【正文】 一個(gè)酶活單位。要求自氧化速率控制在每分鐘的光吸收值為 （可增減鄰苯三酚的加入量，以控制光吸收值） [42~43] 。在鄰苯三酚的氧化初期，中間物的積累濃度在反應(yīng)開始 30~45s 后與時(shí)間呈線形關(guān)系，一般維持 4min 左右。 CAT 活力計(jì)算定義：以 1min 內(nèi) 酶液 A240降低 （3 支測(cè)定管的平均值）為一個(gè)酶活性單位（U） 。根據(jù)測(cè)量吸光速率的變化即可測(cè)出過氧化氫酶的活性。試管編號(hào) 1 2 3 4 5 7BSA 原液（ml ） 蒸餾水 （ml ） 0BSA 濃度（μg/ml）0 20 40 60 80 100表 21 牛血清蛋白標(biāo)準(zhǔn)曲線測(cè)定 樣液蛋白質(zhì)含量的測(cè)定 取四只干燥潔凈的試管，按表 22 加樣并充分混合，放置 2min 后在595nm 下比色，記錄吸光度值（若吸光度值超出標(biāo)準(zhǔn)曲線的最高值應(yīng)適當(dāng)稀釋），然后利用標(biāo)準(zhǔn)曲線或回歸方程求出樣品蛋白質(zhì)含量。該反應(yīng)非常靈敏，可測(cè)微克級(jí)蛋白質(zhì)含量，所以是一種比較好的蛋白質(zhì)定量法?？捡R斯亮藍(lán) G250 再游離狀態(tài)下呈紅色，當(dāng)它與蛋白質(zhì)疏水區(qū)結(jié)合后變?yōu)榍嗌?，前者最大光吸收?465nm，后者在 595nm。 蛋白標(biāo)準(zhǔn)曲線制作及樣液測(cè)定 實(shí)驗(yàn)原理在研究每一種酶的作用時(shí)，常用蛋白標(biāo)定結(jié)果。(4)渦蟲的對(duì)照培養(yǎng)：、1mg/l、2mg/l、3mg/l ，另一組為空白對(duì)照：加煮沸并充氧除去氯氣的水。所以取 SDS 濃度為： 、1mg/l、2mg/l、3mg/l 對(duì)渦蟲進(jìn)行再生培養(yǎng)。 渦蟲再生脅迫培養(yǎng)再生培養(yǎng)前，對(duì)渦蟲饑餓處理一周。一般每天換水 1次，在培養(yǎng)器皿中放入洗凈的瓦片，每周喂食 1次，取當(dāng)天煮熟蛋黃少許，放入小燒杯中加水吹打成漿狀，每次喂一吸管。當(dāng)刷過幾條渦蟲后，毛筆的筆尖被渦蟲分泌的粘液粘在一起，這時(shí)要將筆尖放入水中，用手指搓洗干凈后再繼續(xù)使用。(7) 的磷酸緩沖液： 磷酸二氫鉀+ 氫氧化鈉，加雙蒸水稀釋，定容至 100ml。 (4)標(biāo)準(zhǔn)蛋白質(zhì)溶液：牛血清血蛋白溶液（BSA）：準(zhǔn)確稱取牛血清蛋白10mg，溶于蒸餾水并定容到 100ml，配制成 100μg/ml 原液。 主要試劑及藥品藥品名稱 規(guī)格 生產(chǎn)廠家十二烷基硫酸鈉 GR Japan鹽酸 AR 煙臺(tái)市雙雙化工有限公司磷酸二氫鉀 AR 上海金山化工試劑有限公司無水乙醇 AR 萊陽市經(jīng)濟(jì)技術(shù)開發(fā)區(qū)精細(xì)化工廠氫氧化鈉 AR 萊陽市經(jīng)濟(jì)技術(shù)開發(fā)區(qū)精細(xì)化工考馬斯亮藍(lán) G250 AR 美國 SanlandEDTA Na2 BC 北京索萊寶磷酸 AR 萊陽市雙雙化工有限公司三 羥 甲 基 氨 基 甲 烷 （ Tris） AR 北京拜爾迪生物公司焦性沒食子酸 AR 國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司過氧化氫（30%） AR 萊陽市康德化工有限公司磷酸二氫鈉 AR 天津市大茂化學(xué)試劑廠牛血清蛋白 AR 上海匯申化工有限公司氫氧化鈉 AR 萊陽市經(jīng)濟(jì)技術(shù)開發(fā)區(qū)精細(xì)化工廠 