【正文】 棄去在接種后24小時(shí)內(nèi)死亡的雞胚，但雞胚至少成活8/10，試驗(yàn)方可成立。 非禽源細(xì)胞（或細(xì)胞系）、種毒及其制品種毒或活疫苗 除另有規(guī)定者外，液體樣品取2～3瓶混合，凍干樣品取2～3瓶加入稀釋液溶解后混合，用相應(yīng)單特異抗血清在25℃中和1小時(shí)以完全中和樣品中的活性成分作為檢品，除另有規(guī)定者外，病毒中和劑量為1羽份。 嚴(yán)格無菌操作，防止交叉污染。1 技術(shù)依據(jù)及原理由于使用的生物活性原材料、生產(chǎn)過程等均可引起種毒、獸用病毒性活疫苗等污染外源病毒。7 結(jié)果判定 任何一次瓊脂平板上出現(xiàn)支原體菌落，判疫苗或血清不合格。 檢驗(yàn)人員必須穿戴工作服和口罩。 每次移植培養(yǎng)陽(yáng)性對(duì)照，在同條件下培養(yǎng)觀察。瓊脂固體平板培養(yǎng) 在每次液體培養(yǎng)物移植小管培養(yǎng)的同時(shí)，～，放在含5～10％二氧化碳的潮濕環(huán)境下36～38℃培養(yǎng)。如在5日尚未見變化，繼續(xù)培養(yǎng)觀察5日，如此重復(fù)3次。檢測(cè)其他種類的活疫苗用支原體培養(yǎng)基。 保持實(shí)驗(yàn)室的清潔衛(wèi)生，嚴(yán)格遵守常規(guī)的消毒制度。2 注意事項(xiàng) 在檢測(cè)中必須遵守規(guī)定的程序，每次都必須設(shè)陽(yáng)性和陰性對(duì)照。6 記錄和計(jì)算培養(yǎng)72小時(shí)后，分別計(jì)算每個(gè)平板的雜菌數(shù)，并把兩付平板的雜菌數(shù)相加后求平均數(shù)，作為該瓶的雜菌數(shù)。5 安全措施 檢驗(yàn)過程中注意防止對(duì)檢驗(yàn)人員和環(huán)境的污染。3 材料、儀器、試劑的準(zhǔn)備及基本要求 儀器36～38℃普通溫箱，試管架，10ml、5ml、1ml吸管，記號(hào)筆，記錄紙，顯微鏡。6 記錄和計(jì)算檢品在接種相關(guān)培養(yǎng)基后，每天觀察溫箱內(nèi)的培養(yǎng)情況并記錄觀察結(jié)1 技術(shù)依據(jù)及原理某些疫（菌）苗允許有一定數(shù)量的非病原性雜菌，但這類制品如污染雜菌，必須作雜菌計(jì)數(shù)。5 安全措施 檢驗(yàn)過程中注意防止對(duì)檢驗(yàn)人員和環(huán)境的污染。 如培養(yǎng)后混濁不易判定時(shí)，可移植l次，再判定。 細(xì)菌性活疫苗（凍干制品恢復(fù)原量）及不含防腐劑、抗生素的其它制品或稀釋液，、 ，1支置37℃；1支置25℃，℃，均培養(yǎng)5日。病毒液滅活后和細(xì)菌毒素脫毒后接種對(duì)本毒敏感的細(xì)胞、禽胚或?qū)嶒?yàn)動(dòng)物，應(yīng)正常。 病原性鑒定 。 霉菌及腐生菌檢驗(yàn) 用葡萄糖蛋白胨湯（）。4 檢驗(yàn)步驟 抽樣 應(yīng)隨機(jī)取樣并注意代表性。3 材料、儀器、試劑的準(zhǔn)備及基本要求 儀器24～26℃、36～38℃溫箱，檢驗(yàn)器具，試管架，10ml、5ml、1ml吸管，記號(hào)筆，記錄紙。 為防止交叉污染，一個(gè)樣品用一個(gè)吸管或一個(gè)注射器。1 技術(shù)依據(jù)及原理:生物制品（除另有規(guī)定者外）都不應(yīng)有外源微生物污染。5 安全措施 使用真空檢測(cè)器時(shí)，人體不要接近儀器的頭部電簧，以免高頻電流的電擊，（但沒有生命危險(xiǎn)）。4 檢驗(yàn)步驟 取待檢樣品，一字排列于暗室的操作臺(tái)上，使瓶與瓶之間有一定距離。 被檢樣品從冷庫(kù)中取出應(yīng)擦干瓶壁上的水份，樣品達(dá)到室溫后再進(jìn)行測(cè)定。1 技術(shù)依據(jù)及原理依據(jù)《獸用生物制品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)》附錄中的真空度測(cè)定法，即使用高頻火花真空測(cè)定器測(cè)定。 水份測(cè)定： 將樣品置天平稱重 連續(xù)按F3鍵，顯示屏出現(xiàn)please add sample ～。 