蛋白質(zhì)和氨基酸的測定(1)-預(yù)覽頁
【正文】 ler試劑， K2（ HgI4） 〕 檢驗(yàn) NH4+離子 ， 遇銨根 ， 離子析 出黃色或紅棕色沉淀 。 ? 結(jié)果計(jì)算： 158頁 注意： F—— 氮換算為蛋白質(zhì)的系數(shù) ， 一般為 也可查表 。 ④ 樣品中若含脂肪較多時(shí)，消化過程中易產(chǎn)生大量泡沫，為防止泡沫溢出瓶外，在開始消化時(shí)應(yīng)用小火加熱，并時(shí)時(shí)搖動(dòng)；或者加入少量辛醇或液體石蠟或硅油消泡劑，并同時(shí)注意控制熱源強(qiáng)度。有機(jī)物如分解完全，消化液呈藍(lán)色或淺綠色，但含鐵量多時(shí)，呈較深綠色。 ⑩ 蒸餾完畢后，應(yīng)先將冷凝管下端提離液面清洗管口，再蒸 1分鐘后關(guān)掉熱源．否則可能造成吸收液倒吸。 （ 2）快速：一次可同時(shí)消化 8個(gè)樣品， 30分鐘可消化完畢。 新開發(fā)的：雙縮脲法 、 紫外分光光度法 、 染料結(jié)合法 、 水楊酸比色法等 。 在同樣條件下也有呈色反應(yīng) ， 在一定條件下 ，其顏色深淺與蛋白質(zhì)含量成正比 ， 可用分光光度計(jì)來測其吸光度 ， 確定含量 。 ： 分光光度計(jì) ， 離心機(jī) （ 4000 r/min） 4. 試劑： (1) 堿性硫酸銅溶液 (2) 四氯化碳 5．操作方法：采用凱氏法測出的蛋白質(zhì)樣品為標(biāo)準(zhǔn)樣繪標(biāo)準(zhǔn)曲線 。 第六節(jié) 氨基酸定量測定 一．氨基酸的一般定量測定 （一）甲醛滴定法 ：氨基酸本身有堿性 — NH2— 基，又有 酸性 — COOH 基，成中性內(nèi)鹽，加入甲醛 溶液后，與 — NH2— 結(jié)合，堿性消失，再用強(qiáng)堿來滴定 — COOH 基。 4．操作：同時(shí)取兩份樣： ① + 中性紅指示劑，用氫氧化鈉直接滴，中和 樣液中其它酸性物質(zhì)。 第七節(jié) 氨基酸的分離與測定 一．薄層色譜法（薄層層析法（ TLC 法） Thin Layer Chromatography 簡介： 近年來發(fā)展起來的一種微量而快速的層析方法，它把吸附劑或支持劑均勻的鋪在玻璃板上成一薄層，把樣品點(diǎn)在薄層上，然后用合適的溶劑展開，從而達(dá)到分離、鑒定和定量的目的。然后用茚三酮顯色，與標(biāo)準(zhǔn)氨基酸進(jìn)行對(duì)比，鑒別各種氨基酸種類，從顯色斑點(diǎn)顏色的深淺可以大致確定其含量。 ④ 點(diǎn)樣量少，靈敏度高。 ? 分類：按層析的原理可分為：吸附 、 分配 、離子交換 、 凝膠等 。注 意要等一個(gè)點(diǎn)干了再點(diǎn)另一個(gè)點(diǎn)。 到離頂端一部分 ， 取出樣板 、 晾干 、 顯色 。 Ⅲ .圖解法： 樣品極性小 ， 選吸附劑活性高 ， 展開劑極性低的 。 雙向展開： ⑤ 顯色： ，使斑點(diǎn)顯色，即噴霧顯色。 定量： ：以標(biāo)準(zhǔn)斑點(diǎn)對(duì)照 ， 相當(dāng)于樣品斑點(diǎn)中含量 ug數(shù) 。 二 ． 氨基酸自動(dòng)分析儀法 三 ． 氣相色譜法 四 ． 高效液相色譜法 103 第十章的重點(diǎn) 1. 凱氏定氮法原理、分步、測定方法。
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