主要實(shí)驗(yàn)儀器及設(shè)備儀器名稱 規(guī)格/型號(hào) 生產(chǎn)廠家紫外分光光度計(jì) UV3310 HITACHI 公司高速冷凍離心機(jī) Avanti J25 美國 BECKMAN 公司PH 計(jì) PH213 上海一恒科學(xué)儀器有限公司電熱恒溫水浴鍋 HWS24 上海一恒科學(xué)儀器有限公司臺(tái)式高速冷凍離心機(jī) D37520 德國 Kendro 公司分析天平 AR2140 美國 Ohaus 公司電子天平 BS110 北京賽多利斯電子天平有限公司 試劑的配制(1)100mmol/l 過氧化氫溶液：取 30％過氧化氫 用磷酸緩沖液定溶到25ml，可置于冰箱中保存 1 天，最好現(xiàn)配先用。（5）SOD,CAT 酶活性的測(cè)定。 課題涉及的主要內(nèi)容（1）對(duì)渦蟲進(jìn)行 SDS 脅迫處理，再生培養(yǎng)，獲得實(shí)驗(yàn)材料。 雖 在 動(dòng) 物 體 內(nèi) 含 量 很 少 ， 但 也 發(fā) 揮 著 重 要 作 用 。(3)免疫測(cè)定法以及電泳測(cè)定法等。它是清除過氧化氫的重要酶，因此，日益受到注意和重視。多酶促反應(yīng)和非酶促反應(yīng)都能產(chǎn)生H2O2，H 2O2是有毒害作用的活性氧的前體。CAT 廣泛存在于動(dòng)物、植物和微生物中，動(dòng)物肝臟、紅細(xì)胞、植物葉綠體以及細(xì)菌、真菌、放線菌等中含有大量 CAT。常見的間接測(cè)定方法有黃嘌呤氧化酶細(xì)胞色素 C 法、鄰苯三酚自氧化法、微量鄰苯三酚自氧化法、黃嘌呤氧化酶NBT 法、NBT 光還原法等。直接測(cè)定法的原理是直接測(cè)定 SOD 催化反應(yīng)的底物反應(yīng)速度或產(chǎn)物生成速度。目前，世界各地學(xué)者對(duì) SOD 的研究方興未艾，深入研究 SOD 不僅有著重大的理論意義，也有著重大的實(shí)際應(yīng)用價(jià)值 [29~30]。在生物試驗(yàn)中應(yīng)用主要為，常用于 DNA 提取過程中，使蛋白質(zhì)變性后與 DNA 分開。性能：白色或淡黃色粉狀，溶于水，對(duì)堿和硬水不敏感?，F(xiàn)已證實(shí)，成體渦蟲體內(nèi)存在一類具有增殖分化潛能的干細(xì)胞，稱為“Neoblast” ，也即成體未分化細(xì)胞 [19~20]。 幼渦蟲( 將生殖后的尾部片段,無眼點(diǎn),咽長度僅為頭部片段的 1/ 2 —1/ 3 ,生殖后不食不動(dòng),與頭部片段有著明顯區(qū)別的尾部稱幼渦蟲) 則要經(jīng)過50～70d 的生長才開始生殖。渦蟲的無性生殖與溫度密切相關(guān),水溫高于 16 ℃進(jìn)行無性橫裂生殖,低于16 ℃進(jìn)行有性生殖。而瑞典南部的 D . ia ct eu m 有性生殖發(fā)生在每年的 3 一 4 月,每條渦蟲可產(chǎn)卵繭 8 . 3 一 9 . 8 個(gè),孵化率高達(dá) 89 一% % , 一個(gè)卵繭能孵出 12 . 1 一 13 . 8 條小渦蟲 [17],但二者的生殖溫度都在 12 16 ℃ ,且進(jìn)行有性生殖時(shí)蟲體都較大。 渦蟲生殖渦蟲有無性生殖和有性生殖兩種生殖方式。東亞三角渦蟲肉食性，常捕捉原生動(dòng)物、小型甲殼類、線蟲、輪蟲和昆蟲幼蟲，特別喜歡吃螺螄肉和一些腐爛的有機(jī)物如小的水生生物和動(dòng)物的尸體 [10]。在清澈的不受污染的淡水環(huán)境中，溪流、山泉、池塘、湖泊、廢井等處均有東亞三角頭渦蟲分布，以溪流中分布最多，溪流中又以水流緩慢的地方分布更多。