實(shí)驗(yàn)動(dòng)物胚胎工程技術(shù)-免費(fèi)閱讀
【正文】 這樣受體細(xì)胞抗 G418有正選擇作用，對(duì) Ganc無轉(zhuǎn)變功能而有負(fù)選擇作用，因此認(rèn)為存活的細(xì)胞是與導(dǎo)入基因發(fā)生同源重組的。 67 ? 同源重組（ Homologous rebination） 是指發(fā)生在 DNA同源序列之間的重組，其條件是兩條 DNA分子有相同序列部分，并且互相接近。 如果插入到一個(gè)基因內(nèi) ，可能導(dǎo)致該基因的失活 。出生后 動(dòng)物的基因型與供體的基因型完全一致。 ② 脂質(zhì)體法： 脂質(zhì)體是一種人造膜 ， 將外源 DNA裝入脂質(zhì)體 ， 與培養(yǎng)細(xì)胞一起溫育 ， 即可將外源 DNA導(dǎo)入受體細(xì)胞 。 iPS細(xì)胞的產(chǎn)生不需要早期胚胎或者其他配子的參與，克服了使用人胚胎進(jìn)行實(shí)驗(yàn)的倫理問題，可見 iPS細(xì)胞必然成為未來相當(dāng)長(zhǎng)一段時(shí)間內(nèi)的研究熱點(diǎn)。骨髓來源干細(xì)胞及其他來源干細(xì)胞都可以分化得到成骨細(xì)胞，通過將細(xì)胞與支架材料結(jié)合后移植于骨骼受損部位，用于修復(fù)骨骼缺損 。 51 2. AS細(xì)胞 的培養(yǎng)和誘導(dǎo)定向分化 取所要分離 AS細(xì)胞 的組織，用酶消化法分散細(xì)胞進(jìn)行體外培養(yǎng)。 通過篩選獲得陽(yáng)性細(xì)胞，然后用嵌合體或細(xì)胞核移植技術(shù)獲得轉(zhuǎn)基因動(dòng)物。 ES的分化導(dǎo)致 Oct4的下調(diào) 。 ? 未分化 ES細(xì)胞的培養(yǎng)一般需要與用絲裂霉素處理過的成纖維細(xì)胞飼養(yǎng)層（ Feeder cell）共培養(yǎng)，飼養(yǎng)層細(xì)胞為 ES細(xì)胞提供細(xì)胞因子來維持其未分化狀態(tài)。 41 二、胚胎干細(xì)胞（ ES細(xì)胞 ) ?來源： ES細(xì)胞是從胚胎發(fā)育早期囊胚（人胚胎受精后約 57天，小鼠胚胎受精后 34天）中 的內(nèi)細(xì)胞群 分離出來的未分化細(xì)胞。 33 根據(jù)供體核的來源不同，核移植包括以下幾種： ：未著床的囊胚（未分化） （未分化） ：出生前的胎兒（未分化或低分化） （已分化） 34 動(dòng)物克隆的實(shí)驗(yàn)過程 35 動(dòng)物克隆技術(shù)的意義與應(yīng)用 ? 加快良種家畜的繁殖速度 ? 與體細(xì)胞轉(zhuǎn)基因技術(shù)結(jié)合，能制備大家畜轉(zhuǎn)基因動(dòng)物 ? 拯救瀕危野生動(dòng)物 ? 治療性克隆，用于再生醫(yī)學(xué) 36 病人組織 體外培養(yǎng) 移植到去核卵母細(xì)胞內(nèi) 重構(gòu)胚發(fā)育到囊胚階段 分離 ES細(xì)胞 體外定向培養(yǎng)成特定細(xì)胞 再生醫(yī)學(xué)技術(shù)路線簡(jiǎn)介 37 第四節(jié) 干細(xì)胞技術(shù) 38 一、概述 干細(xì)胞是一類具有自我更新、高度增殖和多向分化潛能的細(xì)胞。 ⒊ 應(yīng)用于實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的生物凈化。 26 ? 胚胎冷凍保存（ embryo cryopreservation）技術(shù)是指在低溫（ 196℃ 液氮內(nèi)）條件下利用低溫保護(hù)劑保存生殖細(xì)胞及胚胎的一門技術(shù)。 