【正文】 CBA Assay Standard cont. ChemokineI CBA Assay Standard BD Biosciences Immune Function 80 pg/ml CBA Assay Standard cont. ChemokineI CBA Assay Standard BD Biosciences Immune Function 156 pg/ml CBA Assay Standard cont. ChemokineI CBA Assay Standard BD Biosciences Immune Function 312 pg/ml CBA Assay Standard cont. ChemokineI CBA Assay Standard BD Biosciences Immune Function 625 pg/ml CBA Assay Standard cont. ChemokineI CBA Assay Standard BD Biosciences Immune Function 1250 pg/ml CBA Assay Standard cont. ChemokineI CBA Assay Standard BD Biosciences Immune Function 2500 pg/ml CBA Assay Standard cont. ChemokineI CBA Assay Standard BD Biosciences Immune Function Human Th1/Th2 Lymphokine CBA –標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn) 5000 pg/ml 2500 pg/ml 1250 pg/ml 625 pg/ml 312 pg/ml 80 pg/ml 20 pg/ml IL2 IL4 IL5 IL10 TNF? IFN? IL2 IL4 IL5 IL10 TNF? IFN? C u r v e F i t t i n g M o d e l : 4 P a r a m e t e r L o g i s t i cy = ( ( A D ) / ( 1 + ( x / C ) ^ B) ) + DA = 1 . 2 6 B = 5 . 0 0 C = 3 . 6 0 D = 3 . 8 9 R ^2 = 0 . 9 9 7 3C u r v e F i t t i n g M o d e l : 4 P a r a m e t e r L o g i s t i cy = ( ( A D ) / ( 1 + ( x / C ) ^ B) ) + DA = 1 . 2 9 B = 4 . 2 4 C = 3 . 4 3 D = 4 . 3 3 R ^2 = 0 . 9 9 9 1C u r v e F i t t i n g M o d e l : 4 P a r a m e t e r L o g i s t i cy = ( ( A D ) / ( 1 + ( x / C ) ^ B) ) + DA = 1 . 3 4 B = 4 . 1 1 C = 3 . 4 2 D = 4 . 4 5 R ^2 = 0 . 9 9 8 7C u r v e F i t t i n g M o d e l : 4 P a r a m e t e r L o g i s t i cy = ( ( A D ) / ( 1 + ( x / C ) ^ B) ) + DA = 1 . 3 1 B = 3 . 8 6 C = 3 . 3 0 D = 4 . 4 5 R ^2 = 0 . 9 9 8 0C u r v e F i t t i n g M o d e l : 4 P a r a m e t e r L o g i s t i cy = ( ( A D ) / ( 1 + ( x / C ) ^ B) ) + DA = 1 . 3 1 B = 3 . 7 7 C = 3 . 3 7 D = 4 . 7 7 R ^2 = 0 . 9 9 9 7C u r v e F i t t i n g M o d e l : 4 P a r a m e t e r L o g i s t i cy = ( ( A D ) / ( 1 + ( x / C ) ^ B) ) + DA = 1 . 3 3 B = 4 . 0 8 C = 3 . 2 4 D = 4 . 4 2 R ^2 = 0 . 9 9 8 7T N F a1101 0 01 0 0 01 0 0 0 01 10 1 0 0 1 0 0 0 1 0 0 0 0C o n c e n t r a t i o n ( p g / m l )FL2 MFII F N g1101 0 01 0 0 01 10 1 0 0 1 0 0 0 1 0 0 0 0C o n c e n t r a t i o n ( p g / m l )FL2 MFII L 1 01101 0 01 0 0 01 0 0 0 01 10 1 0 0 1 0 0 0 1 0 0 0 0C o n c e n t r a t i o n ( p g / m l )FL2 MFII l 41101 0 01 0 0 01 0 0 0 01 10 1 0 0 1 0 0 0 1 0 0 0 0C o n c e n t r a t i o n ( p g / m l )FL2 MFII L 51101 0 01 0 0 01 0 0 0 01 10 1 0 0 1 0 0 0 1 0 0 0 0C o n c e n t r a t i o n ( p g / m l )FL2 MFII l 21101 0 01 0 0 01 0 0 0 01 10 1 0 0 1 0 0 0 1 0 0 0 0C o n c e n t r a t i o n ( p g / m l )FL2 MFIBD Biosciences Immune Function 操作步驟 ?