【正文】 狀態(tài)時(shí)，調(diào)節(jié)溶液pH值，離子強(qiáng)度(qi225。)方法的依據(jù)：,細(xì)胞處理量； 細(xì)胞壁強(qiáng)度和結(jié)構(gòu)(高聚物交聯(lián)程度(ch233。o)法,48,第四十八頁(yè)，共七十四頁(yè)。當(dāng)采用(cǎiy242。 一方面能使細(xì)胞膜的疏水鍵結(jié)構(gòu)破裂，從而增加細(xì)胞的親水性能， 另一方面胞內(nèi)水結(jié)晶，形成冰晶粒，引起細(xì)胞膨脹而破裂。ngji233。)滲透壓的突然變化，胞外的水迅速滲入胞內(nèi)，引起細(xì)胞快速膨脹而破裂。,1）滲透壓沖擊(chōngjī)法,滲透壓沖擊是較溫和的一種破碎方法， 將細(xì)胞放在高滲透壓的溶液中（如一定濃度的甘油或蔗糖溶液），由于(y243。)滲透法特點(diǎn)：,缺點(diǎn)(quēdiǎn),對(duì)產(chǎn)物釋放有一定的選擇性，可使一些較小分子量的溶質(zhì)如多肽和小分子的酶蛋白透過(guò)，而核酸等大分子量的物質(zhì)仍滯留在胞內(nèi)； 細(xì)胞外形完整，碎片少，漿液粘度低，易于固液分離和進(jìn)一步提取。 化學(xué)試劑的加入常會(huì)給隨后(su237。ich237。zh236。,（2）表面(biǎomi224。,（1）酸、堿處理(chǔlǐ)法,41,第四十一頁(yè)，共七十四頁(yè)。,酸處理可以使蛋白質(zhì)水解成氨基酸，通常采用6mol/L HCl。xu233。u)性），從而使胞內(nèi)物質(zhì)有選擇地滲透(sh232。)，過(guò)濾速度下降。ng),自溶作用是酶解的另一種方法，利用生物體自身產(chǎn)生的酶來(lái)溶胞，而不需外加其他的酶。)的存在。,37,第三十七頁(yè)，共七十四頁(yè)。,外加(w224。但對(duì)于革蘭氏陰性菌，單獨(dú)采用溶菌酶無(wú)效果，必須與螯合劑EDTA一起使用。ijiā)酶法,酶解法的特點(diǎn)(t232。,二,34,第三十四頁(yè)，共七十四頁(yè)。)破碎法（chemical treatment） 去垢劑破碎法（detergents） 滲透壓沖擊破碎法（osmotic shock） 凍融破碎法（freezing and thawing）,33,第三十三頁(yè)，共七十四頁(yè)。,非機(jī)械破碎(p242。,31,第三十一頁(yè)，共七十四頁(yè)。 一般桿菌比球菌易破碎，G細(xì)菌比G+細(xì)菌易破碎，對(duì)酵母菌的效果(xi224。,30,第三十頁(yè)，共七十四頁(yè)。bāo)粉碎機(jī),一般認(rèn)為在超聲波作用下液體發(fā)生空化作用（cavitation), 液體中局部空穴的形成、增大和閉合產(chǎn)生極大的沖擊波和剪切力，引起的粘滯性旋渦在細(xì)胞上造成了剪切力，使細(xì)胞內(nèi)液體發(fā)生流動(dòng)，從而(c243。,29,第二十九頁(yè)，共七十四頁(yè)。 超聲波振蕩器以可分為槽式和探頭直接插入介質(zhì)兩種型式，一般破碎效果后者比前者好。,28,第二十八頁(yè)，共七十四頁(yè)。nɡ)震動(dòng)俠縫分離器 D變速馬達(dá) 1和2料液進(jìn)出口 3和4 攪拌冷卻劑進(jìn)出口 5和6磨室冷卻劑進(jìn)出口,園盤以兩種位置交錯(cuò)地安裝在軸上， 一種處于徑向(j236。,27,第二十七頁(yè)，共七十四頁(yè)。 jī)工作原理,磨室內(nèi)放置玻璃小珠，裝在同心軸上的園盤攪拌器高速旋轉(zhuǎn)，使細(xì)胞懸浮液和玻離小珠相互攪動(dòng)； 細(xì)胞破碎是由剪切力層之間的碰撞和磨料(m243。 在工業(yè)規(guī)模的破碎中，常采用(cǎiy242。 主要用于實(shí)驗(yàn)室中。,高壓勻漿(y 破碎性能還隨菌體種類和生長(zhǎng)環(huán)境的不同而不同 大腸桿菌的細(xì)胞比酵母(ji224。 不宜使用高壓勻漿法。,22,第二十二頁(yè)，共七十四頁(yè)。,高壓勻漿(y,19,第十九頁(yè)，共七十四頁(yè)。