光度測(cè)定法bet檢查技術(shù)-全文預(yù)覽
【正文】 根據(jù)干擾試驗(yàn)結(jié)果，選擇無干擾的供試品濃度進(jìn)行 BET日常檢查? 各反應(yīng)溶液的制備及反應(yīng)項(xiàng)目設(shè)置與干擾試驗(yàn)相同溶液編號(hào) 項(xiàng) 目 平行管D 陰性對(duì)照 O OC 內(nèi)毒素標(biāo)準(zhǔn)(EU/mL) O O O OE2 O OA S80 O OB O O2023/1/2848結(jié)果判斷? 藥典要求– 陰性對(duì)照的反應(yīng)時(shí)間 (TD)大于標(biāo)準(zhǔn)曲線最低濃度的反應(yīng)時(shí)間 (Tλ)– 標(biāo)準(zhǔn)曲線的相關(guān)系數(shù) |r|≥– 各批樣品的回收率 R滿足： 50% ≤R ≤200%? 廠家建議值– 變異系數(shù) CV%10%? 若供試品溶液 A所有平行管的內(nèi)毒素濃度平均值乘以稀釋倍數(shù)后，小于規(guī)定的內(nèi)毒素限值，判供試品符合規(guī)定，否則判供試品不符合規(guī)定 ? 無復(fù)測(cè)要求2023/1/2849終點(diǎn)比色法 BET? 原理– 當(dāng)鱟試驗(yàn)的顯色反應(yīng)到達(dá)預(yù)設(shè)的反應(yīng)終止時(shí)間（ T0)時(shí)，反應(yīng)混合液的吸光度值（ OD） 與內(nèi)毒素濃度（ C） 成正比，利用標(biāo)準(zhǔn)內(nèi)毒素建立 ODC的標(biāo)準(zhǔn)曲線，利用標(biāo)準(zhǔn)曲線定量測(cè)定供試品的內(nèi)毒素含量。2023/1/2829試驗(yàn)完成后進(jìn)行數(shù)據(jù)分析2023/1/2830試驗(yàn)完成后進(jìn)行數(shù)據(jù)分析2023/1/2831試驗(yàn)完成后進(jìn)行數(shù)據(jù)分析2023/1/28323 ）干擾初篩試驗(yàn)? 目的及原理– 只有在無干擾情況下，樣品的內(nèi)毒素檢測(cè)結(jié)果才是有效的。? 填寫相關(guān)的實(shí)驗(yàn)參數(shù)，使軟件進(jìn)入待采集狀態(tài)2023/1/2826加樣反應(yīng)– 先將復(fù)溶好的鱟試劑分裝至各反應(yīng)試管中， ；– 分別將反應(yīng)溶液加入各相應(yīng)反應(yīng)管中，一般按照從低濃度到高濃度的順序加樣，首先加陰性對(duì)照溶液；– 加樣完成后，將每支反應(yīng)管內(nèi)的混合液輕輕混勻后，插入動(dòng)態(tài)儀中反應(yīng)TALCSE NCBET水 加樣順序從低濃度到高濃度2023/1/2827在動(dòng)態(tài)儀中插入反應(yīng)試管后，開始數(shù)據(jù)采集?！?， 這是國(guó)內(nèi)同類儀器無法達(dá) 到的。Rt(%)T(分 )C1 C2C3100R1R2R3預(yù)設(shè)反應(yīng)終止時(shí)間 T0 RtR3R2R1C3 C2 C1Rt=bK2023/1/288光度測(cè)定法 BET試驗(yàn)的相關(guān)變量C3100Rt（ %）T（分）C2C1相關(guān)變量：? 內(nèi)毒素濃度 (C)? 透光度 (Rt或 OD)? 反應(yīng)時(shí)間 (T)2023/1/2891）動(dòng)態(tài)法原理? 固定透光度 (Rt)，建立內(nèi)毒素濃度與反應(yīng)時(shí)間關(guān)系的標(biāo)準(zhǔn)曲線（ CT曲線），用供試品的反應(yīng)時(shí)間比對(duì)標(biāo)準(zhǔn)曲線，得出供試品的內(nèi)毒素濃度。入射光反應(yīng)混合物透射光光電池I透光容器2023/1/284? 設(shè)：初始時(shí)的透光強(qiáng)度為 Is，某時(shí)刻的透光強(qiáng)度為 It定義 1：透光度（ Rt）： Rt=It/Is(%) 初始時(shí) It=Is， Rt=100%， Rt曲線變化趨勢(shì)是由高至低。– 當(dāng)一束光線進(jìn)入如下光電轉(zhuǎn)換裝置時(shí)，該裝置將產(chǎn)生電流 I，我們稱 I為透光強(qiáng)度。T(分)IsItIeI2023/1/285TAL與內(nèi)毒素反應(yīng)的動(dòng)態(tài)曲線 (RtT曲線 )? 以透光度（ Rt）為縱座標(biāo)，時(shí)間（ T）為橫座標(biāo)，把 TAL與內(nèi)毒素反應(yīng)引起反應(yīng)混合液透光度的變化連續(xù)地描繪在座標(biāo)系中，便得到該反應(yīng)的動(dòng)態(tài)曲線如圖：Rt（ %）T（分）動(dòng)態(tài)曲線100孕育期 反應(yīng)期 結(jié)束2023/1/286TAL與內(nèi)毒素反應(yīng)的動(dòng)態(tài)曲線 (ODT曲線 )? 以吸光度（ OD）為縱座標(biāo)，時(shí)間（ T）為橫座標(biāo)，把 TAL與內(nèi)毒素反應(yīng)引起反應(yīng)混合液吸光度的變化連續(xù)地描繪在座標(biāo)系中，便得到該反應(yīng)的動(dòng)態(tài)曲線如圖：ODT（分）動(dòng)態(tài)曲線0孕育期 反應(yīng)期 結(jié)束2023/1/287動(dòng)態(tài)曲線的特點(diǎn)? 把標(biāo)準(zhǔn)內(nèi)毒素制備成三個(gè)濃度 C C C3（ C1C2C3 ），分別與 TAL反應(yīng)，描繪出反應(yīng)的動(dòng)態(tài)曲線如下圖：C3Rt（ %）T（分）C2C1分析動(dòng)態(tài)曲線可看出：1. 內(nèi)毒素濃度越高，孕育期越短；2. 內(nèi)毒素濃度越高，反應(yīng)期曲線越陡；3. 內(nèi)毒素濃度越高，進(jìn)入結(jié)束期越快。比對(duì)標(biāo)準(zhǔn)曲線Ts T(分 )Rt(%)R0CsLgT
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