適用于患者，本身的疾病過(guò)程經(jīng)歷了輕度、中度或重度臨床和實(shí)驗(yàn)室指標(biāo)異常的不良事件，故其參數(shù)可能并不適于健康志愿者。 預(yù)防性疫苗的臨床試驗(yàn)應(yīng)嚴(yán)格遵守《藥物臨床試 驗(yàn)質(zhì)量管理規(guī)范》（ GCP）并符合相關(guān)的法規(guī)要求，管理法規(guī)要求疫苗臨床研究中發(fā)生的不良事件需接受有關(guān)管理當(dāng)局的監(jiān)查和相關(guān)主體（注冊(cè)申請(qǐng)人、倫理委員會(huì)和研究人員）的監(jiān)控，并適時(shí)備報(bào)。例如，額外的參數(shù)基于臨床前毒理研究的安全性提示或先前類(lèi)似已上市產(chǎn)品的經(jīng)驗(yàn)。 **腫的評(píng)價(jià)和分級(jí)應(yīng)根據(jù)功能等級(jí)和實(shí)際測(cè)量結(jié)果 表 2 生命體征分級(jí)表 生命體征 * 輕度（ 1 級(jí)） 中度（ 2 級(jí)） 嚴(yán)重（ 3 級(jí)） 潛在的生命危脅（ 4 級(jí)） 發(fā)熱，腋溫 * ～ ℃ ～ ℃ ℃ 口溫 ** ～ ～ ℃ ～ ℃ ＞ 40℃ 心動(dòng)過(guò)速（次 /min） 101～ 115 116～ 130 130 由于心率不齊就急診或住院 心動(dòng)過(guò)緩（次 /min） 50～ 54 45～ 49 45 由于心率不齊就急診或住院 高血壓（收縮壓 mmHg） *** 141～ 150 151～ 155 155 由于嚴(yán)重高血壓就急診或住院 高血壓（舒張壓 mmHg） *** 91～ 95 96～ 100 100 由于嚴(yán)重高血壓就急診或住院 低血壓（收縮壓）mmHg*** 85～ 89 80～ 84 80 由于低血壓休克就急診或住院 呼吸頻率（次 /min） 17～ 20 21～ 25 25 需氣管插管 * 引自中國(guó)預(yù)防接種手冊(cè)，受試者應(yīng)在靜止?fàn)顟B(tài)進(jìn)行檢測(cè) ** 口溫；檢測(cè)前沒(méi)有喝熱的或 冷的飲料或吸煙 *** 血壓異常的判斷需與使用疫苗前的基線血壓值對(duì)比，進(jìn)行