n jiānɡ)破碎法（homogenization） 高速珠研磨破碎法（bead grinding） 超聲波破碎法（ultrasonication）,18,第十八頁(yè)，共七十四頁(yè)。,通過(guò)各種物理因素的作用，使組織、細(xì)胞的外層結(jié)構(gòu)破壞，而使細(xì)胞破碎。,機(jī)械(jīxi232。,15,第十五頁(yè)，共七十四頁(yè)。)次生細(xì)胞壁,某些植物細(xì)胞，當(dāng)生長(zhǎng)停止后，在細(xì)胞質(zhì)和初生細(xì)胞壁之間形成了次生細(xì)胞壁。)強(qiáng)度主要來(lái)自于微纖絲。初生壁一般較?。?～3μm），富有彈性。,植物(zh237。jūn)細(xì)胞壁的結(jié)構(gòu)示意圖,12,第十二頁(yè)，共七十四頁(yè)。 與酵母和細(xì)菌的細(xì)胞壁一樣，真菌細(xì)胞壁的強(qiáng)度和聚合物的網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)有關(guān)，不僅如此，它還含有幾丁質(zhì)或纖維素的纖維狀結(jié)構(gòu)，所以強(qiáng)度有所提高。,真菌(zhēnjūn)的細(xì)胞壁,真菌的細(xì)胞壁較厚，主要由多糖組成，其次還含有較少量的蛋白質(zhì)和脂類。ng)了細(xì)胞壁的剛性骨架，使細(xì)胞具有一定的形狀， 上面的是一層糖蛋白， 最外層是甘露聚糖，由1,6磷酸二酯鍵連接成網(wǎng)狀。,9,第九頁(yè)，共七十四頁(yè)。jūn)細(xì)胞壁結(jié)構(gòu),破碎細(xì)菌的主要阻力是來(lái)自于肽聚糖的網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)，其網(wǎng)結(jié)構(gòu)的致密程度和強(qiáng)度取決于聚糖鏈上所存在的肽鍵的數(shù)量和其交聯(lián)的程度。jūn)細(xì)胞壁結(jié)構(gòu),幾乎所有細(xì)菌(x236。 通常細(xì)胞壁較堅(jiān)韌，細(xì)胞膜脆弱，易受滲透壓沖擊而破碎，因此細(xì)胞破碎的阻力主要來(lái)自于細(xì)胞壁。g242。 為了(w232。 脂類物質(zhì)和一些抗生素包含在生物體中。i sh249。y)方法,本章的主要內(nèi)容,3,第三頁(yè)，共七十四頁(yè)。n)的細(xì)胞壁結(jié)構(gòu),細(xì)胞破碎(p242。ch233。,生物分離過(guò)程(gu242。nɡ ji224。n hu224。),不同類型的細(xì)胞分泌目標(biāo)產(chǎn)物的類型： 動(dòng)物細(xì)胞多分泌到細(xì)胞外培養(yǎng)液 植物細(xì)胞多為胞內(nèi)產(chǎn)物 微生物（細(xì)菌/酵母/真菌）胞內(nèi)、胞外 對(duì)于(du236。,概述(ɡ224。 尤其是由基因工程菌產(chǎn)生(chǎnshēng)的大多數(shù)蛋白質(zhì)是在細(xì)胞內(nèi)沉積。 細(xì)胞破碎技術(shù)是分離純化細(xì)胞內(nèi)合成的非分泌型生化物質(zhì)（產(chǎn)品）的基礎(chǔ)。,3.1 細(xì)胞壁結(jié)構(gòu)(ji233。)細(xì)胞外層均為細(xì)胞壁，細(xì)胞壁里面是細(xì)胞膜，動(dòng)物細(xì)胞沒(méi)有細(xì)胞壁，僅有細(xì)胞膜。,細(xì)菌(x236。,細(xì)菌(x236。ng)菌典型的生物是大腸桿菌，通過(guò)這種細(xì)胞生產(chǎn)了很多細(xì)胞重組的產(chǎn)物。uch233。,10,第十頁(yè)，共七十四頁(yè)。ng)，少數(shù)含纖維素。,紅面包霉菌(m233。nɡ)和結(jié)構(gòu),13,第十三頁(yè)，共七十四頁(yè)。 初生壁是細(xì)胞生長(zhǎng)期形成的。 它是構(gòu)成細(xì)胞壁的骨架，細(xì)胞壁的機(jī)械(jīxi232。w249。 因此次生壁的形成提高了細(xì)胞壁的堅(jiān)硬性，使植物細(xì)胞具有很高的機(jī)械強(qiáng)度。)技術(shù),16,第十六頁(yè)，共七十四頁(yè)。lǐ)破碎,溫度差破碎法 壓力差破