【正文】 特別對于血站系統(tǒng)，該檢測結(jié)果直接決定該份血液是否能夠安全用于臨床。歡迎您的光臨，！希望您提出您寶貴的意見，你的意見是我進(jìn)步的動力。什么時候離光明最近？那就是你覺得黑暗太黑的時候。學(xué)習(xí)資料。我不知道年少輕狂，我只知道勝者為王。一方面在低流行區(qū)或低危人群中，建立增補(bǔ)試驗(yàn)或聯(lián)合檢測方法，對初篩試驗(yàn)中呈反應(yīng)性的樣本進(jìn)行確證，以控制假陽性率；另一方面，在目前情況下，設(shè)置合適的“灰區(qū)范圍”，將處于“灰區(qū)范圍”的樣本作為可疑樣本（被技術(shù)認(rèn)為陰性卻含有較高OD值讀數(shù)的樣本）進(jìn)行復(fù)檢，能減少假陰性結(jié)果的產(chǎn)生。另外，初、復(fù)檢同時為反應(yīng)性的樣本也不一定為真陽性，文中由于方法的局限性，無法對這些樣本進(jìn)行確證，只能暫時依據(jù)HCV RNA檢測結(jié)果來區(qū)分這些樣本。所以，設(shè)置1個適當(dāng)?shù)摹盎覅^(qū)范圍”，對處于該范圍的樣本做進(jìn)一步的檢測，采用多種試劑聯(lián)合檢測，只有當(dāng)結(jié)果均為陰性時方可發(fā)出檢驗(yàn)報告，必要時需再次取樣隨訪調(diào)查，以避免漏檢現(xiàn)象的發(fā)生。由此表明確實(shí)存在灰區(qū)樣本漏檢情況發(fā)生，故而有必要對這些樣本進(jìn)行確認(rèn)。統(tǒng)計表4中Cov均值＜20的數(shù)據(jù)，Cov平均值=073s=04平均值+2s=1552。 2．4 陽性結(jié)果確證 采用衛(wèi)生部臨床檢驗(yàn)中心1 Ncu/ml定值質(zhì)控血清以及經(jīng)確證結(jié)果呈陽性的12份血清分別用陰性血清稀釋，同時用2種初篩試劑檢測，平均值Cov≥1為陽性，結(jié)果見表4。（073）13+（354）（055）28（058）+（198）43+（319）177。（081）+（254）9+（142）（052）24（054）+（104）39177。表1 抗HCV初、復(fù)檢結(jié)果不一致樣本Cov值 樣本初檢復(fù)檢樣本初檢復(fù)檢樣本初檢復(fù)檢1+（284）（053）16+（246）（061）31（058）+（124）2+（235）（061）17（059）+（128）32（056）+（295）3+（186）（051）18（052）+（134）33（065）+（185）4+（367）（056）19（053）+（152）34（067）+（249）5+（174）（057）20（068）+（237）35177。根據(jù)表2結(jié)果，以各組段樣本數(shù)量為縱坐標(biāo)，以Cov值為橫坐標(biāo)作圖可見陰性樣本Cov值呈偏態(tài)分布，見圖1?？侰ov平均值、s和Cov平均值+2s分別為2107367。對這些樣本采用FQPCR方法和COBAS AmpliScreen HCV Test (V20)測試系統(tǒng)再次檢測，其中1份HCV RNA陽性樣本，而ELISA抗HCV結(jié)果不確定，Cov值為085—135。對于初、復(fù)檢結(jié)果不一致的樣本用FQPCR方法和COBAS AmpliScreen HCV Test (V20)測試系統(tǒng)檢測。20℃下保存期為3個月、70℃下保存期為1年，運(yùn)輸采用干冰。1 材料與方法 1．1 樣本 2007年5月—9月，本中心初、復(fù)檢抗HCV結(jié)果不一致但復(fù)核結(jié)果為陰性的樣本1 394份。