【正文】 3．研究隊伍人員配置 ........................................................................................................... 43 七、產(chǎn)業(yè)化依托或工程依托落實情況 ........................................................................................... 44 1．項目承擔(dān)單位 .................................................................................................................. 44 2．項目成果對接企業(yè) ........................................................................................................... 46 3．與企業(yè)的對接協(xié)議 ........................................................................................................... 46 八、技術(shù)經(jīng)濟(jì)分析和社會經(jīng)濟(jì)效益分析 ....................................................................................... 48 1．茄科土傳病害拮抗菌劑的研究為解決 “餐桌污染 ”提供技術(shù)保障 ........................................ 48 2．茄科土傳病害拮抗菌劑的應(yīng)用對提高中國農(nóng)產(chǎn)品貿(mào)易競爭力意義重大 .............................. 48 3．茄科土傳病害拮抗菌劑的研究與綠 色食品產(chǎn)業(yè)息息相關(guān) ................................................... 48 4．茄科土傳病害拮抗菌劑的研究是創(chuàng)匯農(nóng)業(yè)產(chǎn)業(yè)的基礎(chǔ) ...................................................... 48 5．茄科土傳病害拮抗菌劑的研究與環(huán)境保護(hù)產(chǎn)業(yè)緊密相聯(lián) ................................................... 48 6．茄科土傳病害拮抗菌劑的研究將成為我省生物工程產(chǎn)業(yè)龍頭 ............................................ 49 7．茄科土傳病害拮抗菌劑的應(yīng)用將帶動商業(yè)貿(mào)易的發(fā)展 ...................................................... 49 九、項目資金預(yù)算 ....................................................................................................................... 50 1．資金預(yù)算 ......................................................................................................................... 50 2．資金籌措 ......................................................................................................................... 50 十、項目申報單位及協(xié)作單位概況 .............................................................................................. 51 十 一、其他需要說明的情況 ......................................................................................................... 52 1．