【正文】 表現(xiàn)為腹痛、腹瀉、血便、嘔咖啡樣血等。 2022年 3月 深 部感染真菌 檢驗(yàn) 傳統(tǒng)的接合菌門(mén)（ Zygomycota） 上海交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院 ?傳統(tǒng)的接合菌門(mén)（ Zygomycota）因其在生物 系統(tǒng)發(fā)生學(xué)中為復(fù)系群（ polyphyletic group），現(xiàn)不再使用該門(mén)名稱 。 ? 對(duì)過(guò)敏性支氣管肺炎病人可用曲霉抗原提取液作皮試。 ?分生孢子頭 是曲霉屬具有特征性的結(jié)構(gòu)之一，由頂囊、產(chǎn)孢細(xì)胞和分生孢子鏈組成，可以是球形、放射形、圓柱形或棒形，且具有不同的顏色。 ? 標(biāo)本用氫氧化鉀涂片，鏡檢 可見(jiàn)分枝有隔菌絲 ，有時(shí)可見(jiàn) 分生孢子梗、頂囊及小梗 。曲霉可局限在肺內(nèi)感染也可播散到其他器官，甚至引起 全身性感染 。 ?（一）分類(lèi)和命名 ?其中大多數(shù)曲霉只發(fā)現(xiàn)了無(wú)性階段，它們歸屬于半知菌亞門(mén)、絲孢菌綱、絲孢菌目、叢梗孢科，少數(shù)種具有性階段歸入子囊菌亞門(mén)、不整子囊菌綱、散囊菌目、散囊菌科。臨床標(biāo)本可用痰液、支氣管吸出物等，核酸檢測(cè)方法有探針雜交法、 PCR擴(kuò)增法等。 ? 酚氧化酶 是新生隱球菌區(qū)別于其它隱球菌的特有的酶 ，是含銅的末端氧化酶，能催化單酚羥基化為二酚，進(jìn)一步將其氧化成醌，而醌在非酶促條件下自氧化生成黑色素。近 20年來(lái)，隱球菌的發(fā)病率不斷升高。隱球菌屬按血清學(xué)分類(lèi)為 A、 B、 C、 D及A/D型。 2022年 3月 深 部感染真菌 檢驗(yàn) 念珠菌屬 （ Candida） 上海交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院 ?馬蹄鱉凝血系統(tǒng)中的凝血酶原 G因子的 α 亞基特異性識(shí)別 BG后，可激活血清凝固酶原上的 β 亞基，形成凝固酶，凝固酶參與凝血酶原級(jí)聯(lián)反應(yīng)，使凝固蛋白原轉(zhuǎn)變?yōu)槟z狀的凝固蛋白，整個(gè)反應(yīng)通過(guò)光譜儀測(cè)量其光密度可進(jìn)行量化(BG水平可精確到 1pg/mL) ,根據(jù)其引起的濁度變化對(duì)真菌 β 葡聚糖濃度進(jìn)行定量。 ?5)生理生化特征 不同菌種糖發(fā)酵和糖同化作用不同，這一特征可以用來(lái)區(qū)分不同念珠菌菌種。 2022年 3月 上海交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院 2022年 3月 深 部感染真菌 檢驗(yàn) 念珠菌屬 （ Candida） 上海交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院 ?（三）真菌 檢驗(yàn) ?3)厚壁孢子形成試驗(yàn) 在玉米吐溫培養(yǎng)基25~30176。有些酵母菌還可形成具分隔的真菌絲。 ?菌落特征與鏡下形態(tài) ?(1) SDA(含氯霉素和慶大霉素 )培養(yǎng)基 ： 25176。 2022年 3月 2022/6/1 51 （ Candida） 2022年 3月 深 部感染真菌 檢驗(yàn) 念珠菌屬 （ Candida） 上海交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院 ?（ 三）真菌 檢驗(yàn) ?、運(yùn)送和保存 采集分泌物、痰、糞、尿、血或腦脊液等標(biāo)本?？梢鹑祟?lèi)感染的念珠菌屬菌種有 白念珠菌（）、光滑念珠菌（ ）、季也蒙念珠菌（ ）、克柔念珠菌（ ）、葡萄牙念珠菌（ ) 、近平滑念珠菌（)、熱帶念珠菌（ ) 。在臨床上比較少見(jiàn)，一般呈地方性流行。申克孢子絲菌復(fù)合體其中包含的不同菌種可以通過(guò)形態(tài)學(xué)及生理學(xué)特點(diǎn)結(jié)合分子生物學(xué)分型手段進(jìn)行鑒定。m～ 6181。