α--淀粉酶-全文預覽
【正文】 , 1994, 12:21 24.[29] Tierny L, Danko S, Dauberman J,et al. Performance advantages of novel α amylases in automatic dishwashing [C]. Am Oil Chem Soc 86th San Antonio Annual meeting, 1995[30] 鄧淑麗，韓曙光，陳暉等 . 應用α唾液淀粉酶結(jié)合能力鑒定血鏈球菌[J] . 浙江預防醫(yī)學，2004，16(2)：14一l5.[31] 陳遠釗，羅俊成，胡佳等 . 酸性α淀粉酶菌株的誘變及酶的性質(zhì)研究[J]. 中國釀造，2007(1)：10—13。但是由于技術水平的限制，我國的α淀粉酶的活性相比較國外較低，因此必須加強該菌種選育的水平，獲得產(chǎn)酶活性更高的菌株。而對于酶的工業(yè)化應用，其首要的任務就是找到高產(chǎn)菌株。黑曲霉α一淀粉酶因具有耐酸性，適用于制造助消化的藥物，開發(fā)適合于胃酸性環(huán)境(pH2．0左右)的耐酸性α一淀粉酶，用于制備消化助劑，將會使醫(yī)療效果更為有效[13][31]。分析血鏈球菌群中的細菌與α唾液淀粉酶的結(jié)合能力，可有效鑒定不同血鏈球菌群中各菌株。他們用亮氨酸替代地衣芽孢桿菌α－淀粉酶蛋白第197 位上的蛋氨酸，導致酶對氧化劑成分的抵抗能力大大增強，提高了其氧化穩(wěn)定性，使酶在儲存過程中的穩(wěn)定性更好。α－淀粉酶從1975年就被應用于洗衣粉，現(xiàn)在90%的液體除垢劑都含有α－淀粉酶，而且自動洗碗機的除垢劑對α－淀粉酶的需求也在不斷增長。相比而言，酶的催化速率高，應用少量即可達到效果；同時其為生物活性物質(zhì)，不會產(chǎn)生污染。不同的紙張施膠，對淀粉分子量、粘度有不同的要求。如用堿分解淀粉退漿需要10 h12 h, 而用α 淀粉酶只要20 min30 min 即可完成退漿過程。淀粉脫漿可以利用α－淀粉酶，它能有選擇性的去除淀粉漿而不傷害紗線纖維，還能隨機的使淀粉降解為易溶于水的糊精，因而容易被洗掉。工業(yè)生產(chǎn)中往往與β淀粉酶和普魯蘭酶等脫枝酶配合使用，用以生產(chǎn)超高麥芽糖漿，其麥芽糖含量超過70%，甚至更高[24]。由于他們的高甜度，被用于飲料工業(yè)中軟飲料的甜味劑。在此過程中產(chǎn)生的還原糖在面包烘焙過程中可參與美拉德反應，有助于改善面包的外表色澤。這種方法由于特異性好、準確、檢測下限低的特點，成為IFCC批準的α淀粉酶活性測定推薦方法。四、 以對硝基苯麥芽庚糖苷（BPNPG7）作為底物測定α淀粉酶活性對硝基苯麥芽庚糖苷（BPNPG7），它在麥芽庚糖苷的還原性尾部有一個硝基苯基團，在低聚物的非還原性末端含有一個4,6二氧基團。隨著反應時間的延長，反應混合物與碘液的顯色強度降低，以測定酶活。采用具有雙反應基團的國產(chǎn)活性染料，即M一8B與馬鈴薯淀粉經(jīng)共價結(jié)合制成的紅色染色淀粉片，成功取代國外淀粉片劑檢測工業(yè)用α－淀粉酶活力 [16]。下面給出了幾種α淀粉酶活性測定的方法。之后其采用高效液相離子交換色譜純化α一淀粉酶很好地分離了α一淀粉酶粗品, 其活性回收率高達96%,比活性達388μ/mg蛋白質(zhì)。為了獲得高純度的α一淀粉酶,開始人們利用軟基質(zhì)的離子交換色譜和親和色譜分離純化了α淀粉酶的粗酶提取液。應用雙水相系統(tǒng)PEG／磷酸鹽分離純化α－淀粉酶，增加PEG濃度有助于酶富集上相。