【正文】 感激之情吧。 快樂是人的一種自然的身心狀態(tài)；我們只要去相信快樂，讓自己感受快樂。當你讓別人感覺更好時，你自己也會感覺更好。 人生成功第 8課 加入到微笑者和贊美者的行列來 當你對別人，別人也會對你報以，你自然會感覺很棒。不要忘記駐足聞聞花香。毅力就是經(jīng)歷考驗和過失的成功。 毅力并不總是意味著永遠堅持做同一件事。 人生成功第 6課 毅力無法替代 世界上沒有任何東西可以替代毅力。然而，對我們大多數(shù)人來說，這些憧憬在日常生活的成規(guī)和挫敗中已經(jīng)變得如此渺茫，以到于我們甚至不再努力去實現(xiàn)它們。我們可以感到自己很棒，也可以感到自己很差勁。 人生成功第 4課 沒有人可以使你感到自卑 我選擇自我感覺良好，這樣我能更加開放地學習。 現(xiàn)在我知道，靈魂倍受煎熬的時刻，也正是生命中最多選擇與機會的時刻。 人生成功第 3課 在困境中尋找成功的希望 逆境是一所最好的學校。你將熱血沸騰，你會頭腦清醒。 多看，多聽，讓你的頭腦保持活躍。 我們從未停止學習，總會有新的，有趣的東西等待我們?nèi)グl(fā)現(xiàn)。 ? 找回迷失的生命 ? 死亡也許是免費的 ─ 但是，卻要付出生命的代價?！? 不管你是否察覺，生命都一直在前進。 ? 正是道盡了人生如寄，轉(zhuǎn)眼即逝的惶恐。 ? 人生太短，聰明太晚 (5) ? 記?。? ? 給活人送一朵鮮花，強過給死人送貴重的花圈，每個人的生命都有盡頭，許多人經(jīng)常在生命即將結(jié)束時，才發(fā)現(xiàn)自己還有很多事沒有做，有許多話來不及說，這實在是人生最大的遺憾。這些人早上醒來時，原本預期過的是另一個平凡無奇的日子，沒想到一個意料之外的事；交通意外、腦溢血、心臟病發(fā)作等等。許多人認為必須等到某時或某事完成之后再采取行動。這突如其來的事故，實在叫人難以接受，但是死亡的到來不總是如此。除此之 外，曾經(jīng)非常經(jīng)典的 ? 附贈人生心語 ? 人生太短，聰明太晚 ? 人生太短，聰明太晚 (1) ? 我們都老得太快 卻聰明得太遲 ? 把錢省下來，等待退休后再去享受 ? 結(jié)果退休后，因為年紀大，身體差，行動不方便，哪里也去不成。但對于筆者 所說的高分辨率未必是好事會有所懷疑。 用戶在選機過程中切勿只關注一個硬件參數(shù)，這樣很可能并不能買到一款理想的機型，就算買的手機主頻再高，運行內(nèi)存低的話仍然無法同時運行數(shù)個程 序、機身內(nèi)存小的話則無法把太多的軟件安裝到機器上，這對整機耗電和運行速度方面都有所影響、而廠商優(yōu)化更是決定著一部手機的穩(wěn)定性和部分運行速度。這在選購手機的時候也同樣適用。那么，谷歌不能一腳把開放踢開，他現(xiàn)在還需要為這種名聲買單。利潤空間的微薄，導致合作伙伴生存環(huán)境惡劣。經(jīng)濟觀察報報道，國內(nèi)第一家生產(chǎn)基于 Android平臺手機的設計公司創(chuàng)楊通信，近日已經(jīng)被迫出售。如果過度開放的政策是草率結(jié)婚，那么草率的封閉就是草率離婚。 粗看之下，谷歌認識到自己的錯誤?；靵y的生態(tài)系統(tǒng)表現(xiàn)在用戶手機上，就是應用程序的混亂和粗燥。 用戶對谷歌手機的態(tài)度從開始的好奇、后來的猶豫，變成強烈的批評。市場研究公司尼爾森最近公布的數(shù)據(jù)顯示，在通過 Verizon Wireless、 ATamp。這位朋友后來還是離婚了，大家一致認為她的行為很理性。