滴定儀屏幕顯示待機(jī)模式Drift值在25以下指示箭頭穩(wěn)定→(平指)時(shí)，開始滴定標(biāo)定滴度： 按F2鍵至顯示屏出現(xiàn)H2O ISO 3696 連續(xù)按F3鍵至顯示屏出現(xiàn)please add sample gapprox 天平去皮，通過進(jìn)樣孔注入已稱重的純水，(用10181。 樣品 每批疫苗4個(gè)樣品。雞新城疫滅活疫苗生產(chǎn)工藝流程圖、主要過程控制點(diǎn)和控制項(xiàng)目注：*為關(guān)鍵控制點(diǎn) 為控制項(xiàng)目抽 樣*檢 驗(yàn)*裝箱入庫(kù)*貼 簽*分 裝清 洗 膠 塞*脈動(dòng)蒸汽滅菌分裝前、中、后無檢*乳化加 塞壓 蓋安全檢驗(yàn)無菌檢驗(yàn)效力檢驗(yàn)鋁蓋分裝瓶*滅菌清洗*滅菌物理性狀清洗*油相制備*水相制備甲醛含量測(cè)定硫柳汞含量測(cè)定15℃冷凍保存收 獲 *非免疫種蛋種蛋選擇種蛋消毒前孵化接種途徑接種劑量無菌檢驗(yàn)毒價(jià)測(cè)定*后孵化及照蛋*接 種*冷 蛋照蛋時(shí)間培養(yǎng)溫濕度冷蛋時(shí)間冷蛋溫度無相應(yīng)抗體*滅活 滅活檢驗(yàn) 附錄1 技術(shù)依據(jù)及原理卡氏法是利用卡氏試劑中的碘和二氧化硫在砒啶和甲醇溶液中能與水起定量反應(yīng)的原理，從而測(cè)定水份。 無菌檢驗(yàn) 按《無菌檢驗(yàn)或純粹檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程》進(jìn)行，應(yīng)無菌生長(zhǎng)。雙相苗為水包油包水型，滴于冷水中，應(yīng)呈云霧狀擴(kuò)散。8 分裝 定量分裝，加蓋密封。 取油相2份放入乳化罐內(nèi)，開動(dòng)電機(jī)慢速轉(zhuǎn)動(dòng)攪拌，同時(shí)徐徐加入胚液1份，加完后再以10000r/min攪拌。 水相制備 取吐溫80 4份裝入帶玻璃珠的瓶中滅菌，冷卻后加滅活胚液96份，充分振瑤使吐溫80完全溶解為止。如有可疑，應(yīng)將可疑胚液進(jìn)行重檢，重檢不合格者報(bào)廢。在2～8℃保存，應(yīng)不超過1個(gè)月。其余胚液和雞胚浸出液分別計(jì)量加入10%甲醛溶液，隨加隨搖，使其能充分混合，%。收獲的胚液滅活前在2～8℃左右保存，應(yīng)不超過5日。 收獲 雞胚液的收獲 將冷卻的雞胚取出，用碘酊消毒氣室部位，然后以無菌手術(shù)破除氣室部卵殼，揭去卵殼膜，剪破絨毛尿囊膜及羊膜（謹(jǐn)防卵黃破裂），吸取胚液。2 制苗材料選擇 選擇發(fā)育良好9～10日齡的易感雞胚作為制苗材料。注明收獲日期、毒種代次等。 真空度測(cè)定 按《真空度測(cè)定方法》進(jìn)行，應(yīng)符合規(guī)定。 用雞檢驗(yàn) 雞的選擇 選取3060日齡健康易感雞（血凝集抑制價(jià)應(yīng)≤4）10只。 疫苗稀釋 將疫苗按瓶簽注明羽份，用滅菌生理鹽水稀釋至1羽份/，再作10倍系列稀釋至107。 用雞檢驗(yàn) 用2~7日齡SPF雛雞20只，合成兩組，第1組10只，（10個(gè)使用劑量）；第2組10只，不接種作為對(duì)照，兩組在相同條件下分別飼養(yǎng)管理，觀察10日，應(yīng)無不良反應(yīng)。 外源病毒檢驗(yàn) 按《外源病毒檢驗(yàn)法》進(jìn)行。 支原體檢驗(yàn) 按《支原體檢驗(yàn)法》進(jìn)行，應(yīng)無支原體生長(zhǎng)。瓶上的鋁蓋穩(wěn)固不松動(dòng)。 病毒含量測(cè)定 按含毒雞胚液量用滅菌生理鹽水作為10倍系列稀釋，取1010109 3個(gè)稀釋度各尿囊腔內(nèi)接種10日SPF雞胚5個(gè)，置36~37℃繼續(xù)孵育，48小時(shí)以前死亡的雞胚棄去不計(jì)，在48~120小時(shí)死亡的雞胚隨時(shí)取出，收獲雞胚液，同一稀釋度的胚液等量混合，按稀釋度分別測(cè)定紅細(xì)胞凝集價(jià)，至120小時(shí)，取出所有活胚,逐個(gè)收獲雞胚液，分別測(cè)定紅細(xì)胞凝集價(jià)，凝集價(jià)≥1:160 (微量法1:128)者判為感染，計(jì)算EID50， ml病毒含量107EID50者可用于配制疫苗。 