安全食品的發(fā)展對本研究的需求 ...................................................................................... 52 2．控制茄科土傳病害的暴發(fā)是本研究的目的 ........................................................................ 52 3．經(jīng)濟(jì)效益預(yù)測 .................................................................................................................. 52 十二、項目申報單位簽章 ............................................................................................................ 53 十三、項目主持單位審核并蓋章 .................................................................................................. 53 相關(guān)附件： 1．福建眾智生物科技有限公司營業(yè)執(zhí)照復(fù)印件 2．成 果對接協(xié)議 茄科土傳病害生物防治拮抗菌劑生產(chǎn)工藝關(guān)鍵技術(shù)的研究與應(yīng)用 1 茄科土傳病害生物防治拮抗菌劑生產(chǎn)工藝 關(guān)鍵技術(shù)的研究與應(yīng)用 一、項目概要 1．項目名稱 茄科土傳病害生物防治拮抗菌劑生產(chǎn)工藝關(guān)鍵技術(shù)的研究與應(yīng)用。其中自籌資金 80 萬元，向省發(fā)改委申請項目專項資金 80 萬元。拮抗菌劑進(jìn)行茄科土傳病害生物防治成為研究的重點(diǎn)，顯示出很好的應(yīng)用前景。 （ 4）建立茄科土傳病害拮抗菌劑工藝關(guān)鍵技術(shù)研究體系， 研究拮抗菌劑的培養(yǎng)基配方、發(fā)酵條件、分離工藝、濃縮工藝、提取工藝、制劑配方技術(shù)、助劑技術(shù)、制劑工藝等，制定拮抗菌劑 的生產(chǎn)質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)和生 產(chǎn)工藝標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程， 建成 茄科土傳病害茄科土傳病害拮抗菌劑工藝研究中試車間，并形成年產(chǎn) 100 噸的中試生產(chǎn)規(guī)模 。通過轉(zhuǎn)讓形式向國內(nèi)外生產(chǎn)企業(yè)和研究機(jī)構(gòu)相關(guān)配套技術(shù)，促進(jìn)生物農(nóng)藥資源的高效共享和持續(xù)利用。據(jù)目前的統(tǒng)計， 茄科土傳病害如 青枯病能侵染 44 多科 300 多種植物，其中包括許多重要的經(jīng)濟(jì)作物和糧食作物，引起的經(jīng)濟(jì)損失極為嚴(yán)重。 圖 1 青枯病為害的植株 圖 2 青枯病病原菌 圖 3 病原細(xì)菌堵塞維管束 2．茄科土傳病害危害及經(jīng)濟(jì)重要性 茄科土傳病害如青枯病菌寄主范圍非常廣泛，能侵染 44 多個科 200 多種植物，主要危害茄子、番茄、馬鈴薯和辣椒等茄科作物，并能侵害占國民經(jīng)濟(jì)重要地位的煙草、生姜、花生等多種經(jīng)濟(jì)作物。 3．茄科土傳病害流行猖獗 青枯雷爾氏菌（ R. solanacearum）主要在土壤中及遺落在土壤中的病株殘體上越冬，亦能潛伏 茄科土傳病害生物防治拮抗菌劑生產(chǎn)工藝關(guān)鍵技術(shù)的研究與應(yīng)用 4 于種子中或生長在各種寄主體內(nèi)。附生于作物表面的菌源可由雨水傳播，雨水將煙草表面的菌源洗落于地，可使土壤表面的病原菌濃度增高。曾東方等（ 1994）從湖北紅安花生青枯病病地采集的花生種子，未經(jīng)晾曬直接播于溫室，青枯病發(fā)病率分別為 %和%。 4．茄科土傳病害的危害及防治的關(guān)鍵問題 青枯病對茄科植物的危害甚為嚴(yán)重， 1988 年對南京地區(qū)茄科作物青枯病調(diào)查報道表明，一般田塊發(fā)病率為 25~30%，嚴(yán)重田塊可達(dá) 80~100%。此外，在花生、辣椒、番茄、茄子、甘薯、生姜等作物上，青枯病發(fā)生亦很嚴(yán)重，易感病作物面積近 500 萬畝。但是，無病留種及上述措施的推行難度較大；化學(xué)防治藥劑污染、殘留過多，效果也并不十分顯著；同時頻發(fā)的厄爾尼諾，使全球的氣候條件也越來越適宜青枯病的發(fā)生，因此，青枯病未能得到有效的控制，其危害仍在加重。 