植物細胞工程中國藥科大學生物工程所有-全文預覽
【正文】 . 細胞工程技術(shù) 進行 遺傳重組 的 材料 ， 細胞融合和基因轉(zhuǎn)移 必需在原生質(zhì)體上進行。 ? Percoll一種包有乙烯吡咯烷酮的硅膠顆粒。原生質(zhì)體在良好的培養(yǎng)基上生長分裂，細胞壁再生，形成愈傷組織，誘導愈傷組織分化，長出莖、葉，根而形成植株。 ?花藥培養(yǎng)的基本程序是： ? 外植體 (花蕾 )選擇預處理 — 花蕾消毒 — 取花藥 — 接種 — 誘導培養(yǎng)— 分化培養(yǎng) 的培養(yǎng) （ 花藥 培養(yǎng)） ?愈傷組織，為 脫分化細胞 ，具再分化的能力，可培養(yǎng)用于 次生代謝物的生產(chǎn) ，或 再生為植株 。 六、 植物細胞的 培養(yǎng)技術(shù) 的培養(yǎng) ?（ 1） 看護培養(yǎng)法 （ nurse culture）：在單細胞的生長環(huán)境里加入愈傷組織同時培養(yǎng)。錐形瓶中培養(yǎng)基的量約為錐形瓶容量的 1/5～ 1/4。 混合 將融化的瓊脂和母液充分混合，用蒸餾水定容到1000ml，來回混合幾次。 五、 植物細胞 培養(yǎng)基 培養(yǎng)基的配制 計量 根據(jù)配制培養(yǎng)基的量和母液的濃度計算需要吸取母液的量，計算公式：吸取量 ml=培養(yǎng)基中物質(zhì)的含量（ mg/L） 1000ml/母液濃度（ mg/L）。 注意： 所有母液都要貼上標簽，注明名稱、配制倍數(shù)、日期，所有的母液都應保存在 0~4℃ 冰箱中，若母液出現(xiàn)沉淀或霉團則不能繼續(xù)使用。 植物生長調(diào)節(jié)劑母液配制 一般植物生長調(diào)節(jié)劑母液的配制的終濃度以 為好，需要注意的是： （１）配制生長素類，例如 IAA、 NAA、 、 IBA，應先用少量 95%乙醇或無水乙醇充分溶解，或者用1mol/L的 NaOH溶解，然后用蒸餾水定容到一定的濃度。培養(yǎng)基中的有機成分原則上應分別單獨配制。配制培養(yǎng)基時，配制 1L取此液 10ml。配制培養(yǎng)基時，每配制 1L培養(yǎng)基，取微量 Ⅰ 10ml，微量 Ⅱ １ ml 鐵鹽母液的配制 鐵鹽不是都需要單獨配成母液，如檸檬酸鐵，只需和大量元素一起配成母液即可。微量元素用量較少，特別是 CuSO42H2O時，蒸餾水需加熱沸騰，除去水中的 CO2，以防沉淀。為避免此現(xiàn)象發(fā)生，母液配制時要用純度高的重蒸餾水溶解，藥品采用等級較高的分析純，各種化學藥品必須先以少量重蒸餾水使其充分溶解后才能混合，混合時應注意先后順序。后用蒸餾水定容到 1000ml的容量瓶中，即為 10倍的大量元素母液。 四、植物細胞 營養(yǎng)要求 A B A： BA(0mg/L) ，芽（減少），根（增多）愈傷組織（一定量） B： BA()，芽（適量），根（適量）愈傷組織（一定量） A： NAA 0mg/L，芽（少），根（無） B： NAA ，芽（少），根（無），愈傷組織（少量） C： NAA ，芽（少），根（多），愈傷組織（一定量 A B C 常用培養(yǎng)基 ?MS、 N B RM196 KM8p等。 （ 3）植物細胞好氣，培養(yǎng)過程 需供氣及攪拌 ， （ 4）植物細胞較微生物細胞大得多，纖維素細胞壁，細胞壁脆弱，抗剪切能力小，傳統(tǒng)的攪拌式反應器極易損傷細胞壁 三、植物細胞的培養(yǎng)特點 ?（ 5）具有群體效應、無錨定依賴性及接觸抑制性； ?（ 6）培養(yǎng)細胞產(chǎn)物滯留于細胞內(nèi)，且產(chǎn)量較低； ?（ 7）培養(yǎng)過程具有結(jié)構(gòu)與功能全能性。細胞數(shù)、 DNA和蛋白質(zhì)濃度增加，有絲分裂活性、 RNA含量和蛋白質(zhì)合成能力減少； ?對數(shù)期 ： 介于最大生長率和蛋白質(zhì)合成完全停止期之間。 ? 已分化細胞要表現(xiàn) 全能性 ，先要脫分化成 分生細胞 ，后再分化形成胚胎發(fā)育成植株 ? 脫分化條件： 創(chuàng)傷和外源激素 。 ? 遺傳操作技術(shù) 改變植物或植物細胞的原有性狀和功能 ，獲得具有優(yōu)良性狀的植株或植物細胞，生產(chǎn)有藥用價值的次生代謝產(chǎn)物。 White、 Gautheret、 Nobecourt 等科學家被譽為植物組織培養(yǎng)的奠基人。 19371938年， Gautheret 在 1934年培養(yǎng)山毛柳、黑楊成功獲得愈傷組織的基礎上，在培養(yǎng)柳樹的培養(yǎng)基中，加入 IAA 和 B族維生素等，使形成層的生長大為增加。 1925年， Laibach 進行亞麻種間雜種幼胚培養(yǎng)，成功地得到了雜種植物。 成熟 發(fā)芽 常規(guī)：幼胚 ―→ 種子 ―→ 植物 培養(yǎng) 組織培養(yǎng)： 幼胚 ―→ 植株 1922年， Knudson 對蘭花幼胚進行培養(yǎng)獲得幼苗，克服了蘭花種子發(fā)芽難的困難
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