當細胞缺乏氨基酸時產(chǎn)生 ppGpp，可在很大范圍內(nèi)做出應急反應，如抑制核糖體和其他大分子的合成，活化某些氨基酸操縱子的轉(zhuǎn)錄表達，抑制與氨基酸運轉(zhuǎn)無關的轉(zhuǎn)運系統(tǒng)，活化蛋白水解酶等。用甲醛處理 RNA可以增加聚合酶的產(chǎn)量，這說明 RNA的高級結(jié)構(gòu)對基因表達調(diào)控的可能性。用同位素標記分析 RNA噬菌體幾種蛋白質(zhì)的起譯過程，發(fā)現(xiàn)外殼蛋白起譯頻率比合成酶至少要高 3倍。這種與 ρ蛋白無關的表達調(diào)控，已被證實是在翻譯水平上的調(diào)控。 ? 許多調(diào)控蛋白如 LacI、 AraC、 TrpR等在細胞內(nèi)含量也很低，編碼這些蛋白的基因中密碼子的使用頻率和 dnaG相似，而明顯不同于非調(diào)節(jié)蛋白。在 RNA聚合酶活性較低時，操縱子的轉(zhuǎn)錄由弱啟動子 P2控制；而RNA聚合酶活性較高時，就開始利用強啟動子 P1。 II. 核糖體蛋白 SI操縱子 核糖體蛋白 SI操縱子（ rpsA），它也受應急反應調(diào)節(jié)。雖然尚不清楚氮源缺乏時的信號是什么，但它很可能也是一個正效應子。在產(chǎn)氣克氏菌中，以上基因構(gòu)成兩個轉(zhuǎn)錄單位， hutI、 hutG、 hutC和 hutU、 hutH分別被轉(zhuǎn)錄合成兩條 mRNA長鏈。 3. 組氨酸操縱子 ? 與 His降解代謝有關的兩組酶類被稱為 hut酶(histidine utilizing enzyme)，控制這些酶合成的操縱子被稱為 hut operon。這樣，阿拉伯糖的誘導作用就可以解釋為阿拉伯糖與Pr的結(jié)合，使 Pr離開它的結(jié)合位點，然后，產(chǎn)生大量的 Pi，并與啟動子結(jié)合。在標準的遺傳學圖譜上， araBAD基因簇從啟動子 PBAD開始向左進行轉(zhuǎn)錄，而 araC基因則是從 Pc向右轉(zhuǎn)錄。 2． 阿拉伯糖操縱子 ? 阿拉伯糖 (arabinose)是另一個可以為代謝提供碳源的五碳糖。生長過程中的所有時間里細胞必須能夠合成差向異構(gòu)酶。從S2起始的轉(zhuǎn)錄則完全依賴于葡萄糖，高水平的 cAMPCAP能抑制由這個啟動子起始的轉(zhuǎn)錄?，F(xiàn)已分離到一些突變株，其中一類突變株能在不含葡萄糖的培養(yǎng)基中高水平合成半乳糖代謝酶類（ gal結(jié)構(gòu)基因高效表達）；而另一類突變株中 gal基因的表達完全依賴于葡萄糖，培養(yǎng)基中如無葡萄糖存在，這些細菌的 gal基因不表達，不合成半乳糖代謝酶類。 這 3個酶的作用是使半乳糖變成葡萄糖 1磷酸。或者，弱化子系統(tǒng)主要是對外源色氨酸濃度做出反應。 ? 另有一個缺失前導區(qū)及 D基因的突變體（ trpΔLD102），該細菌在有色氨酸的培養(yǎng)基中仍有很高的色氨酸合成酶活性。 ? 當培養(yǎng)基中色氨酸濃度較高時，核糖體可順利通過兩個相鄰的色氨酸密碼子，在 4區(qū)被轉(zhuǎn)錄之前就到達 2區(qū)，使 23區(qū)不能配對， 34區(qū)自由配對形成基一環(huán)終止子結(jié)構(gòu)，轉(zhuǎn)錄被終止， trp操縱子被關閉。 ? 分析前導肽序列，發(fā)現(xiàn)它包括起始密碼子 AUG和終止密碼子 UGA，編碼了一個 14個氨基酸的多肽。