【正文】 （沒有明天）有請維權(quán)志愿者們登場。15國際消費(fèi)者權(quán)益日”，宣傳中國消費(fèi)者協(xié)會確定的“新消費(fèi)，我做主”年主題，倡導(dǎo)“消費(fèi)者優(yōu)先”觀念，主張消費(fèi)者權(quán)益，推動(dòng)消費(fèi)維權(quán)事業(yè)不斷發(fā)展。　　B:眾所周知，每年的3月15日是“國際消費(fèi)者權(quán)益日”。各鄉(xiāng)鎮(zhèn)要根據(jù)不同情況，制定詳細(xì)的換屆工作預(yù)案，及時(shí)掌握輿情動(dòng)態(tài)，做到早了解、早掌握、早應(yīng)對、早處置，排除地方宗族勢力等因素在換屆工作中的影響，確保換屆工作風(fēng)清氣正。鄉(xiāng)鎮(zhèn)黨代會選出委員后，及時(shí)召開第一次紀(jì)委委員會議和黨委委員，選舉出紀(jì)委班子和黨委書記、副書記，公布結(jié)果后，再宣布會議閉幕。各鄉(xiāng)鎮(zhèn)黨委分管副書記、組織委員（干事）要充分發(fā)揮參謀助手作用，做好具體工作，協(xié)調(diào)、聯(lián)系有關(guān)部門積極配合，確保各鄉(xiāng)鎮(zhèn)換屆工作的順利進(jìn)行。一要落實(shí)堅(jiān)強(qiáng)有力的領(lǐng)導(dǎo)和指導(dǎo)。二是選出一個(gè)好班子。一是要形成一個(gè)好的工作報(bào)告。這個(gè)主題就是科學(xué)發(fā)展?！　∫陨狭信e的問題需要我們深刻思考，及時(shí)加以解決。對人事安排以外的工作重視不夠。如鄉(xiāng)鎮(zhèn)黨委換屆工作，就存在一些普遍性、苗頭性的問題。這里我重申下市委的立場，發(fā)展村集體經(jīng)濟(jì)不是要不要搞的問題，而是必須搞、任務(wù)必須完成的問題，這是考驗(yàn)領(lǐng)導(dǎo)干部責(zé)任心、經(jīng)濟(jì)頭腦和經(jīng)營能力的一次好機(jī)會。二是措施謀劃不實(shí)。一是思想認(rèn)識不深。各地各部門自覺把市委決策部署與本地本部門的實(shí)際結(jié)合起來, 明確今年黨建工作發(fā)展思路，初步提出全年黨建工作重點(diǎn)任務(wù)和工作措施。從剛才的匯報(bào)和平時(shí)掌握的情況看，總體感覺，今年以來，各地各部門認(rèn)真貫徹市委決策部署，堅(jiān)持嚴(yán)標(biāo)準(zhǔn)、實(shí)舉措推進(jìn)從嚴(yán)治黨，全市黨建工作形成了謀劃實(shí)、行動(dòng)快、效果好的良好開局。市委書記在第一季度黨建工作調(diào)度會上的講話　 　　1月份，市委召開了全市黨建工作會議，印發(fā)了2016年全市黨建工作要點(diǎn)，并與各鄉(xiāng)鎮(zhèn)、街道簽訂了黨建責(zé)任狀。工作中，要有寬廣的胸懷，要有容人、容言、容事之大氣量。笨鳥先飛，尚可領(lǐng)先。這要求我們保持頭腦清醒，工作上頂?shù)米毫?，生活上守得住清貧，政治上耐得住寂寞。我們?yīng)有道路自信、制度自信、理論自信，用堅(jiān)定的信念指導(dǎo)實(shí)踐，在工作崗位上勤勤肯肯，為民服務(wù)。那時(shí)候，總覺得時(shí)間還很長，足夠慢慢去揮霍，也想象不了一年后的今天。各位領(lǐng)導(dǎo)、各位同事：　　大家下午好。我們要嚴(yán)格要求自己，依法辦事，嚴(yán)格執(zhí)法，不以權(quán)代法，做學(xué)法、守法、用法的模范?！　∥?