主要病原菌為 申克孢子絲菌 （ Sporotrichum schenckii）。 上海交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院 2022年 3月 上海交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院 2022年 3月 2022/6/1 41 淺部感染真菌 檢驗(yàn) ?皮下組織感染真菌 ?引起皮下組織感染的真菌主要有著色真菌和孢子絲菌。 上海交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院 2022年 3月 上海交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院 2022年 3月 糠秕馬拉癬菌（ Malassezia furfur） ? 疑似花斑癬的鱗屑標(biāo)本接種于含氯霉素、放線菌酮及植物油的沙氏培養(yǎng)基上， 35℃ 培養(yǎng)，觀察菌落。如果是糠秕馬拉癬菌感染，可找到 彎曲或弧形的菌絲及圓形或卵圓形孢 子。 上海交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院 2022年 3月 糠秕馬拉癬菌（ Malassezia furfur） ?真菌 檢驗(yàn) ? 疑似汗斑癬：病損極為表淺，以鈍手術(shù)刀取材時(shí)應(yīng)盡可能刮取表面皮屑，或用雙面膠粘貼于皮膚表面，數(shù)分鐘后揭下，直接移至載玻片上。皮損最常見(jiàn)于胸、背、臂的上半部皮脂腺豐富部位。菌絲球拍狀 (Epidermophyton) 2022年 3月 2022/6/1 34 淺部感染真菌 檢驗(yàn) ?角層癬菌 ?角層癬菌主要寄居于人體皮膚和毛干的最表層，因不接觸組織細(xì)胞，很少引起宿主組織細(xì)胞的炎癥反應(yīng)，即使有也極輕微。顯微鏡下大分生孢子豐富，棒形、頂端鈍圓、壁薄、光滑、孤立或成群，形成在菌絲側(cè)壁或頂端， 2~3個(gè)一組。菌絲有螺旋狀、球拍狀、鹿角狀和結(jié)節(jié)狀 2022年 3月 毛癬菌屬 (Trichophyton ) 上海交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院 2022年 3月 2022/6/1 30 淺部感染真菌 檢驗(yàn) 鑒定 ? (Microsporum ) 菌落生長(zhǎng)慢到快；質(zhì)地光滑、毛狀或羊毛狀；表面顏色呈白色、米黃色、黃棕色、黃色或銹色，背面呈蒼白色、黃色、紅色、褐色或紅褐色。小分生孢子呈單細(xì)胞、圓形、梨形或棒形，孤立或像葡萄狀群生。培養(yǎng)基中大豆蛋白胨提供營(yíng)養(yǎng)，放線菌酮抑制腐生霉菌，氯霉素抑制革蘭陽(yáng)性菌和慶大霉素抑制革蘭陰性菌。 ?其中關(guān)鍵在于促進(jìn)皮膚癬菌產(chǎn)生孢子，對(duì)于難于產(chǎn)孢的菌種需要采用特殊培養(yǎng)基誘導(dǎo)產(chǎn)孢，例如：對(duì)于懷疑毛癬菌屬可以采用 燕麥培養(yǎng)基 ，對(duì)于懷疑小孢子菌屬可以采用 米飯培養(yǎng)基 。 ?【結(jié)果判定】皮膚癬菌感染在皮屑、甲屑鏡檢時(shí)可見(jiàn) 有隔菌絲或成串孢子 ,病發(fā)可見(jiàn)發(fā)內(nèi)孢子或發(fā)外孢子； ?【注意事項(xiàng)】掌握真菌菌絲或孢子判定標(biāo)準(zhǔn)，即具有一定折光性的為菌絲或孢子，勿將纖維、細(xì)胞等誤認(rèn)為真菌。 毛發(fā)標(biāo)本建議取材后立刻進(jìn)行真菌鏡檢及培養(yǎng)。 2022年 3月 2022/6/1 23 淺部感染真菌 檢驗(yàn) 皮膚癬菌 ?（三）真菌 檢驗(yàn) ?、運(yùn)送和保存 ?3） 毛發(fā)標(biāo)本 選擇適當(dāng)?shù)拿l(fā)，應(yīng)檢測(cè)那些 無(wú)光澤毛發(fā)或斷發(fā)以及在毛囊口折斷的毛發(fā) 。 2022年 3月 2022/6/1 22 淺部感染真菌 檢驗(yàn) 皮膚癬菌 ?（ 三）真菌 檢驗(yàn) ?、運(yùn)送和保存 ?2） 皮屑標(biāo)本 采集標(biāo)本前用 75%乙醇清潔取材區(qū)域。 