渦蟲對(duì)食物是正向反應(yīng)，對(duì)光線的刺激是避強(qiáng)光、就弱光，夜間活動(dòng)強(qiáng)于白晝。頭部一般呈三角形、截頂狀或弓形，頭的兩側(cè)往往伸出長短不一的耳突，頭部背面有 2 個(gè)黑色的眼點(diǎn)，有的種類眼點(diǎn)多達(dá)數(shù)百個(gè)，生活于洞穴中的種類眼點(diǎn)退化或消失。近年來又有學(xué)者提出渦蟲的祖先是介于無腸目和大口蟲目之間的一類動(dòng)物，認(rèn)為其消化管為囊狀如大口蟲目，但無原腎管又像無腸目，神經(jīng)系統(tǒng)為上皮神經(jīng)網(wǎng)。以上四個(gè)目，前 3 個(gè)屬于原卵巢渦蟲亞綱，最后一目屬新卵巢渦蟲亞綱。體長2mm～50mm。具褶皺咽，神經(jīng)系統(tǒng)也包括腦及成網(wǎng)狀的神經(jīng)索。生殖系統(tǒng)結(jié)構(gòu)完全，常行無性生殖，蟲體橫分裂后常不分開形成蟲鏈。具平衡囊，生殖細(xì)胞直接來自實(shí)質(zhì)細(xì)胞，無輸卵管，螺旋卵裂，直接發(fā)育?，F(xiàn)僅舉常見的或與探討演化關(guān)系有意義的幾個(gè)目。渦蟲綱的分目過去一直根據(jù)消化管的有無及其復(fù)雜程度分為無腸目、單腸目、三腸目及多腸目。一直以來均是動(dòng)物學(xué)研究的重要材料，特別是在動(dòng)物再生的研究領(lǐng)域，渦蟲被作為模式生物 [11]~ [13]。 渦蟲研究進(jìn)展渦蟲屬扁形動(dòng)物門（Platyhelminthes ） ，渦蟲綱（Turbellaria） ，它是首次出現(xiàn)兩側(cè)對(duì)稱、三胚層的生物；是動(dòng)物進(jìn)化發(fā)展史上一次質(zhì)的飛躍 [10]。在哺乳動(dòng)物試驗(yàn)中，已經(jīng)證實(shí)SDS和烷基苯磺酸鹽等表面活性劑對(duì)動(dòng)物有直接的致毒作用 [6]。因?yàn)樵S多表面活性劑無處不在(英蘇達(dá)權(quán)等,2022年,2022年和Mehrvar。作為研究再生的模式生物，這一方面的空白亟待彌補(bǔ) [1]~ [2]。 SDS on the CAT, SOD optimal concentration of mg / L。在渦蟲再生的不同階段 SOD、CAT 均有明顯的變化，先明顯上升趨勢(shì)，隨后降低再升高后趨于穩(wěn)定；SDS 對(duì) CAT和 SOD均有有低濃度促進(jìn)顯著，高濃度促進(jìn)作用降低；SDS 對(duì) CAT、SOD 的最適濃度為 mg/L；但隨著作用天數(shù)的增加，SOD、CAT 耐受 SDS濃度降低。畢 業(yè) 論 文十二烷基硫酸鈉對(duì)渦蟲再生過程中氧應(yīng)激的影響摘 要根據(jù)文獻(xiàn)中的資料，十二烷基硫酸鈉(Sodium Dodecyl Sulfate,SDS)是常用的陰離子表面活性劑,大量存在于各類洗滌劑和去污粉中,隨生活污水的排放,對(duì)環(huán)境造成了一定的危害,同時(shí)它也是生化、免疫檢測(cè)方面常用的蛋白質(zhì)變性劑,毒性較大。根據(jù)資料和老師提供的半致死濃度，在不致影響渦蟲死亡的濃度條件下，選取 0 , , 1 , , 2 , , 3mg/L七個(gè)濃度進(jìn)行再生處理，處理時(shí)間為 1 , 4 , 7 , 10d，經(jīng)過實(shí)驗(yàn)，可以看出十二烷基硫酸鈉對(duì)渦蟲體內(nèi) 2種抗氧化酶活力均有促進(jìn)效果。 SDS on the CAT and SOD has a low concentration to promote significant role in promoting high concentration decreased。