、要立足平凡，追求卓越，認(rèn)真履行工作職責(zé)，聚精會神干工作，一心一意謀發(fā)展，做到“三勤四多”，即手勤、腿勤、嘴勤，多思、多寫、多練、多問。成熟的麥穗都是低下頭的，放低身段才能贏得更多的尊重，從自身做起，從每一件小事做起，尊重每一個(gè)人，尊重每一分錢，直到群眾說我們是清水衙門那一天就是我們所有財(cái)政人的驕傲。　　二、準(zhǔn)確定位角色。”理想信念是共產(chǎn)黨人精神上的“鈣”，精神上“缺鈣”，看起來再美，也會得“軟骨病”?！　∏锔邭馑?，萬里無云，在這個(gè)收獲的季節(jié)里，我非常開心能夠與新近人員一起度過快樂而充實(shí)的四天培訓(xùn)生活，在此期間，我們接受了財(cái)政專業(yè)知識、廉潔自律、依法行政、禮儀知識等多方面的教育。牢記本委工作紀(jì)律，時(shí)時(shí)以黨員標(biāo)準(zhǔn)嚴(yán)格要求自己，處處以本委的工作規(guī)則規(guī)范自己，樹立良好的形象。不斷學(xué)習(xí)新知識，掌握新理論，增添新本領(lǐng)，進(jìn)一步提高自己的理論水平和工作能力。創(chuàng)新是事業(yè)發(fā)展的不竭動(dòng)力，我會善于發(fā)現(xiàn)新情況，推出新舉措，培植新亮點(diǎn)，為科室爭榮譽(yù)。作為科長，一定要成為科室的業(yè)務(wù)骨干，在具體工作中替領(lǐng)導(dǎo)分憂。我是一名擁有多年工作經(jīng)驗(yàn)的計(jì)生人，受黨組織培養(yǎng)和教育多年，培養(yǎng)了我“服從命令聽從指揮”、 “能吃苦、能戰(zhàn)斗、能奉獻(xiàn)”的良好品質(zhì)，2010年到云龍區(qū)人口計(jì)生局工作以來，我主要從事發(fā)展規(guī)劃與信息工作，對科室工作任務(wù)重點(diǎn)、流程比較了解，也積累了一定的工作經(jīng)驗(yàn)，能做到干一行、愛一行、鉆一行，執(zhí)行力較強(qiáng)?！　【邆淞己玫男睦硭刭|(zhì)。希望大家給予支持!　　一、我個(gè)人認(rèn)為我的主要優(yōu)勢有以下幾點(diǎn)：　　具有較強(qiáng)的適應(yīng)能力。　　各位領(lǐng)導(dǎo)、同志們，古人說：“不可以一時(shí)之得意，而自夸其能；亦不可以一時(shí)之失意，而自墜其志。三是我對兩非案件的查處經(jīng)驗(yàn)豐富，從聯(lián)合執(zhí)法現(xiàn)場查處到案件文書制作、卷宗整理歸檔，到國家兩非系統(tǒng)的案卷錄入、系統(tǒng)維護(hù)，整個(gè)流程我都非常熟悉，自從兩非納入全市科學(xué)發(fā)展考核目標(biāo)以來，我區(qū)的打擊兩非工作始終走在主城區(qū)最前列，并被列為加分項(xiàng)目。我真的很喜歡這些工作，雖然我不是學(xué)的這個(gè)專業(yè)，但興趣是最好的老師，我去鉆研、去請教、多學(xué)多看多寫，自加壓力，自我督促，從宣教工作的門外漢成為業(yè)務(wù)能手。下文為附加公文范文，如不需要，下載后可以編輯刪除，謝謝！ 衛(wèi)計(jì)委家庭發(fā)展科科長競聘演講稿尊敬的各位領(lǐng)導(dǎo)，各位同仁：　　 非常感謝委黨委給我這次機(jī)會，站到這里來競聘家庭發(fā)展科科長的職位，我想這是對我過去工作的的肯定，也是對我未來工作的期望，我會好好珍惜這次機(jī)會。 聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（PCR):是利用單核苷酸引物對特異性DNA片段進(jìn)行體外擴(kuò)增的一種方法。 