2022年 3月 2022/6/1 21 淺部感染真菌 檢驗(yàn) 皮膚癬菌 ?（三）真菌 檢驗(yàn) ?、運(yùn)送和保存 ?1） 甲標(biāo)本 采集標(biāo)本前用 75%乙醇徹底 清潔病甲 ，以減少培養(yǎng)時(shí)的細(xì)菌污染，提高鏡檢的陽(yáng)性率。 皮膚癬菌種類(lèi)見(jiàn) 下 表 2022年 3月 2022/6/1 19 淺部感染真菌 檢驗(yàn) 2022年 3月 2022/6/1 20 淺部感染真菌 檢驗(yàn) 皮膚癬菌 ?（ 二 ） 臨床意義 ?毛癬菌屬易侵犯人體皮膚、指（趾）甲、毛發(fā)的角蛋白組織并生長(zhǎng)繁殖，可引起頭癬、體癬、股癬、疊瓦癬、手癬、足癬及甲癬等。 2022年 3月 2022/6/1 18 淺部感染真菌 檢驗(yàn) 皮膚癬菌 ?（一）分類(lèi)和命名 ?皮膚癬菌（ Dermatophytes）是一類(lèi)嗜角質(zhì)的絲狀真菌，具有無(wú)性期和有性期兩種形態(tài)。 ?所有標(biāo)本均應(yīng)在密封無(wú)菌容器運(yùn)送和處理，運(yùn)送時(shí)間越短越好；不能用厭氧轉(zhuǎn)運(yùn)或厭氧容器。 洪秀華 真菌感染檢驗(yàn) 2022年 3月 上海交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院 講課內(nèi)容 真菌感染 檢驗(yàn)程序 1 2 3 深部感染真菌檢驗(yàn) 4 標(biāo)本的采集、運(yùn)送和保存 淺部感染真菌 檢驗(yàn) 2022年 3月 真菌感染 檢驗(yàn) ?按其侵犯人體組織和器官的不同，臨床上將真菌分為引起皮膚和軟組織感染的真菌和引起侵襲性感染的真菌兩大類(lèi)。 上海交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院 2022年 3月 臨床標(biāo)本真菌檢驗(yàn)程序 上海交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院 2022年 3月 真菌鑒定程序 上海交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院 2022年 3月 標(biāo)本的采集、運(yùn)送和保存 ?合適采集、運(yùn)送與處理標(biāo)本 以及遵守真菌實(shí)驗(yàn)檢測(cè)與鑒定程序是保證真菌感染的實(shí)驗(yàn)檢測(cè)結(jié)果正確的前提。 ?臨床上最多見(jiàn)的為皮膚癬真菌，包括毛 癬菌屬、表皮癬菌屬和小孢子菌屬。 ?有性期屬于裸囊菌科、節(jié)皮菌屬 (Arthroderma)。少數(shù)過(guò)敏體質(zhì)的皮膚癬病患者可出現(xiàn)過(guò)敏反應(yīng)，表現(xiàn)為癬菌疹。對(duì)于伴有甲溝炎患者的取材，應(yīng)采用棉拭子， 75%乙醇清潔局部后沾取損害分泌物，每位患者至少應(yīng)取兩個(gè)拭子，放入無(wú)菌試管中以備鏡檢和培養(yǎng)。皮屑標(biāo)本建議 取材后立刻進(jìn)行真菌鏡檢及培養(yǎng)。如果懷疑頭皮隱性感染，可用塑料梳子刷頭皮后將其壓在瓊脂表面進(jìn)行培養(yǎng)。 檢查時(shí)應(yīng)遮去強(qiáng)光，先在低倍鏡下檢查有無(wú)菌絲和孢子，然后用高倍鏡觀察孢子和菌絲的形態(tài)、特征、位置、大小和排列等。 2022年 3月 淺部感染真菌 檢驗(yàn) 皮膚癬菌 鑒定 ?皮膚癬菌菌種鑒定主要依靠培養(yǎng)的 菌落特征、顯微鏡下孢子和菌絲的形態(tài)以及生理生化試驗(yàn)。皮（甲）屑與毛發(fā)標(biāo)本接種該培養(yǎng)基，隨著皮膚癬菌生長(zhǎng)， 1周內(nèi)培養(yǎng)基由黃色轉(zhuǎn)變?yōu)榧t色。顯微鏡下大分生孢子呈多細(xì)胞、圓柱狀、棒狀或香煙形，壁光滑，常缺乏。大分生孢子細(xì)長(zhǎng)棒狀薄壁。 2022年 3月 2022/6/1 31 小孢子癬菌：菌落為灰色、橘紅色或棕黃色，厚壁大分生孢子，菌絲有結(jié)節(jié)狀、梳狀和球拍狀 (Microsporum ) 2022年 3月 2022/6/1 32 淺部感染真菌 檢驗(yàn) 鑒定 ? (Epidermophyton) 菌落生長(zhǎng)緩慢；質(zhì)地膜狀變成氈狀到粉狀；表面呈黃色到土黃色，背面呈羚羊皮色到褐色，中心有不規(guī)則皺襞或腦回狀溝。