最佳反應條件為: 萃取溫度40 ℃, 水相組成為NaCl mol/L, pH , 有機相：無機相= 1：2, 振蕩時間10min。通過超濾、濃縮、脫鹽和聚丙烯酰胺垂直板凝膠電泳，對利用基因工程菌生產(chǎn)的重組超耐熱耐酸性α一淀粉酶進行純化，得到電泳純級的超耐熱耐酸α一淀粉酶，純化倍數(shù)為11．7，%[10]。3. α淀粉酶分離純化及活性測定方法 α淀粉酶的分離和純化高純度α－淀粉酶是一種重要的水解淀粉類酶制劑，可用于研究酶反應機理和測定生化反應平衡常數(shù)等。四個二硫鍵在電子密度分布圖中被標出，它們分別連接著殘基3038,150164, 240283和439474。區(qū)域B是由8條反向平行的β片層組成。α淀粉酶是由478個氨基酸殘基組成，它們折疊在三級結(jié)構(gòu)的兩大區(qū)域。 .87,15551558)。Date,W。催化殘基和底物之間的氫鍵是Asp206O1(1),O6(1), Glu230O1(1), and Asp297O2,O3(1)[8]。 FUJIMOTO et al.。在單斜晶態(tài)分析中，在酶的活性部位發(fā)現(xiàn)了與麥芽糖的結(jié)合鍵。 酶催化機制的研究史α淀粉酶的結(jié)構(gòu)首先由MATSUURA (MATSUURA et al., 1979。2 酶的催化機制、空間結(jié)構(gòu)及研究史 酶的催化機制α淀粉酶在結(jié)構(gòu)上的相似性使人們相信他們具有相似的催化機制。隨著真菌α淀粉酶需求量的日益增加及其相對較昂貴的價格，使得近年來越來越多的國內(nèi)研究者開始關注真菌α淀粉酶研究與開發(fā)工作。下面僅以真菌α淀粉酶的生產(chǎn)應用現(xiàn)狀為例說明。將枯草芽抱桿菌重組體的基因引入生產(chǎn)菌株陰, 使α－淀粉酶產(chǎn)量提高7 －10倍, 并已應用于食品和制酒工業(yè), 給選育高產(chǎn)α－淀粉酶菌株開創(chuàng)了新的途徑[4]。將淀粉用α淀粉酶液化、糖化酶糖化進而提取葡萄糖的工藝奠定了果糖漿和淀粉糖漿生產(chǎn)的基礎,因而改變了糖品種的結(jié)構(gòu), 開辟了淀粉加工的新途徑。從此淀粉酶的生產(chǎn)又進入了一個新階段[2]。第二次世界大戰(zhàn)后, 隨著抗生素工業(yè)的發(fā)展,微生物的培養(yǎng)技術、發(fā)酵工藝和發(fā)酵罐的革新, 酶制劑工業(yè)有了飛躍的發(fā)展, 進人了工業(yè)化大生產(chǎn)的階段。 α淀粉酶的應用史及現(xiàn)狀早在1833年payen從麥芽抽提液中用酒精沉淀出白色沉淀,可以使200倍的淀粉液化, 取名為“diastase”，并出售用于棉布的退漿。1886年，Lintner發(fā)現(xiàn)了兩種淀粉酶淀粉液化酶和淀粉糖化酶。至此,Kirchhoff奠定了發(fā)現(xiàn)谷物中一種能夠?qū)⒌矸坜D(zhuǎn)化為糖的蛋白質(zhì)的基礎。在操作的過程中，他注明了實驗過程中僅添加了非常少的麩質(zhì)，并且得到的糖漿與淀粉的量成正比。列式溫度下水浴。Kirchhoff（1815年）做了一個巧妙的實驗。1 α淀粉酶的發(fā)現(xiàn)和應用史 α淀粉酶的發(fā)現(xiàn)啤酒是最古老的酒精飲料，發(fā)酵是其關鍵步驟，其中所包含的糖化過程就是把淀粉轉(zhuǎn)化為糖。 development
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