實驗動物胚胎工程技術(shù)-全文預(yù)覽
【正文】 造血干細胞 (HSC)和骨髓間質(zhì)干細胞 (MSC)。再用各種技術(shù)從體外培養(yǎng)細胞中分離 AS細胞 ，如用免疫磁珠分離系統(tǒng)分離乳腺AS細胞 。 49 ，用于器官移植 隨著組織工程技術(shù)的發(fā)展，通過 ES細胞體外誘導分化，還可以培育出人造組織器官，解決目前臨床上存在的供體器官不足和器官移植后免疫排斥的問題。用于研究未知基因的生物學功能。 46 ES細胞僅在飼養(yǎng)層細胞上或在添加白血病抑制因子 (LIF)或白細胞介素 6(IL6)的培養(yǎng)液中維持不分化狀態(tài)。 ? SSEAs: 人 ES細胞表達 SSEA3和 SSEA4， 但不表達 SSEA1?；チ鰞?nèi)部有多種細胞生長，如上皮細胞、骨骼肌細胞、心肌細胞、神經(jīng)細胞、成纖維細胞以及干細胞集落等，也可看到各胚層組織的分化，如軟骨、肌肉組織、上皮組織及腺體等。在培養(yǎng)液中加用白血病抑制因子（ Leukemia Inhibitory Factor， LIF）能更有效地維持未分化的 ES細胞。 42 目前除了從 小鼠、大鼠 和人 分離得到并建立 ES細胞系外，還未從其它動物的囊胚中分離到 ES細胞系。 ? 內(nèi)細胞群 :具有未分化特性，可進一步分裂 ,分化形成內(nèi)、中、外三個胚層。他們通過慢病毒載體介導將 Oct Sox cMyc 和 Klf4 4 種轉(zhuǎn)錄因子基因 導入小鼠皮膚成纖維細胞 , 獲得了具有強大的自我更新能力和分化潛能的多能性干細胞 , 命名為 “誘導性多潛能干細胞” (Induced pluripotent stem cells, iPS 細胞 )。根據(jù)發(fā)育階段，可將干細胞分為 胚胎干細胞(embryonic stem cells， ES細胞 )和 成體干細胞 (adult stem cells， AS細胞 )。 32 ? 核移植 （ Nuclear transfer） 是指將動物細胞的細胞核移植到另一個體的去核卵母細胞胞質(zhì)中 ， 通過電激活 ， 使供體核重編程序 ， 形成的重構(gòu)卵發(fā)育成胚胎 ， 最后通過胚胎移植 ， 使之發(fā)育成個體 。 ⒋ 應(yīng)用于實驗動物育種和野生動物的實驗動物化。 28 ? 采用低溫保護劑防止低溫損傷： 二甲基亞砜（ DMSO）、聚乙烯砒咯烷酮 (pvp)、甲醇、乙二醇、羥甲基淀粉（ HES）等可以避免或減少結(jié)冰的程度與速度，降低細胞周圍未凍結(jié)溶液中的電解質(zhì)濃度，從而避免或減少胚胎冷凍過程中所發(fā)生的物理和化學損傷。 六、胚胎冷凍保存 27 （一）胚胎冷凍保存的機制 ? 低溫降低了胚胎內(nèi)的生化反應(yīng)速度。 25 同一種屬內(nèi)的不同品種品系可互相進行胚胎移植。 五、胚胎移植 24 體外培養(yǎng)的胚胎必須移植到同步發(fā)情的雌性動物生殖管道內(nèi)。 目前胚胎培養(yǎng)技術(shù)已經(jīng)可以將未成熟卵在體外成熟，并通過體外受精發(fā)育成各階段的早期胚胎。 四、胚胎培養(yǎng) 22 胚胎培養(yǎng)一般應(yīng)用于以下幾個方面： 1．未成熟卵母細胞通過體外培養(yǎng)，成熟后進行體外受精。 19 （二）對胚胎進行鑒定以控制性別 在胚胎移植前對胚胎的部分組織用染色體檢查、間接免疫熒光法和 PCR法進行性別鑒定。 正常人染色體 18 具體的做法是： ?先用 DNA特異性染料對精子進行活體染色，然后精子連同少量稀釋液逐個通過激光束。 目前將 X和 Y精子分離的方法有沉降法 、 電泳法 、免疫法和流式細胞儀法等 。攜帶此致病基因的女性懷孕后如做胚胎性別鑒定，則可避免男性患兒的出生。 二、體外受精 14 性別控制的研究，是畜牧業(yè)生物技術(shù)中一項重要的高新技術(shù)。 所用激素有促卵泡激素（ FSH）、人絨毛膜促性腺激素(HCG)和孕馬血清促性腺激素（ PMSG）、孕酮和前列腺素（ PG）等，以前三種常用。 一、精子、卵母細胞、受精卵的采集和超數(shù)排卵 10 在哺乳動物中獲得卵母細胞的途徑有兩條： ? 從體內(nèi)成熟并排到輸卵管中去，需通過處死動物或外科手術(shù)獲取；如果在交配后，則可獲取受精卵或早期胚胎。 4． 在生命科學研究方面： 闡明哺乳動物早期胚胎發(fā)生 、 發(fā)育機制等基礎(chǔ)理論 5． 在拯救瀕危野生動物方面： 通過野生動物生殖細胞和組織的冷凍保存 、 體細胞克隆和胚胎移植技術(shù) ， 擴大野生動物的種群 。 遺傳（基因）工程 蛋白質(zhì)工程 酶工程 細胞工程 微生物工程 胚胎工程 組織工程 分子水平 細胞水平 組織水平 3 胚胎工程（ Embryonic engineering） 又稱胚胎技術(shù) ,是指用工程學的原理對動物的胚胎進行某種技術(shù)操作或改造，使之獲得人們所需要動物的一系列生物技術(shù)的總稱 ,包括以下四大技術(shù)體系： 一 、 胚胎操作基本技術(shù) 、 精子 、 受精卵的采集 二 、 體細胞克隆技術(shù) 三 、 干細胞技術(shù) 四 、 外源基因?qū)爰夹g(shù) 4 1． 在畜牧業(yè)方面： 通過建立超數(shù)排卵 、 受精卵 /卵母細胞的采集 、 體外受精 、 胚胎切割 、 胚胎性別控制 、 體細胞克隆以及胚胎移植技術(shù) ， 加快良種家畜的繁殖和家畜品種的改良 。 生物工程： 按照工程學原理，對生物體或生物大分子進行改造或利用，用于生產(chǎn)、研究、檢定和創(chuàng)造新物種的綜合性科學技術(shù)。 6 3． 在醫(yī)學方面： 通過建立卵母細胞的采集 、 體外受精 、 顯微受精以及胚胎移植技術(shù) ， 用于不孕癥的治療； 通過對胚胎培養(yǎng)和檢測 ， 剔除具有遺傳性疾病的胚胎 ， 達到優(yōu)生優(yōu)育的目的 。 ?大動物的精液采集可采用假陰道或電刺激方法促進雄性射精，收集精液。經(jīng)超數(shù)排卵處理，動物卵巢大量的卵泡同時成熟并排
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