基因敲入（gene knockin）：基因敲入是利用同源重組原理將外源基因插入到染色體的特定位點(diǎn)上。名字解釋補(bǔ)充： 原位雜交（in situ hybridization）：是用標(biāo)記的核苷酸探針，經(jīng)放射自顯影或非放射檢測體系，在組織、細(xì)胞、間期核及染色體上對核酸進(jìn)行定位和相對定量的一種技術(shù)。與BD融合的基因稱為釣餌基因，與AD融合的基因稱為目的基因。4) 染色體巡查法5) 蛋白質(zhì)DNA雜交法6) 蛋白質(zhì)蛋白質(zhì)結(jié)合法，即酵母雙雜交法原理：利用釀酒酵母的GAL4蛋白質(zhì)N端和C端分別融合的兩種蛋白質(zhì)相互作用可激活具有UAS（上游激活序列）報(bào)告基因表達(dá)篩選目的基因的方法。釀酒酵母MFα基因的篩選：基因組文庫DNA 轉(zhuǎn)化釀酒酵母細(xì)胞 在缺乏亮氨酸的培養(yǎng)基上培養(yǎng) 能生長的重組子即含合成亮氨酸的基因2） 核酸雜交法原理：利用核酸探針與待分離DNA的同源序列可進(jìn)行雜交的特點(diǎn)分離目的基因。1 cDNA文庫的特點(diǎn)：基因特異性；器官特異性；代謝或發(fā)育特異性；不均勻性；cDNA均可獲得表達(dá)1 建立cDNA文庫的一般程序1） 載體DNA片段的制備2） 多聚（A）RNA的分離制備3） 雙鏈cDNA的合成：反轉(zhuǎn)錄法合成單鏈cDNA，堿解或酶解除去RNA合成第二鏈4） dscDNA與載體DNA相連：人工接頭、同聚物加尾、cDNA的定向插入5） 重組cDNA分子的轉(zhuǎn)移和文庫的建立:質(zhì)粒載體則轉(zhuǎn)化大腸桿菌、噬粒則包裝感染1 第二鏈合成的方法：自身引導(dǎo)法、置換合成法、引導(dǎo)合成法。3) 供體和載體DNA的連接:要注意混合的比率和濃度4) 重組DNA分子的轉(zhuǎn)移和基因組文庫的擴(kuò)增5) 基因組文庫質(zhì)量的評價(jià)：文庫規(guī)模、重組頻率 利用λ載體構(gòu)建基因組文庫:1) 載體DNA片段的制備的方法：左右臂DNA片段的獲得2) 供體DNA片段的制備：限制酶部分酶切，機(jī)械剪切法3) 重組DNA分子的形成：控制混合的比率4) 重組DNA分子的包裝：制備包裝物，然后進(jìn)行包裝5) 基因組文庫的擴(kuò)增 為提高文庫的質(zhì)量，采取以下措施:1） 雙酶切載體產(chǎn)生不同末端以避免其自身形成串狀體2） 供體DNA脫磷酸化以避免供體DNA間的連接導(dǎo)致重排3） 載體和供體DNA末端修飾以避免上述兩種情形發(fā)生:載體補(bǔ)CT，供體補(bǔ)GA4） 采用文庫快速構(gòu)建法以避免擴(kuò)增文庫時(shí)DNA丟失 基因組文庫的載體可載入DNA大?。?） 質(zhì)粒 最大15kb 適合構(gòu)建cDNA文庫；亞克隆2） 噬菌體 最大25kb cDNA文庫3） COS質(zhì)粒 3045kb 基因組文庫4） 噬粒 最大12kb cDNA文庫5） P1 7090kb 基因組文庫6） BAC 100500kb 基因組文庫7） YAC 2501000kb 基因組文庫 鳥槍法克隆目的基因：隨機(jī)克隆供體細(xì)胞的全基因組DNA片段，然后通過快速有效的篩選程序從眾多克隆中分離出含有目的基因的重組子，進(jìn)而獲得目的基因。 Western雜交的一般步驟：蛋白質(zhì)制備→SDSPAGE→電轉(zhuǎn)移至膜上→一抗的制備→一抗與膜結(jié)合（1h）→洗膜（30min）→二抗與膜的結(jié)合→洗膜→顯色反應(yīng)→結(jié)果分析1PCR反應(yīng)體系：模板、引物、dNTP、buffer、taq酶、超純水。 