《酶催化反應(yīng)動(dòng)力學(xué)》ppt課件-預(yù)覽頁(yè)
【正文】 ? ? ??（ 25） 由式（ 21）得 MM eq： sESsE CCKC ][?⑶ “擬穩(wěn)態(tài)”假設(shè) （ G .E .Briggs和 J. B .S Haldane， 1925） Cs 》 CE，中間復(fù)合物分解時(shí)所得到的酶又立即與底物相結(jié)合，從而使反應(yīng)體系中 復(fù)合物濃度維持不變 。 Km值作為常數(shù)只是對(duì)一定的底物，一定的pH值，一定的溫度條件而言，測(cè)定 Km可以作為鑒別酶的手段。 Km：最重要的動(dòng)力學(xué)常數(shù)，表達(dá)了反應(yīng)性質(zhì)，稱為表觀解離常數(shù) , m a x()p mpSSrcr Kc? ?（ 1） Cs《 Km （ 2） Cs 》 Km 為底物轉(zhuǎn)化率式中：或：的初始積分得：結(jié)合可得：由米氏方程：ssssssmsstssmsstsmppsmsppXCCCXXKXCrCCKCCrCsCstCKrrCkCrr,11lnln)(,01111000000m a xm a xm a x,m a x,????????????????????????????（ 3） Cs 與 Km相當(dāng) MM方程參數(shù)的確定 （ 1） LineweaverBurk法（簡(jiǎn)稱 LB法） smp CrKrr111m a xm a x???(2) EadieHofstee法 (簡(jiǎn)稱 EH法 ) m a xsmssrr r KC? ? ?m a x smsrCs KCr ??（ 3） HanesWoolf法（簡(jiǎn)稱 HW法），又稱Langmuir作圖法（ LB基礎(chǔ)上乘以 Cs） m a x m a x1 1 1mssKr r r C? ? ?m a x m a xs s msC C Kr r r??(4) Eisenthal和 CornishBowden直接線性作圖 將 MM方程取倒數(shù)，兩邊均乘以 rmax： m a x1mssrKrC??應(yīng)用直線作圖法求取動(dòng)力學(xué)參數(shù) ── 微分法 (a) LB法； (b)HW法； (C) EH法 (5) 積分法 微分法和積分法比較 ? 微分法中要引入 反應(yīng)速率 為變量，但實(shí)驗(yàn)中不能直接測(cè)定反應(yīng)速率，在 Cs與 t的關(guān)系曲線上求取相應(yīng)各點(diǎn)的切線的斜率，才能確定不同時(shí)間的反應(yīng)速率； ? 積分法的主要問(wèn)題是要 保證隨著反應(yīng)的進(jìn)行，反應(yīng)產(chǎn)物的增加對(duì)反應(yīng)速率不產(chǎn)生影響 ，否則不符合 MM方程成立的條件； ? 現(xiàn)在可用 非線性最小二乘法 來(lái)回歸處理實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)，直接求取動(dòng)力學(xué)參數(shù)。 t/h / ( / )Sc mmol L 00l n( / )/ ( / )SSSSCCCCL mm ol? 0/ [ / ( / )]SStCCh mmo l L? t/h / ( / )Sc mmol L 00l n( / )/ ( / )SSSSCCCCL mm ol? 0/ [ / ( / )]SStCCh mmo l L? 1 2 3 4 5 6 6 .250 7 8 9 10 11 1 8 例表 2A 時(shí)間與蔗糖濃度的關(guān)系 有抑制的酶反應(yīng)動(dòng)力學(xué) 抑制劑（ Inhibitor)： 某些物質(zhì)，它們并不引起酶蛋白變性，但能與酶分子上的某些必需基團(tuán)（主要是指活性中心上的一些基團(tuán)）發(fā)生化學(xué)反應(yīng)，因而引起酶活力下降，甚至喪失，致使酶 反應(yīng)速率降低 ，能引起這種 抑制作用 的物質(zhì)稱為抑制劑。 ? 可逆抑制： 可用諸如透析等物理方法把抑制劑去掉而 恢復(fù)酶的活性 ，此時(shí)酶與抑制劑的結(jié)合存在著解離平衡的關(guān)系。 例：琥珀酸脫氫酶催化琥珀酸為延胡索酸時(shí)，丙二酸是競(jìng)爭(zhēng)性抑制劑 12133[][]kkkkkE S ES E PE I EIIEI???? ??? ??競(jìng) 爭(zhēng) 性 抑 制 的 機(jī) 理 式 為式 中 ： — 抑 制 劑— 非 活 性 復(fù) 合 物 。酶與抑制劑結(jié)合后，可以與底物結(jié)合 EI+S→ SEI。其結(jié)構(gòu)可能與底物毫無(wú)相關(guān)之處。 1 2133[][ ] [ ]k kkkkE S ES E PES I SEI? ????? ??? ??CsKCsrrKCCsKCsrrmIISIIImSI????????39。 CsrKrmI 11r1m a xm a xSI???IImmIImmI CKKKKCKK ?????? )1(Lm mo lKLm mo lKCKKLm mo lKLm mo lrIIImmmI /,/)1(/ i n ) ,/(100m a x????????并得到根據(jù)圖得【 解 】 ：以 LB作圖法來(lái)判斷抑制類型并求其參數(shù)（用 Excel作圖） 根據(jù) LB圖形可知為競(jìng)爭(zhēng)性抑制 例 15：某酶的 Km值為 105mol/L ，如果 rmax值 105mol/(LsmsrCKC??39。 Kms1—S2濃度飽和時(shí)， S1的米氏常數(shù)， mol/L。 ? 當(dāng)?shù)孜锓肿优c這類酶結(jié)合時(shí)，能誘導(dǎo)酶的結(jié)構(gòu)改變，增加酶與底物的結(jié)合能力，表現(xiàn)出底物對(duì)酶的激活效應(yīng)。 Hill經(jīng)驗(yàn)公式： m a x /( )nns s H sr r c k c?? [] nE n S E S?有磷酸果糖激酶、天冬氨酸轉(zhuǎn)氨甲酰酶、蘇氨酸脫氫酶等 底物分子與這類酶結(jié)合時(shí)能誘導(dǎo)酶的結(jié)構(gòu)改與 的結(jié)合能力，表現(xiàn)出 底物對(duì)酶的有磷酸果糖激酶、天冬氨酸轉(zhuǎn)氨甲酰酶、蘇氨酸脫氫酶等m a xl g l g l gsssHr n C Krr??? 反應(yīng)條件對(duì)酶反應(yīng)速率的影響 ? 內(nèi)部因素： 酶的結(jié)構(gòu)特征，底物的結(jié)構(gòu)特征。][][39。39。酶在保存和參與反應(yīng)時(shí)均有可能失活，前者的失活又稱為 穩(wěn)定性 。 未反應(yīng)時(shí)酶的熱失活動(dòng)力學(xué) 測(cè)定酶在未反應(yīng)時(shí)的熱穩(wěn)定性方法： 在一定條件下，使酶溶液恒溫保持一定的時(shí)間，然后再在最 適宜的pH和溫度下測(cè)定殘存的酶活力，即殘存酶活。詳細(xì)介紹 酶的催化特性。 反應(yīng)條件對(duì)酶反應(yīng)速率的影響 詳細(xì)介紹 pH和溫度 對(duì)酶催化的影響的機(jī)理、規(guī)
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