免疫組化非標(biāo)記免疫酶法(pap)-全文預(yù)覽
【正文】 RZ≥3），而制備PAP復(fù)合物時(shí)，HRP的質(zhì)量要求不高，甚至可用酶的粗制品。 ?。?）制備抗HRP血清：健康雄性家兔（），可先于足跖皮下注射滅活的卡介苗（共10mg），2周后重復(fù)1次，刺激機(jī)體免疫系統(tǒng)功能，[（福氏完全佐劑，(RZ=)]。低親合力的抗酶抗體與酶結(jié)合較弱，漂洗時(shí)易解離，使大部分酶（70%左右）丟失，降低了方法的敏感性。 ?。?）切片與酶（HRp 70～100μg/ml,PBS溶解）（室溫），酶與抗酶抗體結(jié)合?！ 。?）切片與第二抗體（也稱(chēng)橋抗體，抗種屬a IgG抗體）孵育1～（室溫）?！ 。ㄒ唬┟笜蚍ā ?．基本原理 首先用酶免疫動(dòng)物，制備效價(jià)高、特異性強(qiáng)的抗酶抗體，然后使用第二抗體作橋，將抗酶抗體連結(jié)在與組織抗原結(jié)合的第一抗體上，再將酶結(jié)合在抗酶抗體，經(jīng)呈色顯示抗原的分布。非標(biāo)記抗體酶法 由于酶標(biāo)抗體存在一些缺點(diǎn)，例如①酶與抗體間的共價(jià)連結(jié)可損害部分抗體和酶的活性；②抗血清中的非特異性抗體被酶標(biāo)記后，與組織成分結(jié)合，可致背景染色等?，F(xiàn)分述如下。第一抗體的稀釋度可高些，使抗體的兩個(gè)Fab段均與組織抗原結(jié)合，較牢固，漂洗時(shí)不易丟失。因抗酶抗體和第一抗體均系種屬a IgG，具有相同的抗原性 ，所以 橋抗體游離的Fab能與抗酶抗體結(jié)合，起到橋的作用，將抗酶抗體連結(jié)在與組織抗原結(jié)合的第一抗體上。但仍有其不足：①在酶抗體血清中，含有低親合力和高親合力兩類(lèi)抗體，它們作為抗原與橋抗體結(jié)合，主要依賴于橋抗體對(duì)它的親合力，而與其
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