蛋白質(zhì)含量測定方法匯總-全文預(yù)覽
【正文】 的蛋白質(zhì)，有一定的誤差。紫外吸收法簡便、靈敏、快速，不消耗樣品，測定后仍能回收使用。蛋白質(zhì)分子中，酪氨酸、苯丙氨酸和色氨酸殘基的苯環(huán)含有共軛雙鍵，使蛋白質(zhì)具有吸收紫外光的性質(zhì)。四、紫外吸收法[實(shí)驗(yàn)原理]，否則影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果。[注意事項(xiàng)]，而堿性銅試劑是在堿性條件下與蛋白質(zhì)相互作用，所以當(dāng)加入酚試劑后，應(yīng)迅速搖勻（加一管搖一管），使還原反應(yīng)發(fā)生在磷鉬酸磷鎢酸試劑被破壞之前。2．血清蛋白合成降低：（1）合成障礙，主要為肝功能障礙，肝臟是合成蛋白質(zhì)的場所，肝功嚴(yán)重?fù)p害時，蛋白質(zhì)的合成減少，以白蛋白最為顯著。以測定管吸光度值，查標(biāo)準(zhǔn)曲線求得血清蛋白質(zhì)含量。5．721分光光度計；旋渦混合器；秒表；試管。使用前，以酚酞為指示劑，求出酚試劑的摩爾濃度。2．標(biāo)準(zhǔn)蛋白質(zhì)溶液（250?5H2O烯醇化反應(yīng)后，可與Cu2+絡(luò)合，絡(luò)合后，易于使肽釋放電子，使酚試劑還原。反應(yīng)式一[思考題]5H20之比不低于3∶1，加入KI作為抗氧化試劑。以測定管的吸光度，在標(biāo)準(zhǔn)曲線上求得蛋白質(zhì)濃度。[操作步驟]2．1ml，5ml移液管；3．坐標(biāo)紙 ；NaOH配制。2．標(biāo)準(zhǔn)蛋白質(zhì)溶液： 用標(biāo)準(zhǔn)的結(jié)晶牛血清清蛋白（BSA）或標(biāo)準(zhǔn)酪蛋白，配制成10g/L的標(biāo)準(zhǔn)蛋白溶液，可用BSA濃度1g/。NaOH溶液300ml，KI主要的缺點(diǎn)是靈敏度差。蛋白質(zhì)分子含有眾多肽鍵(—CONH—)，可發(fā)生雙縮脲反應(yīng)，且呈色強(qiáng)度在一定濃度范圍內(nèi)與肽鍵數(shù)量即與蛋白質(zhì)含量成正比，可用比色法測定蛋白含量。%的酒精50ml，再加入85%的濃磷酸100ml，用水稀釋至1000ml,混勻備用。本法的缺點(diǎn)是：對于那些與標(biāo)準(zhǔn)蛋白氨基酸組成有較大差異的蛋白質(zhì)，有一定誤差，因?yàn)椴煌牡鞍踪|(zhì)與染料的結(jié)合是不同的，故該法適合測定與標(biāo)準(zhǔn)蛋白質(zhì)氨基酸組成相近的蛋白質(zhì)。蛋白質(zhì)含量測定2．了解染料法、雙縮脲法、Lowry法和紫外吸收法測定原理。該法近年在某些方面有取代經(jīng)典的Lowry法趨勢，因?yàn)樗僮骱唵?，反?yīng)時間短，染料蛋白質(zhì)顏色穩(wěn)定，抗干擾性強(qiáng)。：稱取考馬斯亮藍(lán)G250標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制：試劑(ml)\管號012345標(biāo)準(zhǔn)蛋白溶液0H2O0染料溶液A595nm2．樣品測定：取1ml樣品溶液（約含25～250微克蛋白質(zhì)），加入染料溶液5ml混勻，5min后測定其595nm吸光度值，對照標(biāo)準(zhǔn)曲線求得蛋白質(zhì)濃度。凡分子中含二個或二個以上酰胺基(—CONH2)，或與此相似的基團(tuán)[如—CH2NH2，—CSNH2，—C(NH)NH2]的任何化合物，無論這類基團(tuán)直接相連還是通過一個碳或氮原子間接相連，均可發(fā)生上述反應(yīng)。此法的優(yōu)點(diǎn)是較快速，不同的蛋白質(zhì)產(chǎn)生顏色的深淺相近，以及干擾物質(zhì)少。5H20(.)(.)，／L長期放置后若有暗紅色沉淀出現(xiàn)，即不能使用。%
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