【正文】 ，共六十八頁。 ② 中斷接合 在接合處理后的不同時間攪拌（斷開接合管,使配對的細(xì)菌 分開）和提取樣品，從而獲得不同接合時間（ min）的細(xì)菌樣品。 形成(x237。,Hfr 菌株 thr+ leu+ azir tonr lac+ gal+ strs F 菌株 thr－ leu－ azis tons lac－ gal－ strr,azi 疊氮化鈉；ton:噬菌體T1；str: 鏈霉素 ； lac:乳糖(rǔ t225。,7.3.2 中斷雜交(z225。內(nèi)外(n232。 ⑤ F′ F－ ，可接合，并將受體F－ 轉(zhuǎn)變?yōu)镕′ ，并對所攜帶的宿主基因是高頻重組。ngch233。)到宿主染色體上。這種含有細(xì)菌染色體基因的 F 因子叫做F’（F prime）因子,第二十六頁，共六十八頁。n)重組 high frequency of recombination，Hfr,F＋ 與F－ 之間雜交只有F因子的傳遞，而細(xì)菌的染色體并不轉(zhuǎn)移，因此盡管F因子轉(zhuǎn)移頻率很高，但兩者染色體之間重組頻率很低，大約是每百萬個細(xì)胞中發(fā)生一次重組，因此F＋ 品系稱為 低頻重組（ low frequency recombination，Lfr） 。n yǒu)F因子，供體 F－細(xì)胞：不含F(xiàn)因子，受體,第二十四頁，共六十八頁。jūn)的接合,F因子：fertility factor 致育因子或性因子。,第二十二頁，共六十八頁。)，只有象DNA這樣0.1微米的游離分子、培養(yǎng)液和營養(yǎng)物質(zhì)可以通過(tōnggu242。ng)的解釋：,第二十一頁，共六十八頁。)實驗設(shè)計的嚴(yán)謹(jǐn)性 嚴(yán)格的對照control 多重營養(yǎng)缺陷型,1946年， Lederberg和Tatum的實驗 結(jié)果(jiē guǒ)說明了什么？,結(jié)果A+B混合培養(yǎng)后的菌液涂布在基本培養(yǎng)基上可以1/107的頻率長出原養(yǎng)型菌落，而單獨的A和B則不能在基本培養(yǎng)基上生長。,第十九頁，共六十八頁。nɡ zǔ)可以通過三種途徑來實現(xiàn)： （1）接合（conjugation）：細(xì)菌細(xì)胞經(jīng)直接接觸，把一個 細(xì)胞（供體）的遺傳物質(zhì)傳遞給另一個細(xì)胞（受體）， 從而實現(xiàn)遺傳重組。,7.2.2 細(xì)菌(x236。如對鏈霉素抗性突變的細(xì)菌是由于核糖體的30S亞基的S12蛋白變異，鏈霉素能和敏感細(xì)菌（野生型）的S12結(jié)合，從而使翻譯過程發(fā)生差錯或者使翻譯過程的啟動作用失效。,（3）抗性突變型（ resistant mutants） 細(xì)菌由于某基因的突變而對某些噬菌體或抗生素產(chǎn)生抗性（resistant）。 如Lac－突變型不能分解乳糖，因此就不能生長在以乳糖為唯一碳源的基本(jīběn)培養(yǎng)基中，而野生型Lac＋細(xì)菌都能利用乳糖。,第十四頁，共六十八頁。 ch225。iku224。,在K12 MG1655菌株中，基因的平均長度為950bp,基因之間的平均間隔約為118bp，但是菌株之間可能會有很大的差別。zhōng)：87.8％ 編碼蛋白質(zhì) 0.8％ 編碼穩(wěn)定性RNA 0.7% 無編碼功能的重復(fù)序列 11％ 屬調(diào)節(jié)序列和具有其它功能 在編碼蛋白質(zhì)序列：總共編碼4288種已知和未知的蛋白質(zhì)（可讀框），其中約38％功能不明。擬核的中央(zhōngyāng)部分為支架蛋白和RNA。染色體(擬核)的結(jié)構(gòu)域是超螺旋結(jié)構(gòu)。ng)：1 333 μm長，而其細(xì)胞長度約為2 μm 、寬1μm ，必須壓縮最少1 000倍后才能裝入細(xì)胞中。