目前尚未有關(guān)于渦蟲再生過程中抗氧化系統(tǒng)等方面的研究。事實(shí)上,許多表面活性劑和他們的降解產(chǎn)物已經(jīng)在世界范圍內(nèi)被發(fā)現(xiàn),廢水排放，污水處理，工廠廢水,自然水和沉積物(英,2022)。十二烷基硫酸鈉(Sodiam dodecyl sulfate，SDS)是一種常見的陰離子表面活性劑，極易溶于水，十二烷基硫酸鈉的應(yīng)用較為廣泛，主要用于洗滌劑的合成、制藥、造紙、建材、化工等行業(yè)；另外，在生化實(shí)驗(yàn)及免疫檢驗(yàn)中也常用作蛋白質(zhì)變性劑和助溶劑，具有較大的毒性，是美國試驗(yàn)材料協(xié)會(huì)(ASTM)推薦的生物毒性試驗(yàn)方法中常用標(biāo)準(zhǔn)毒物之一 [5]。本實(shí)驗(yàn)以渦蟲為模式生物，通過測(cè)定 SOD、CAT 的活性或含量變化，研究再生過程中 SDS 對(duì)其抗氧化系統(tǒng)的影響，以期彌補(bǔ)這一研究的空白，旨在進(jìn)一步揭示 SDS 對(duì)生物體的影響，為下一步更深入的研究提供理論依據(jù)。營有性生殖，一年一代；無性生殖（橫分裂） 。上皮具纖毛，有桿狀體和許多粘液腺體，通常具色素，有些種類有鮮艷的顏色；一般口位于腹面，有腸（無腸目例外），直接發(fā)育或有變態(tài)；有的種可進(jìn)行無性生殖。有的不列亞綱，直接分為 12 個(gè)目。無原腎管，神經(jīng)系統(tǒng)很不發(fā)達(dá)（包括腦及多條神經(jīng)索并連成網(wǎng)狀），有的為上皮神經(jīng)網(wǎng)。具簡(jiǎn)單的咽及囊狀具纖毛的腸，有一對(duì)腹側(cè)神經(jīng)索。(3)多腸目（Polycladida ）海產(chǎn)，體扁圓形或葉形，體長 3mm～20mm，通常在體之前緣或背部具一對(duì)觸手（tentacls）有許多眼，位于體中央向四周分出很多分支盲管，故名多腸目。(4)三腸目（Tricladida ） 生活海水、淡水中也有的生活在陸地上。個(gè)別種營體外共生，如蛭態(tài)渦蟲（Bdelloura 也稱鯊渦蟲），還有一些陸生種如笄蛭渦蟲（Bipalium ），我國常見的代表種如三角渦蟲等。另一些學(xué)者認(rèn)為無腸目是最原始的渦蟲類，因?yàn)樗鼈儧]有腸管，簡(jiǎn)單的咽直接與來源于內(nèi)胚層的吞噬細(xì)胞相連，無原腎管，神經(jīng)也呈放射狀。背面稍突，多黑色、褐色、紅棕色或乳白色，腹面稍平而色淺。體腹面密生纖毛，由于纖毛和肌肉的運(yùn)動(dòng)，使其能在物體上作游泳狀爬行。身體后段變細(xì)，背面微突，有許多黑色色素點(diǎn)；腹面扁平，顏色較背面淺且密生纖毛；口位于腹面近后端 1/3 處，咽為肌肉質(zhì)，長管狀，能從口中自由伸出，用以捕捉食物；生殖孔位于口的后方。渦蟲對(duì)溫度的要求較嚴(yán)格，渦蟲成蟲和幼蟲生活溫度的臨界線是 20℃，真渦蟲成蟲生活最適宜的溫度是 16～18℃。體前端兩側(cè)有一對(duì)耳突司味覺和嗅覺；腦神經(jīng)節(jié)附近有平衡囊；體表各處分布有感覺細(xì)胞，感受觸覺、化學(xué)刺激、水流等。關(guān)于渦蟲的有性生殖方式，日本三角渦蟲(n u g e s ia ja 卯 n ie a ) 的有性生殖發(fā)生在秋未冬初, 交配后每條渦蟲通常產(chǎn)卵繭一個(gè),也有 2 一 3 個(gè)的卵繭里約有 40 個(gè)受精卵, 孵化率 30 一 40 %[16] 。斷裂生殖有一次斷裂及二次斷裂,并以前者為主。無性生殖的斷裂點(diǎn)發(fā)生在咽后自動(dòng)斷裂,生殖后母體與幼渦蟲的大小及形態(tài)結(jié)構(gòu)差別明顯