幾乎所有的胚胎工程技術(shù)在體外完成對(duì)胚胎的操作后 ， 都需經(jīng)過胚胎移植這一步驟 ， 得到我們所要的動(dòng)物 。 20 21 受精卵 2細(xì)胞胚 4細(xì)胞胚 8細(xì)胞胚 桑椹胚 囊 胚 胚胎培養(yǎng)是指將獲得的早期胚胎在體外人工環(huán)境中進(jìn)行培養(yǎng)，以觀察其發(fā)育或人工干預(yù)某一發(fā)育過程的可能性。對(duì)于奶牛， X精子比 Y精子 DNA含量高 ％，由于染料著色量與精子DNA含量成正比，因此 X精子吸收的染料多，發(fā)出的熒光就比 Y精子強(qiáng)。有的遺傳性疾病屬于性連鎖遺傳，例如進(jìn)行性肌營(yíng)養(yǎng)不良，為 X連鎖隱性遺傳，男性發(fā)病，女性攜帶異?；虻话l(fā)病。經(jīng)超數(shù)排卵處理，動(dòng)物卵巢大量的卵泡同時(shí)成熟并排出，排卵數(shù)可增加幾倍至十幾倍，一次可獲得大量的卵細(xì)胞、受精卵或早期胚胎。 6 3． 在醫(yī)學(xué)方面： 通過建立卵母細(xì)胞的采集 、 體外受精 、 顯微受精以及胚胎移植技術(shù) ， 用于不孕癥的治療； 通過對(duì)胚胎培養(yǎng)和檢測(cè) ， 剔除具有遺傳性疾病的胚胎 ， 達(dá)到優(yōu)生優(yōu)育的目的 。 遺傳（基因）工程 蛋白質(zhì)工程 酶工程 細(xì)胞工程 微生物工程 胚胎工程 組織工程 分子水平 細(xì)胞水平 組織水平 3 胚胎工程（ Embryonic engineering） 又稱胚胎技術(shù) ,是指用工程學(xué)的原理對(duì)動(dòng)物的胚胎進(jìn)行某種技術(shù)操作或改造，使之獲得人們所需要?jiǎng)游锏囊幌盗猩锛夹g(shù)的總稱 ,包括以下四大技術(shù)體系： 一 、 胚胎操作基本技術(shù) 、 精子 、 受精卵的采集 二 、 體細(xì)胞克隆技術(shù) 三 、 干細(xì)胞技術(shù) 四 、 外源基因?qū)爰夹g(shù) 4 1． 在畜牧業(yè)方面： 通過建立超數(shù)排卵 、 受精卵 /卵母細(xì)胞的采集 、 體外受精 、 胚胎切割 、 胚胎性別控制 、 體細(xì)胞克隆以及胚胎移植技術(shù) ， 加快良種家畜的繁殖和家畜品種的改良 。 一、精子、卵母細(xì)胞、受精卵的采集和超數(shù)排卵 10 在哺乳動(dòng)物中獲得卵母細(xì)胞的途徑有兩條： ? 從體內(nèi)成熟并排到輸卵管中去，需通過處死動(dòng)物或外科手術(shù)獲取；如果在交配后，則可獲取受精卵或早期胚胎。 二、體外受精 14 性別控制的研究，是畜牧業(yè)生物技術(shù)中一項(xiàng)重要的高新技術(shù)。 目前將 X和 Y精子分離的方法有沉降法 、 電泳法 、免疫法和流式細(xì)胞儀法等 。 19 （二）對(duì)胚胎進(jìn)行鑒定以控制性別 在胚胎移植前對(duì)胚胎的部分組織用染色體檢查、間接免疫熒光法和 PCR法進(jìn)行性別鑒定。 目前胚胎培養(yǎng)技術(shù)已經(jīng)可以將未成熟卵在體外成熟，并通過體外受精發(fā)育成各階段的早期胚胎。 25 同一種屬內(nèi)的不同品種品系可互相進(jìn)行胚胎移植。 28 ? 采用低溫保護(hù)劑防止低溫?fù)p傷： 二甲基亞砜（ DMSO）、聚乙烯砒咯烷酮 (pvp)、甲醇、乙二醇、羥甲基淀粉（ HES）等可以避免或減少結(jié)冰的程度與速度，降低細(xì)胞周圍未凍結(jié)溶液中的電解質(zhì)濃度，從而避免或減少胚胎冷凍過程中所發(fā)生的物理和化學(xué)損傷。 3
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