Southern雜交的一般步驟：DNA的制備→DNA酶切→電泳（瓊脂糖凝膠電泳）→DNA原位轉(zhuǎn)膜→探針雜交→放射自顯影→結(jié)果分析1 Northern雜交檢測的是RNA。由于雙脫氧核苷酸在每個(gè)DNA分子中摻入的位置不同，故可根據(jù)不同長度的DNA片段測定出核苷酸序列1雙脫氧核苷酸終止法的過程：制備單鏈DNA，與引物退火，分為4個(gè)反應(yīng)體系，每個(gè)體系中加入dNTP和一種雙脫氧核苷酸，DNA聚合酶定序反應(yīng)，反應(yīng)產(chǎn)物變性后電泳，凝膠干燥，放射自顯影，根據(jù)條帶讀出堿基序列，再根據(jù)堿基互補(bǔ)配對原則寫出DNA鏈的序列。 核酸凝膠電泳常使用溴酚藍(lán)作為指示劑、溴化乙錠作為染色劑脈沖場凝膠電泳原理：加在凝膠上至少有兩個(gè)電場方向，使得DNA分子要不斷地調(diào)整泳動(dòng)方向，不同分子量大小的DNA分子用于改變泳動(dòng)方向的時(shí)間不同，則可以得到分離雙脫氧核苷酸終止法的原理：雙脫氧（239。 RNA分離純化的關(guān)鍵：防止內(nèi)外源RNase的作用 RNase的特點(diǎn)：抗酸抗堿；抗高溫嚴(yán)寒；抗變性劑，酶活性不需要輔助因子，存在范圍廣。 COS質(zhì)粒載體的優(yōu)點(diǎn)：容量大，用于基因簇的克??；形成的重組DNA分子可進(jìn)行體外包裝，并能感染大腸桿菌細(xì)胞；操作簡單，易于轉(zhuǎn)化細(xì)胞；對重組DNA分子長度具有選擇性包裝。 熱誘導(dǎo)表達(dá)：λcl ts857 ，可作為組件插入質(zhì)粒 DNA 內(nèi)。 質(zhì)粒的特點(diǎn)：1） 質(zhì)粒DNA的復(fù)制與染色體復(fù)制無關(guān)2） 質(zhì)粒DNA以超螺旋形式存在3） 質(zhì)粒DNA可以結(jié)合轉(zhuǎn)移4） 質(zhì)粒的不相容性和不相容群5） 質(zhì)粒DNA的消除6） 質(zhì)粒的整合 大腸桿菌質(zhì)粒的復(fù)制：以RNAⅡ?yàn)橐锖铣?，RNAⅠ與RNAⅡ結(jié)合可減少質(zhì)粒的拷貝數(shù)，使RNAⅠ復(fù)制起點(diǎn)上游一個(gè)核苷酸處G突變?yōu)門，使得拷貝數(shù)增多。對于營養(yǎng)標(biāo)記基因，可降低該基因的表達(dá)效率。 4）探針型載體：該類載體主要 特點(diǎn)是含有一些特殊的DNA序列，用于特定的研究目的，如分離基因啟動(dòng)子、終止子、DNA復(fù)制起點(diǎn)等。 分子克隆載體 分子克隆載體：是一類可供外源DNA片段插入并攜帶重組分子進(jìn)入宿主細(xì)胞進(jìn)行擴(kuò)增或表達(dá)的DNA分子。合成cDNA第二鏈。(2)、Klenow大片段：沒有5’→3’外切酶活性，而保留了5’→3’DNA聚合酶活性和3’→5’外切酶活性。1DNA聚合酶：(1)、DNA聚合酶I：5’—3’外切酶活性、3’—5’外切酶活性，5’—3’聚合酶活性，用途：除去3’端突起。星號活性：改變反應(yīng)條件，導(dǎo)致限制酶的專一性和酶活力的改變。 三大技術(shù)基礎(chǔ)：限制性內(nèi)切酶的發(fā)現(xiàn)；DNA連接酶的發(fā)現(xiàn)；載體的發(fā)現(xiàn) 基因工程的技術(shù)路線：切：DNA片段的獲得；接：DNA片段與載體的連接；轉(zhuǎn)：外源DNA片段進(jìn)出受體細(xì)胞；選：選擇基因；表達(dá)：目的基因的表達(dá)；基因工程的工具酶 限制性內(nèi)切酶（restriction enzymes）：主要是從原核生物中分離純化出來的，是一類能識別雙鏈DNA分子中某種特定核苷酸序列，并由此切割DNA雙鏈的核酸內(nèi)切酶。 