處于陽性判斷值定值域中的測定結(jié)果可歸為可疑，即ELISA測定的“灰區(qū)”。十、免疫檢驗(yàn)存在的問題HB基因組變異對病毒HBsAg和HBeAg測定影響問題，以及如何評價試劑盒對這些變異株的檢測效能；HBcAb檢測在保證輸血安全中的意義；HBeAb、HBcAb溯源性問題；HBcAb檢測模式的問題等均困擾著臨床檢測者。）；③陰陽性對照正常，室內(nèi)弱陽性和陰性質(zhì)控正常，且沒有出現(xiàn)“花板”（洗板不干凈，背景顏色深）的情況下認(rèn)為該檢測批有效，但仍需對位于“灰區(qū)”和弱陽性的HBsAg、HBeAg結(jié)果及少見模式結(jié)果進(jìn)行復(fù)查，避免偶然因素及孔間差對結(jié)果造成影響；④若陰陽性對照、陰性質(zhì)控異常，或出現(xiàn)“花板”的情況則必須整批復(fù)查；⑤在陰陽性對照、陰性質(zhì)控正常且未出現(xiàn)“花板”的情況下，弱陽性質(zhì)控S/Co超出3SD時復(fù)查位于“灰區(qū)”標(biāo)本，超出+3SD時則復(fù)查弱陽性標(biāo)本；⑥對于抗體檢測，尤其是競爭法檢測HBeAb、HbcAb，由于不同試劑盒、不同檢測方法間CO值存在差異及變異系數(shù)大等因素，結(jié)果缺乏可比性，失控后的處理很難滿意地解決，在沒有統(tǒng)一的判斷標(biāo)準(zhǔn)、較小的變異系數(shù)及明確的臨床意義的情況下，引入弱陽性報告方式在臨床實(shí)踐中證明可行；⑦室內(nèi)質(zhì)控的評價：認(rèn)真分析每一次室內(nèi)質(zhì)控失控的原因，并對各項(xiàng)檢測的均值，C等進(jìn)行月與月之間的比較分析，及時發(fā)現(xiàn)試劑盒檢出能力的變化及操作中存在的問題，并采取適當(dāng)?shù)拇胧﹣硖岣邫z測的精準(zhǔn)性。定量測定參照臨床化學(xué)的判斷規(guī)則。質(zhì)控圖繪制：定性測定可采用弱陽性質(zhì)控品的S/Co值作質(zhì)控圖。另外還有Westgard多規(guī)則質(zhì)控規(guī)則、累積和（CUSUM）質(zhì)控規(guī)則等質(zhì)控方法。SI上=（X最小X）/S，SI下=（X最大X）/S；④對照SI表，檢查是否出控。同時選擇S/。九、質(zhì)量控制（室內(nèi)質(zhì)控）ELISA定性試驗(yàn)的臨床意義在于是否檢出病原體，與檢出量無關(guān)，因此質(zhì)量控制（quality control, QC）要保證試驗(yàn)的靈敏度和重復(fù)性。在ELISA定量檢測中每一塊反應(yīng)板都必須繪制相應(yīng)的標(biāo)準(zhǔn)曲線。抑制率（％）＝（陰性對照A值標(biāo)本A值）/陰性對照A值100%，一般以抑制率≥50%為陽性。由此可以看出為了避免檢測結(jié)果受單孔陽性或者陰性對照的影響（當(dāng)參與CO計算時），必須設(shè)立多孔對照、合理布局，并限定取舍條件。實(shí)驗(yàn)滿足下列條件有效：⑴多于半數(shù)的陰性質(zhì)控對照符合要求（一般為1個PC，3個NC）；⑵PC1NCx≥；⑶PC2NCx≥(如果使用)?，F(xiàn)以HI檢測試劑盒為例。另一種復(fù)查方式是采用國外進(jìn)口試劑進(jìn)行復(fù)查，其理由是盡管進(jìn)口試劑并不是“金標(biāo)準(zhǔn)”，但實(shí)驗(yàn)室已經(jīng)對此高度重視，并且使用了質(zhì)量較好，價格較貴的試劑，但該法對于小醫(yī)院而言則很難實(shí)施。