《基因與載體連接》ppt課件-全文預(yù)覽
【正文】 2. 人工加尾形成 “ 粘性末端 ” DNA末端轉(zhuǎn)移酶 能在沒(méi)有模板的情況下給 DNA的 3’OH端 加上脫氧核苷酸。第六章 基因與載體連接 一、黏性末端與平末端的連接 二、其他連接方法 一、黏性末端與平末端的連接 一）黏性末端 DNA分子間的連接 DNA連接酶把相互靠近的 5’端磷酸與 3’OH連到一起。 5’ 5’ 5’ 5’ 3’ 3’ 3’ 3’ OH OH P P P P HO HO 5’ 3’ OH P P HO 5’ 3’ 1972年，斯坦福大學(xué)的 P. Labban和 P. Kaiser提出。 非酶切位點(diǎn) 5‘突出的末端 外源片段先用 Klenow補(bǔ)平；然后用 TdT補(bǔ)加 polyC；載體片段也用 Klenow補(bǔ)平，加 polyG，退火不經(jīng)連接即可轉(zhuǎn)化。 GGAATTCC CCTTAAGG EcoRI linker： ② linker的作用 ④ 缺點(diǎn)： 1）可以用內(nèi)切酶把插入片段切下來(lái)。 ② adapter的作用 Bluntended DNA 5’pGATCCCGGOH3’ HOGGCCp5’ BamH I adapter P P 5‘pGATCCCGG GGCC CCGG GGCCCTAGP5’ 5‘pGATCCCGG GGCC CCGG GGCCCTAGP5’ CCGGGATCCCGGOH GGCCCTAGGGCCP5’ 接頭自我連接 接頭與接頭會(huì)彼此以粘性末端接在一
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