【正文】 狀態(tài)時，調(diào)節(jié)溶液pH值，離子強度(qi225。)方法的依據(jù)：,細胞處理量； 細胞壁強度和結(jié)構(gòu)(高聚物交聯(lián)程度(ch233。o)法,48,第四十八頁，共七十四頁。當采用(cǎiy242。 一方面能使細胞膜的疏水鍵結(jié)構(gòu)破裂，從而增加細胞的親水性能， 另一方面胞內(nèi)水結(jié)晶，形成冰晶粒，引起細胞膨脹而破裂。ngji233。)滲透壓的突然變化，胞外的水迅速滲入胞內(nèi)，引起細胞快速膨脹而破裂。,1）滲透壓沖擊(chōngjī)法,滲透壓沖擊是較溫和的一種破碎方法， 將細胞放在高滲透壓的溶液中（如一定濃度的甘油或蔗糖溶液），由于(y243。)滲透法特點：,缺點(quēdiǎn),對產(chǎn)物釋放有一定的選擇性，可使一些較小分子量的溶質(zhì)如多肽和小分子的酶蛋白透過，而核酸等大分子量的物質(zhì)仍滯留在胞內(nèi)； 細胞外形完整，碎片少，漿液粘度低，易于固液分離和進一步提取。 化學試劑的加入常會給隨后(su237。ich237。zh236。,（2）表面(biǎomi224。,（1）酸、堿處理(chǔlǐ)法,41,第四十一頁，共七十四頁。,酸處理可以使蛋白質(zhì)水解成氨基酸，通常采用6mol/L HCl。xu233。u)性），從而使胞內(nèi)物質(zhì)有選擇地滲透(sh232。)，過濾速度下降。ng),自溶作用是酶解的另一種方法，利用生物體自身產(chǎn)生的酶來溶胞，而不需外加其他的酶。)的存在。,37,第三十七頁，共七十四頁。,外加(w224。但對于革蘭氏陰性菌，單獨采用溶菌酶無效果，必須與螯合劑EDTA一起使用。ijiā)酶法,酶解法的特點(t232。,二,34,第三十四頁，共七十四頁。)破碎法（chemical treatment） 去垢劑破碎法（detergents） 滲透壓沖擊破碎法（osmotic shock） 凍融破碎法（freezing and thawing）,33,第三十三頁，共七十四頁。,非機械破碎(p242。,31,第三十一頁，共七十四頁。 一般桿菌比球菌易破碎，G細菌比G+細菌易破碎，對酵母菌的效果(xi224。,30,第三十頁，共七十四頁。bāo)粉碎機,一般認為在超聲波作用下液體發(fā)生空化作用（cavitation), 液體中局部空穴的形成、增大和閉合產(chǎn)生極大的沖擊波和剪切力，引起的粘滯性旋渦在細胞上造成了剪切力，使細胞內(nèi)液體發(fā)生流動，從而(c243。,29,第二十九頁，共七十四頁。 超聲波振蕩器以可分為槽式和探頭直接插入介質(zhì)兩種型式，一般破碎效果后者比前者好。,28,第二十八頁，共七十四頁。nɡ)震動俠縫分離器 D變速馬達 1和2料液進出口 3和4 攪拌冷卻劑進出口 5和6磨室冷卻劑進出口,園盤以兩種位置交錯地安裝在軸上， 一種處于徑向(j236。,27,第二十七頁，共七十四頁。 jī)工作原理,磨室內(nèi)放置玻璃小珠，裝在同心軸上的園盤攪拌器高速旋轉(zhuǎn)，使細胞懸浮液和玻離小珠相互攪動； 細胞破碎是由剪切力層之間的碰撞和磨料(m243。 在工業(yè)規(guī)模的破碎中，常采用(cǎiy242。 主要用于實驗室中。,高壓勻漿(y 破碎性能還隨菌體種類和生長環(huán)境的不同而不同 大腸桿菌的細胞比酵母(ji224。 不宜使用高壓勻漿法。,22,第二十二頁，共七十四頁。,高壓勻漿(y,19,第十九頁，共七十四頁。