檢測(cè)物與捕獲微球共 孵育 。 ?流式細(xì)胞儀上機(jī) 檢測(cè) 。 BD Biosciences Immune Function ? 使用 Prostatespecific antigen（ PSA3）及其突變體 PSA3A對(duì)前列腺癌患者 T細(xì)胞免疫，通過(guò)Human Th1/Th2 Cytokine CBA Kit檢測(cè)免疫 T細(xì)胞的細(xì)胞因子分泌水平 ? A， B， C為稀釋標(biāo)準(zhǔn)， D為無(wú)處理對(duì)照組， E為 PSA3A處理組， F為 PSA3處理組 ? 摘自 Terasawa H, et al. Clinical Cancer ,4153, January 2022 ? 上述研究發(fā)現(xiàn) PSA3A比 PSA3能更有效的殺傷前列腺腫瘤，與 PSA3A能刺激 T細(xì)胞分泌更高水平的 IL IL IL5和 IFNγ有關(guān)，為后續(xù)藥物開(kāi)發(fā)打下基礎(chǔ) BD Biosciences Immune Function BD CBA新 產(chǎn)品系列 BD CBA Flex SetNew ? 基本原理與 CBA Kit相似 ? 檢測(cè)原理不同： Flex Set微球種熒光，分別在流式細(xì)胞儀的 FL3（近紅外熒光）和 FL4（紅色熒光）通道檢測(cè)，通帶有近紅外和紅色兩過(guò)這個(gè)二維矩陣（對(duì)應(yīng)于微球上的特定序號(hào)）識(shí)別捕獲微球，從而定性目的蛋白， PE標(biāo)記的檢測(cè)抗體在 FL2通道來(lái)對(duì)目的蛋白定量。 ? CD4+/CD25細(xì)胞上 FOXP3的轉(zhuǎn)錄表達(dá)可以誘導(dǎo) GITR、CD103和 CTLA4的表達(dá)，并且促使調(diào)節(jié)性 T細(xì)胞表型形成。ve T cell Naturally occurring Treg cell Adaptive Treg cell CD25 GITR CTLA4 FoxP3+ CD4 CD127 CD25 GITR CTLA4 FoxP3+ CD4 CD127 FoxP3 BD Biosciences Immune Function 人 Tr細(xì)胞表達(dá)特征： CD127+ ? CD127是非二聚體 IL7受體 ? CD127表達(dá)于胸腺細(xì)胞， T、 B祖細(xì)胞，成熟 T細(xì)胞，單核細(xì)胞及其它淋巴細(xì)胞和骨髓細(xì)胞 ? T細(xì)胞活化后 CD127表達(dá)下調(diào) ? CD127表達(dá)下調(diào)發(fā)生在 Tr細(xì)胞 ? CD127下調(diào)同時(shí) CD25高表達(dá)、 FoxP3+為 Tr細(xì)胞 ? CD127優(yōu)于傳統(tǒng)的 FoxP3+－－保證了細(xì)胞的活性 BD Biosciences Immune Function 從 Human PBMC’s中分離 Tr細(xì)胞 BD Biosciences Immune Function FoxP3染色確認(rèn) Tr細(xì)胞 BD Biosciences Immune Function FoxP3染色確認(rèn) Tr細(xì)胞 BD Biosciences Immune Function 小結(jié) ? CD127弱表達(dá) ? FoxP3+CD127loCD25hiint ? CD127和 FoxP3聯(lián)合應(yīng)用于 Tr細(xì)胞的功能性研究（體內(nèi)體外） 樹(shù)突狀細(xì)胞 （ dendritic cell， DC） BD Biosciences Immune Function DC的生物學(xué)特點(diǎn) ? DC因其具有膜樣或樹(shù)突樣突起而得名 ? DC包括郎罕氏細(xì)胞、間隙 DC、濾泡 DC（ FDC）、并指 DC（ IDC）等等。 ? DC還可以通過(guò)激活巨噬細(xì)胞， NK細(xì)胞， NK樣 T細(xì)胞和嗜酸性粒細(xì)胞引發(fā)機(jī)體對(duì)入侵感染因素的反應(yīng)，從而連接天然免疫系統(tǒng)和適應(yīng)性免疫系統(tǒng) ? DC受細(xì)胞因子調(diào)控的同時(shí) , 本身也可產(chǎn)生多種細(xì)胞因子 , 如 IFNα, IL 12, GM CSF, IL 1, IL 6和 TNF α等 BD Biosciences Immune Function DC將 Ag提呈給初始 T細(xì)胞 BD Biosciences Immune Function DC的表面標(biāo)志 ? 人 DC的主要特征性表面標(biāo)志為 CD1a和 CD83， CD83還是 DC充分成熟的標(biāo)志。MDC(blue) ? Different percentage and ratio of PDC and MDC↓in 3 samples—MDC’ role in cancer and cell immunity ? scatter properties of MDC in 3 samples: larger in ascites and undergoing apoptosis in LN BD Biosciences Immune Function DC與 HIV The Journal of Immunology, 2022, 168: 4796–4801. PDC↓↓ MDC PhosFlow Phosphoproteins Detection by Flow Cytometry 流式蛋白磷酸化檢測(cè) BD Biosciences Immune Function 細(xì)胞間和