基因工程（gene engineering）：體外將目的基因插入病毒、質(zhì)粒、或其他載體分子中，構(gòu)成遺傳物質(zhì)的新組合，并使之摻入到原先沒有這些基因的宿主細(xì)胞內(nèi)，且能穩(wěn)定的遺傳。作動(dòng)詞：基因的分離和重組的過程。以密碼方式每三個(gè)核苷酸組成一個(gè)密碼子代表一個(gè)氨基酸。限制性內(nèi)切酶的活性：在適當(dāng)反應(yīng)條件下，1小時(shí)內(nèi)完全酶解1ug特定的DNA底物，所需要的限制性內(nèi)切酶的量為1個(gè)酶活力單位。RNAH降解與DNA雜交的RNA，用于cDNA文庫建立時(shí)除去RNA以進(jìn)行第二鏈的合成。切口移位探針的制備。DNA序列測定。(2)T4多聚核苷酸磷酸激酶：催化ATP中的γ位的磷酸基轉(zhuǎn)移5’OH上 (3)末端脫氧核苷酸轉(zhuǎn)移酶：在3’端高效添加脫氧核苷酸。如PBR322和pUC載體2）表達(dá)型載體：3類：Ⅰ型：轉(zhuǎn)錄起始區(qū)（調(diào)控序列+啟動(dòng)子）+終止子；Ⅱ型：轉(zhuǎn)錄起始區(qū)+翻譯起始區(qū)（核糖體結(jié)合序列和起始密碼 子）+終止子；Ⅲ型: 轉(zhuǎn)錄起始區(qū)+ 翻譯起始區(qū)+ 信號肽鏈編碼區(qū)+ 終止子（常稱之為表達(dá)分泌型載體） 3）失控型質(zhì)粒載體(Runaway plasmid vector)：是一些低拷貝質(zhì)粒，其復(fù)制控制是溫度敏感型或藥物敏感型，在不同溫度或不同藥物濃度下，質(zhì)粒拷貝數(shù)會顯著變化。如：對于藥物抗性標(biāo)記基因，可提高藥物的濃度。 3）COS質(zhì)粒載體—質(zhì)粒載體中插入λcos片段，以利于體外包裝 4）噬粒載體（phagemid）—有質(zhì)粒和M1fd的復(fù)制起點(diǎn)，以質(zhì)?；蚴删w方式復(fù)制。 λ噬菌體的結(jié)構(gòu)特點(diǎn)：線性雙鏈DNA病毒，具有末端互補(bǔ)的12個(gè)核苷酸，感染細(xì)菌后粘端互補(bǔ)成雙鏈環(huán)狀。 λ噬菌體載體的改造：切去非必須片段，加載目的基因 去掉太多的酶切位點(diǎn) 增加標(biāo)記基因 COS質(zhì)粒載體的特點(diǎn)：在普通質(zhì)粒載體中插入一個(gè)或兩個(gè)來自λ的cos位點(diǎn)片段，雙cos載體比單cos載體易于重組。當(dāng)變性條件恢復(fù)時(shí)，質(zhì)粒DNA迅速復(fù)性恢復(fù)天然構(gòu)型，染色體DNA難以復(fù)性，交聯(lián)形成不溶性網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)，與變性的蛋白質(zhì)和RNA纏繞在一起，通過離心沉淀下來，而質(zhì)粒DNA存在于上清液中。 核酸凝膠電泳的基本原理：核酸分子中的磷酸基團(tuán)帶負(fù)電荷，在電場中將向正極移動(dòng)，通過凝膠的分子篩作用可以將不同大小和構(gòu)型的核酸分子分離，分子量小的DNA，具有較緊密的構(gòu)型，在凝膠中移動(dòng)快；反之，分子量大的DNA移動(dòng)慢。脫氧核苷酸那樣直接摻入新合成的DNA鏈中，但因3’端不