C）， C為該試劑的批內(nèi)C (一般在1520%)；⑵CO177。五、灰區(qū)的設(shè)置通常情況下，ELISA定性實(shí)驗(yàn)以“陽性”和“陰性”來報告結(jié)果，兩者間有一條分界線被稱為“陽性判斷值”（cutoff alue，CO值），這是定性免疫測定結(jié)果報告的依據(jù)。雙波長測定能去除背景的干擾，一般不設(shè)空白孔，否則會出現(xiàn)吸光度值為負(fù)值的現(xiàn)象。TMB的終止液有多種，疊氮鈉和十二烷基硫酸鈉（SDS）等酶抑制劑均可使反應(yīng)終止，各類酸性終止液則將藍(lán)色轉(zhuǎn)變成黃色。TMB顯色體系的A液和B液可在使用前先混合然后用排槍加入反應(yīng)孔中，這樣既節(jié)省人力又縮短了操作時差對結(jié)果的影響。另外有三方面必須注意：一是在使用洗板機(jī)洗板時，通常在上機(jī)前應(yīng)先將反應(yīng)液棄去并用流水快速沖洗1遍，避免因反應(yīng)液對洗板機(jī)管道污染而造成的交叉污染和背景顏色加深，但對于粘性大的稀釋液或反應(yīng)液而言，則需直接上機(jī)洗滌，并增加洗板后清水沖洗管路的次數(shù)；二是對于兩步法而言第一步洗滌次數(shù)不宜太多，否則將降低結(jié)果的吸光度值。無論洗板方式如何，在向板孔內(nèi)注液時應(yīng)當(dāng)避免氣泡殘留孔內(nèi)，否則會因洗滌液難以進(jìn)入孔中而影響洗滌效果。洗滌是ELISA測定過程中決定實(shí)驗(yàn)成敗的一個關(guān)鍵步驟。為避免蒸發(fā)，板上應(yīng)加蓋或用塑料貼封紙或保鮮膜覆蓋板孔，此時可讓反應(yīng)板漂浮在水面上。溫育的方式有溫箱法、微波輻射法、水浴法等，其中水浴法能較好解決因受熱不均衡所致的周圍孔與中央孔結(jié)果的吸光度差異（這種現(xiàn)象被稱為“邊緣效應(yīng)”）。37℃是實(shí)驗(yàn)室中常用的溫育溫度，也是大多數(shù)抗原抗體結(jié)合的最適反應(yīng)溫度。另外有些項(xiàng)目在檢測前需要稀釋以減低非特異性反應(yīng)，但稀釋的方式非常重要，如果采用手工稀釋則容易因操作者個體差異而產(chǎn)生不一致的結(jié)果，尤其是吸光度處于臨界值附近的標(biāo)本，因此最佳的方式是采用振蕩器混勻。加樣時速度不可太快，避免將標(biāo)本加在孔壁上部 ，并注意不要濺出或產(chǎn)生氣泡。ELISA操作步驟復(fù)雜，操作不當(dāng)將引起較大的誤差。 標(biāo)本的反復(fù)凍融會因其所產(chǎn)生的機(jī)械剪切力對標(biāo)本中的蛋白等分子產(chǎn)生破壞作用，使抗體效價跌落從而引起假陰性結(jié)果，所以測抗體的血清標(biāo)本如需保存作多次檢測，宜少量分裝凍存。通常情況下血清標(biāo)本可在2～8℃下保存l周，冷凍保存時間會更長，但對于抗體或抗原含量低的標(biāo)本而言，則可能會因抗體掉價、抗原分解而出現(xiàn)假陰性結(jié)果。 標(biāo)本的采集及血清分離要注意盡量避免細(xì)菌污染。其中外源性干擾因素是我們在檢測過程中可以避免也是必須避免的因素，而避免內(nèi)源性因素的干擾則主要通過選擇合適的試劑盒。嚴(yán)格執(zhí)行這一標(biāo)準(zhǔn)可以避免因試劑批號改變而重新建立質(zhì)控體系及重新評估試劑的復(fù)雜過程，并且能夠保證結(jié)果的穩(wěn)定性；對于效期短、使用率低的試劑，應(yīng)當(dāng)小量分裝，每次使用則取分裝部分即可，避免反復(fù)凍融造成試劑的失