g242。這種結(jié)構(gòu)有利于外源DNA的插入。,7.1.2 細(xì)菌(x236。 細(xì)菌繁殖：雙鏈環(huán)形DNA分子隨著細(xì)胞(x236。d224。,細(xì)菌: 真細(xì)菌（eubacteria）如大腸桿菌（Escherchia coli） 古細(xì)菌（archaebacteria）如詹氏甲烷球菌 （Methanococcus jannaschii） 多種形態(tài)存在：球菌（cocci） 桿菌（bacilli ） 螺旋菌（sprilla）等 大?。弘S種類(zhǒngl232。jūn)的細(xì)胞和基因組,7.1.1 細(xì)菌(x236。,本章主要以大腸桿菌（E. coli ）為材料(c225。7.1 細(xì)菌(x236。n)分析,第一頁，共六十八頁。,7.1 細(xì)菌(x236。jūn)的細(xì)胞,E. coli 的菌落colony,第四頁，共六十八頁。 單細(xì)胞→菌落（clone）/菌株（strain） 世代(sh236。,經(jīng)滲透處理(chǔlǐ)的E.Coli 釋放出來的DNA，其染色體長度1200μm,細(xì)菌染色體不凝縮，沒有著絲粒，也沒有紡錘體結(jié)構(gòu)。r fēn)分裂,第七頁，共六十八頁。位于細(xì)胞內(nèi)一個稱為“擬核”（nucleoid）的區(qū)域中。,擬核結(jié)構(gòu)(ji233。ngku224。大腸桿菌擬核中約有100個結(jié)構(gòu)域，每個相當(dāng)于40 kb，各個結(jié)構(gòu)域具有相對的獨立性。,如用DNA酶處理大腸桿菌擬核，各結(jié)構(gòu)域DNA鏈將會斷裂，超螺旋結(jié)構(gòu)受到破壞，變?yōu)樗沙谛徒Y(jié)構(gòu)。,E.coli的染色體為閉合雙鏈環(huán)狀DNA，長約1333μm. 1997年測定完成 E.coli K12 MG1655菌株全基因組: 4639229（約4.7106）bp 其中(q237。ng),第十一頁，共六十八頁。)的： K12 W3110基因組大小為 4646332bp，基因總數(shù)為4464個 K12 MG1655基因組大小為4639229bp，基因總數(shù)為4288個,E. coli 的全基因組概況(g224。,7.2 大腸桿菌(d224。它們多是條件致死突變（condition lethal mutation），因為能通過在基本培養(yǎng)基中添加所需的有機(jī)成分使具有這種突變的細(xì)菌存活。 同樣，一系列降解功能的實現(xiàn)也需要許多有關(guān)基因的表達(dá)，其中任何一個基因的突變都會影響降解功能的實現(xiàn)。,第十五頁，共六十八頁。 對抗生素產(chǎn)生抗性的突變是一個嚴(yán)重的公害問題，所以研究得也較深入，而且細(xì)菌對各種抗生素的抗性機(jī)制各不相同。,第十七頁，共六十八頁。n)雜交染色體作圖,細(xì)菌中，大腸桿菌（E. coli）是最為廣泛的遺傳學(xué)實驗材料 細(xì)菌的遺傳重組(zh242。 （3）轉(zhuǎn)導(dǎo)（transduction）：是指一種細(xì)菌的DNA片段經(jīng) 過溫和的或經(jīng)有缺陷的噬菌體傳遞給另一種細(xì)菌。 y236。ng)是基因型的改變，可能是培養(yǎng)上的互補，即一些物質(zhì)從一個品系的細(xì)胞中泄漏出來而被另一個品系的細(xì)胞所吸收？ 3. 還是另一種可能，是基因型的改變，但不一定是由于兩個品系間的雜交，而是一個品系的DNA片段逸出細(xì)胞后，攜帶著相應(yīng)的基因（如met+ bio+）進(jìn)入另一個品系的細(xì)胞，因為這種轉(zhuǎn)化作用而產(chǎn)生了上述的原養(yǎng)型？,實驗結(jié)果可能(kěn233。濾器的孔很