n jiānɡ)破碎法（homogenization） 高速珠研磨破碎法（bead grinding） 超聲波破碎法（ultrasonication）,18,第十八頁，共七十四頁。,通過各種物理因素的作用，使組織、細胞的外層結(jié)構(gòu)破壞，而使細胞破碎。,機械(jīxi232。,15,第十五頁，共七十四頁。)次生細胞壁,某些植物細胞，當生長停止后，在細胞質(zhì)和初生細胞壁之間形成了次生細胞壁。)強度主要來自于微纖絲。初生壁一般較?。?～3μm），富有彈性。,植物(zh237。jūn)細胞壁的結(jié)構(gòu)示意圖,12,第十二頁，共七十四頁。 與酵母和細菌的細胞壁一樣，真菌細胞壁的強度和聚合物的網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)有關(guān)，不僅如此，它還含有幾丁質(zhì)或纖維素的纖維狀結(jié)構(gòu)，所以強度有所提高。,真菌(zhēnjūn)的細胞壁,真菌的細胞壁較厚，主要由多糖組成，其次還含有較少量的蛋白質(zhì)和脂類。ng)了細胞壁的剛性骨架，使細胞具有一定的形狀， 上面的是一層糖蛋白， 最外層是甘露聚糖，由1,6磷酸二酯鍵連接成網(wǎng)狀。,9,第九頁，共七十四頁。jūn)細胞壁結(jié)構(gòu),破碎細菌的主要阻力是來自于肽聚糖的網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)，其網(wǎng)結(jié)構(gòu)的致密程度和強度取決于聚糖鏈上所存在的肽鍵的數(shù)量和其交聯(lián)的程度。jūn)細胞壁結(jié)構(gòu),幾乎所有細菌(x236。 通常細胞壁較堅韌，細胞膜脆弱，易受滲透壓沖擊而破碎，因此細胞破碎的阻力主要來自于細胞壁。g242。 為了(w232。 脂類物質(zhì)和一些抗生素包含在生物體中。i sh249。y)方法,本章的主要內(nèi)容,3,第三頁，共七十四頁。n)的細胞壁結(jié)構(gòu),細胞破碎(p242。ch233。,生物分離過程(gu242。nɡ ji224。n hu224。),不同類型的細胞分泌目標產(chǎn)物的類型： 動物細胞多分泌到細胞外培養(yǎng)液 植物細胞多為胞內(nèi)產(chǎn)物 微生物（細菌/酵母/真菌）胞內(nèi)、胞外 對于(du236。,概述(ɡ224。 尤其是由基因工程菌產(chǎn)生(chǎnshēng)的大多數(shù)蛋白質(zhì)是在細胞內(nèi)沉積。 細胞破碎技術(shù)是分離純化細胞內(nèi)合成的非分泌型生化物質(zhì)（產(chǎn)品）的基礎(chǔ)。,3.1 細胞壁結(jié)構(gòu)(ji233。)細胞外層均為細胞壁，細胞壁里面是細胞膜，動物細胞沒有細胞壁，僅有細胞膜。,細菌(x236。,細菌(x236。ng)菌典型的生物是大腸桿菌，通過這種細胞生產(chǎn)了很多細胞重組的產(chǎn)物。uch233。,10,第十頁，共七十四頁。ng)，少數(shù)含纖維素。,紅面包霉菌(m233。nɡ)和結(jié)構(gòu),13,第十三頁，共七十四頁。 初生壁是細胞生長期形成的。 它是構(gòu)成細胞壁的骨架，細胞壁的機械(jīxi232。w249。 因此次生壁的形成提高了細胞壁的堅硬性，使植物細胞具有很高的機械強度。)技術(shù),16,第十六頁，共七十四頁。lǐ)破碎,溫度差破碎法 壓力差破