茄科土傳病害生物防治拮抗菌劑生產(chǎn)工藝關(guān)鍵技術(shù)的研究與應(yīng)用 5 三、國內(nèi)外相關(guān)技術(shù)發(fā)展概況和趨勢 （一）青枯病研究進(jìn)展 1．植物青枯病的癥 狀 植物青枯病是由青枯雷爾氏菌引起的土傳病害。但近年來，田間也發(fā)現(xiàn)呈枯萎或萎蔫病狀的青枯病植株， 1990 年在山東沂南縣調(diào)查發(fā)現(xiàn)煙草枯萎的病株，分離到 5 個細(xì)菌菌株，經(jīng)對各菌株致病性測定、格蘭氏 染色反應(yīng)、細(xì)菌形態(tài)、培養(yǎng)性狀、生理生化測定和血清學(xué)反應(yīng)的鑒定，結(jié)果表明：這５個菌株均屬于青枯雷爾氏菌（ R. solanacearum）（鄭繼法等， 1990）。極生鞭毛 1～ 4 根。由于 青枯雷爾氏菌（ R. solanacearum）在土壤中存活時間長、傳播快，用藥劑防治不能有效地控制病害蟲的發(fā)生，導(dǎo)致連作區(qū)煙草發(fā)病更嚴(yán)重，減產(chǎn)高達(dá) 60%以上，甚至失收。接種量大時，就是沒有傷口，此菌也能侵入，一般是從次生根萌發(fā)處或根毛與皮層連接處侵 入，侵入率較低。用無致病力產(chǎn)細(xì)菌素的青枯雷爾氏菌（ ABPS） 121 菌株、日 本 Tanaka 等用 ABPSM4S 菌株及其噬菌體、日本的 Hara 和 Ono 用 ABPS OM2 菌株、朝鮮Yi 用 ABPS Y611 菌株防治煙草青枯病，任欣正等用 ABPS 菌株 MA7 和 nOE104 防治番茄青枯病，均取得溫室或小區(qū)試驗的良好的防效，但后期防效降低，大田試驗尚未取得成功，這可能性主要由于 ABPS 菌株在大田土壤中不能大量繁殖，缺乏與其它微生物的競爭力所致。 （ 2）芽孢桿菌的利用 Bacillus 、易保存、有效期長等特性，較之其它生防菌更受到廠家和商家的青睞。試驗防效在 4595%。經(jīng)多次分離 篩選，從土壤中分離出了對作物無不良影響而對番茄青枯雷爾氏菌有拮抗作用的菌株 104 個。因此菌根真菌作為根際群落的組成，其重要作用受到越來越廣泛 的承認(rèn)。 VAM 的作用可能是建立了一種機(jī)械屏障，阻止病原細(xì)菌進(jìn)入寄主組織。郭堅華等（ 1996）利用抑菌圈 定殖力雙重測定法成功地篩選了青枯病生防細(xì)菌，該研究首先用平皿抑菌圈法，篩選出 55 個拮抗青枯雷爾氏菌的細(xì)菌菌株，將番茄幼苗在各菌菌懸液中浸根 12ｈ后，栽種于溫室未滅菌的土壤中，結(jié)果發(fā)現(xiàn)：有 22 個菌株在幼苗根部的定殖能力較強(qiáng)（終定殖密度大于 104cfu/g 根）， 茄科土傳病害生物防治拮抗菌劑生產(chǎn)工藝關(guān)鍵技術(shù)的研究與應(yīng)用 8 其中革蘭氏 陰性土壤細(xì)菌占同類菌的 ％，革蘭氏陽性土壤細(xì)菌占同類菌的 ％，其中有 17 個拮抗菌菌株在番茄幼苗根部的定殖密度超過所有致病菌。 （ 7）基因工程生防菌的利用 中國農(nóng)科院植保所康耀衛(wèi)等采用轉(zhuǎn)座子 Tn5 誘變 R. solanacearum，獲得了世界首例植物青枯雷爾氏菌胞外蛋白輸出缺失突變體（簡稱 eep 突變體）。雖然防效不甚理想，但在理論上該項研究代表 了一個新的發(fā)展方向。 （ 8） 植物青枯病的 生防菌劑 研究 關(guān)于青枯生防菌的生產(chǎn)工藝探索和研究，國內(nèi)外研究者通過改進(jìn)生產(chǎn)工藝，如營養(yǎng)配方、通氣狀態(tài)等，來提高生防菌的發(fā)酵水平，來提高生防菌的防治效果。 （二）枯萎病研究現(xiàn)狀 1．枯萎病的發(fā)生與危害 枯萎病 原 枯萎病是一類植物病害的總稱，因病原菌的侵害，造成植物枯死萎蔫．枯萎病有細(xì)菌性病原（如香蕉細(xì)菌性枯萎病等 [1]）和真菌性病原兩種 [2]．本文所指的枯萎病為真菌性病原，是由鐮刀菌屬真菌寄生引起的一種世界性的真菌土傳病害 [3]，其中尖孢鐮刀菌 (Fusarium oxysporum Schl.)是主要病菌種類之一．尖孢鐮刀菌屬 半知菌類（ Fungiimperfecti）、梗孢目（ Moniliales）、痤孢科（ Tubercular）、鐮刀菌屬（ Fusarium）．自從 Snyder 和 Hansen（ 1940）把鐮刀 菌屬美麗組內(nèi)的種合并為 1 個，成為尖孢鐮刀菌（ F. oxysporum） [4]． 寄主范圍 （ 1）經(jīng)濟(jì)作物：棉花、油桐、蓖麻、亞麻等 [5,6]．（ 2）茄科作物：番茄、胡椒、茄子、煙草、馬鈴薯等 [7,8]．（ 3）瓜類作物：黃瓜、節(jié)瓜、冬瓜、西瓜、南瓜、西葫蘆、甜瓜、絲瓜、白瓜、越瓜、苦瓜、葫蘆瓜、哈密瓜等 [9]．（ 4）豆科作物：大豆、四季豆、豇豆、豬屎豆、豌豆等 [10]．（ 5）花卉植物：康乃馨、郁金香、魚尾菊、非洲菊、鳶尾、水仙、翠菊、合歡、百合、仙人掌、穿心蓮、一品紅、草坪草等