粗棒狀薄壁大分生孢子。 ?侵入表皮后，在皮膚角質(zhì)層外 2/3處生長(zhǎng)、繁殖，引起一種 慢性、無(wú)癥狀或輕微癥狀的皮膚斑疹， 呈灰白色、褐色或淡黃色，上面附著細(xì)小糠皮樣鱗屑，有時(shí)可融合成片，似汗?jié)n斑點(diǎn)，俗稱 汗斑即花斑癬（ tinea versicolor） 。近年大量研究顯示，糠秕馬拉癬菌還可引起毛囊炎，可能為脂溢性皮炎的重要發(fā)病原因之一。 上海交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院 2022年 3月 糠秕馬拉癬菌（ Malassezia furfur） ?真菌 檢驗(yàn) ? 將取材的膠帶直接貼于載玻片上鏡檢或經(jīng)棉藍(lán)染色或革蘭染色后檢查，皮屑加 10%KOH制片、觀察。白吉爾絲孢酵母菌引起的感染可見(jiàn)：菌絲淡綠色，與毛干垂直，分裂為圓形、卵圓形或長(zhǎng)方形的孢子，無(wú)子囊及子囊孢子。根據(jù)病發(fā)上 結(jié)節(jié) 的顏色、硬度、大小，即可對(duì)何德毛結(jié)節(jié)菌和白吉爾絲孢酵母菌初步診斷， 直接鏡檢看到子囊或子囊孢子 ，可確定為何德毛結(jié)節(jié)菌。 2022年 3月 2022/6/1 42 淺部感染真菌 檢驗(yàn) ?皮下組織感染真菌 ? 主要病原菌有裴氏 著色真菌 (Fonseceea pedrosoi)、緊密著色真菌 (Fonseceea pacta)、卡氏 枝孢霉 （ Cladosporium carrianii）和疣狀 瓶霉 (Phialophora verrucosa)等， 孢子絲菌屬半知菌亞門(mén)、絲孢菌綱、絲孢菌目、叢梗孢科。 上海交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院 2022年 3月 淺部感染真菌 檢驗(yàn) 申克孢子絲菌（ S. schenckii） ?鑒定 標(biāo)本革蘭或 PAS染色制片在油鏡下直接鏡檢可見(jiàn)到 革蘭陽(yáng)性的長(zhǎng)圓形雪茄煙樣或梭形小體 ，一般 4181。m，但陽(yáng)性率很低。 此類(lèi)真菌在正常人體內(nèi)不存在，一旦侵入機(jī)體即可致病。 2022年 3月 深 部感染真菌 檢驗(yàn) 念珠菌屬 （ Candida） 上海交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院 ?（一） 分類(lèi)和命名 ?屬于出芽酵母科，目前已發(fā)現(xiàn) 270余種，是一種 條件致病菌 。 ?可侵犯人體許多部位如皮膚、黏膜、腸道、肺、腎、腦等，嚴(yán)重時(shí)可引起全身感染， 2022年 3月 深 部感染真菌 檢驗(yàn) 念珠菌屬 （ Candida） 上海交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院 ?（ 二 ） 臨床意義 ?常見(jiàn)白假絲酵母菌感染有： ?① 皮膚假絲酵母菌?。汉冒l(fā)于皮膚潮濕、皺褶處（腋窩、腹股溝、乳房下、肛門(mén)周?chē)凹诇虾椭搁g）； ?② 黏膜假絲酵母菌?。阂赠Z口瘡、口角炎、外陰及陰道炎最多見(jiàn)； ?③ 內(nèi)臟假絲酵母菌?。嚎捎绅つてつw等處病菌播散引起，如肺炎、腸胃炎、腎孟腎炎、心內(nèi)膜炎、腦膜炎、腦炎等，偶爾也可發(fā)生敗血癥。 ?菌落特征與鏡下形態(tài) 2022年 3月 深 部感染真菌 檢驗(yàn) 念珠菌屬 （ Candida） 上海交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院 ?（三）真菌 檢驗(yàn) ? ?2)分離培養(yǎng) 將標(biāo)本接種在沙氏培養(yǎng)基上， 29℃ 或 35℃培養(yǎng) l～ 4d后，培養(yǎng)基表面可出現(xiàn)酵母樣型菌落。有些菌在進(jìn)行芽殖時(shí)，形成假菌絲。 C 24h～ 48h的培養(yǎng)，有 4種念珠菌可以得到鑒定， 翠綠色菌落為白念珠菌 ， 鐵藍(lán)色菌落為熱帶念珠菌， 淡粉紅色