收獲 將冷卻4~24小時(shí)的雞胚取出,用碘酊消毒氣室部位,然后以無菌手術(shù)剝除氣室部卵殼，剪開尿囊膜，吸雞胚液,每若干個(gè)雞胚的胚液混合為一組。2 制苗材料選擇 選擇發(fā)育良好的9~11日齡SPF雞胚作為制苗材料。 毒種鑒定 病毒含量 按含毒雞胚液量用滅菌生理鹽水作為10倍系列稀釋，取1010109 3個(gè)稀釋度各尿囊腔內(nèi)接種10日SPF雞胚5個(gè)，置36~37℃繼續(xù)孵育，48小時(shí)以前死亡的雞胚棄去不計(jì)，在48~120小時(shí)死亡的雞胚隨時(shí)取出，收獲雞胚液，同一稀釋度的胚液等量混合，按稀釋度分別測(cè)定紅細(xì)胞凝集價(jià)，至120小時(shí)，取出所有活胚,逐個(gè)收獲雞胚液，分別測(cè)定紅細(xì)胞凝集價(jià)，凝集價(jià)≥1:160 (微量法1:128)者判為感染，計(jì)算EID50，≥108EID50。新城疫凍干疫苗生產(chǎn)工藝流程1 生產(chǎn)用毒種制備 毒種繁殖 將毒種用滅菌生理鹽水作適當(dāng)稀釋(如104或105),尿囊腔內(nèi)接種10日齡SPF雞胚,。注明收獲日期,毒種代數(shù)等。 毒種繼代 應(yīng)不超過3代。60小時(shí)后,每4~8小時(shí)照蛋一次,死亡的雞胚隨時(shí)取出,直至96或120小時(shí),不論死亡與否,全部取出,氣室向上直立,置于2~8℃冷卻。4 半成品檢驗(yàn) 無菌檢驗(yàn) 經(jīng)處理過的胚液,每組分別取樣,按《無菌檢驗(yàn)或純粹檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程》進(jìn)行無菌檢驗(yàn),應(yīng)無細(xì)菌生長(zhǎng)。6 成品檢驗(yàn) 物理性狀 外觀檢查 疫苗瓶上的標(biāo)簽，打印出的羽份或頭份、生產(chǎn)批號(hào)、有效日期清晰可見、位置適當(dāng)。 無菌檢驗(yàn) 按《無菌檢驗(yàn)或純粹檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程》進(jìn)行，如有菌生長(zhǎng)，應(yīng)進(jìn)行雜菌計(jì)數(shù)，并作病原性鑒定（按《雜菌計(jì)數(shù)和病原性鑒定操作細(xì)則》進(jìn)行）和禽沙門氏菌檢驗(yàn)每羽份非病原菌數(shù)應(yīng)不超過1個(gè)（按《禽沙門氏菌檢驗(yàn)法》進(jìn)行）。 將接種后雞胚用石蠟封孔后，置37℃繼續(xù)孵育，觀察120小時(shí)，在24~120小時(shí)內(nèi)應(yīng)不引起特異死亡，且至少存活8只，雞胚液作紅細(xì)胞凝集試驗(yàn)，應(yīng)為陰性。如死亡率超過20%，可用20個(gè)雞胚重檢1次，重檢結(jié)果死亡率仍超過20%，該批疫苗判為不合格。 用雞胚檢驗(yàn) 雞胚選擇 選擇發(fā)育良好的10日齡SPF雞胚15個(gè)，劃出尿囊腔接種部位，作出批組及滴度標(biāo)記，每一滴度接種5個(gè)。 凝集價(jià)（HA）測(cè)定與計(jì)算雞胚半數(shù)感染量（EID50） 將冷卻雞胚取出，將同一稀釋度的死亡雞胚液等量混合，分別測(cè)定紅細(xì)胞凝集價(jià)；將活胚逐個(gè)收獲雞胚液，分別測(cè)定紅細(xì)胞凝集價(jià)，HA≥160（微量法128）者判為感染，計(jì)算半數(shù)感染量，每羽份≥（國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)每羽份≥），判為合格。 剩余水分測(cè)定 按《剩余水分測(cè)定方法》進(jìn)行，應(yīng)符合規(guī)定。將檢驗(yàn)無菌，且對(duì)1%雞紅細(xì)胞凝集價(jià)在1：640（微量法1：512）以上的雞胚液混合，定量分裝于安瓿瓶中，冷凍保存。 毒種繼代 應(yīng)不超過3代。此后，每4～6小時(shí)照蛋1次，死亡的雞胚隨時(shí)取出，直至96小時(shí)，不論死亡與否，全部取出，氣室向上直立，置于2～8℃冷卻4～24小時(shí)。同