這個細微調(diào)控是通過轉(zhuǎn)錄達到第一個結(jié)構(gòu)基因之前的過早終止來實現(xiàn)的，由色氨酸的濃度來調(diào)節(jié)這種過早終止的頻率。除非培養(yǎng)基中有色氨酸，否則這個輔阻遏蛋白不會與操縱區(qū)結(jié)合。 trp操縱子中產(chǎn)生阻遏物的基因是 trpR，該基因距 trp基因簇很遠，后者在大腸桿菌染色體圖上 25min處，而前者則位于 90min處。由于 trp體系參與生物合成而不是降解，它不受葡萄糖或 cAMPCAP的調(diào)控。 ① lac mRNA可能與翻譯過程中的核糖體相脫離，從而終止蛋白質(zhì)鏈的翻譯。 6. lac操縱子 DNA的調(diào)控區(qū)域 lac P（啟動子區(qū)）從 I基因結(jié)束到mRNA轉(zhuǎn)錄起始位點止，共長 82bp（ 82～+1） O區(qū)就是阻遏物結(jié)合區(qū)，位于 P區(qū)后半部分和轉(zhuǎn)錄起始區(qū)（ 7～ +28），該區(qū)序列有對稱性，其對稱中心點在 +11位。如果將細菌放在缺乏碳源的培養(yǎng)基中，細胞內(nèi) cAMP濃度就很高；若在含葡萄糖的培養(yǎng)基中培養(yǎng)，細菌中的 cAMP濃度就會很低；如果將細菌置于甘油或乳糖等不進行糖酵解的碳源培養(yǎng)基中，細菌中 cAMP的濃度也會很高。 3. Lac操縱子的本底水平表達 ? 因為誘導物需要穿過細胞膜才能與阻遏物結(jié)合，而運轉(zhuǎn)誘導物需要透過酶。 ③ 操縱基因是 DNA上的一小段序列（僅為 26bp），是阻遏物的結(jié)合位點。O決定相鄰 Z基因的產(chǎn)物是誘導型合成還是永久型合成， O區(qū)域稱為操縱基因。 I突變體由于不能產(chǎn)生阻遏物，使細胞成為 lac永久表達型。 ? 已經(jīng)分離在有誘導物或沒有誘導物的情況下都能產(chǎn)生 lacmRNA的突變體，這種失去調(diào)節(jié)能力的突變體稱為永久型突變體，為分兩類： I型和 O型。如果在培養(yǎng)基中加入乳糖，酶的濃度很快達到細胞總蛋白量的 6%或 7%，每個細胞中可有超過 105個酶分子。 β半乳糖苷酶是一種 β半乳糖苷鍵的專一性酶，除能將乳糖水解成葡萄糖和半乳糖外，還能水解其他 β半乳糖苷（如苯基半乳糖苷）。 一、 乳糖操縱子的調(diào)控模式 ? 大腸桿菌乳糖操縱子 (lactose operon)包括 3個結(jié)構(gòu)基因： Z、 Y和 A，以及啟動子、控制子和阻遏子等。 ? 科學家把這個從 DNA到蛋白質(zhì)的過程稱為基因表達 (gene expression)，對這個過程的調(diào)節(jié)就稱為基因表達調(diào)控 (gene regulation或 gene control)。 ? 一個體系在需要時被打開，不需要時被關閉。估計正常情況下，可帶有 107個蛋白質(zhì)，平均每個基因產(chǎn)生 3000多個蛋白質(zhì)分子。第六講 原核基因表達調(diào)控 ? 緒論 ? 一、 乳糖操縱子的調(diào)控模式 ? 二、 色氨酸操縱子的調(diào)控模式 ? 三、 其他操縱子的調(diào)控機制 ? 四、 原核生物種的轉(zhuǎn)錄后調(diào)控 緒論 ? 原核生物和單細胞真核生物直接暴露在變幻莫測的環(huán)境中，食物供應毫無保障，只有能根據(jù)環(huán)境條件的改變合成各種不同的蛋白質(zhì)，使代謝過程適應環(huán)境的變化，才能維持自身的生存和繁衍。 ? 一個大腸桿菌細胞中約有 25003000個基因。而象半乳糖苷酶等誘導酶，其含量可少至每細胞僅 15個分子。所謂 “關 ”實際的意思是基因表達量特別低，很難甚至無法檢測。在真核生物尤其是高等真核生物中，激素水平 (hormone level)和發(fā)育階段(developmental stage)是基因表達調(diào)控的最主要手段，營養(yǎng)和環(huán)境因素的影響力大為下降。轉(zhuǎn)錄的調(diào)控是啟動區(qū)和操縱區(qū)進行的 . ? Z編碼 β半乳糖苷酶； Y編碼 β半乳糖苷透過酶；A編碼 β半乳糖苷乙?；D(zhuǎn)移酶。 ? 1． 酶的誘導 lac體系受調(diào)控的證據(jù)在不含乳糖及 β半乳糖苷的培養(yǎng)基中， lac+基因型每個大腸桿功細胞內(nèi)大約只有 12個酶分子。說明酶的合成不是由前體轉(zhuǎn)化而來的，而是加入誘導物后新合成的。研究發(fā)現(xiàn)， I基因是一個產(chǎn)生阻遏物的調(diào)節(jié)基因，其產(chǎn)物使體系關閉。通過這些觀察， Jacob和 Monod推斷 Oc突變代表 DNA鏈上的一個位點或一個非編碼區(qū)域，而不是一個基因，因為可編碼的基因具有互補性，而 Oc沒有這一特性。 ② 這個 mRNA分子的啟動子緊接著 O區(qū)，而位于 I與O之間的啟動子區(qū)（ P），不能單獨起動合成 β半乳糖苷酶和透過酶的生理過程。當有誘導物存在時，操縱基因區(qū)沒有被阻遏物占據(jù)，所以啟動子能夠順利起始 mRNA的合成。 5. cAMP與代謝物激活蛋白 ? 當葡萄糖和乳糖同時存在于培養(yǎng)基中時，lac啟動子表達受阻，沒有 β半乳糖苷酶活性；當葡萄糖消耗完以后（圖中箭頭處），細胞內(nèi) cAMP濃度增加， β半乳糖苷酶活性被誘導，一度停止生長的細胞又恢復分裂。 Dominant negative（ Transdominant） lacId，只要有這個 環(huán) 的亞基存在， lacI+基因產(chǎn)物（阻遏物）無法與 O區(qū)相結(jié)合 lac operon得到表達。不同的酶在數(shù)量上的差異是由于在翻譯水平上受到調(diào)節(jié)所致。 二、 色氨酸操縱子的調(diào)控模式 ? 色氨酸操縱子 (tryptophane operon)負責色氨酸的生物合成，當培養(yǎng)基中有足夠的色氨酸時，這個操縱子自動關閉，缺乏色氨酸時操縱子被打開， trp基因表達，色氨酸或與其代謝有關的某種物質(zhì)在阻遏過程（而不是誘導過程）中起作用。 ? trpE基因是第一個被翻譯的基因，和 trpL和 trpa（不是 trpA）。 1． trp操縱子的阻遏系統(tǒng) ? trpR基因突變常引起 trp mRNA的永久型合成，該基因產(chǎn)物因此被稱為輔阻遏蛋白 (aporepressor)。 trp操縱子中對應于色氨酸生物合成的還有另一個系統(tǒng)進行細調(diào)控，指示已經(jīng)啟動的轉(zhuǎn)錄是否繼續(xù)下去。因為轉(zhuǎn)錄終止發(fā)生在這一區(qū)域，并且這種終止是被調(diào)節(jié)的，這個區(qū)域就被稱為弱化子。 ? 當培養(yǎng)基中色氨酸的濃度很低時，負載有色氨酸的tRNATrp也就少，這樣翻譯通過兩個相鄰色氨酸密碼子的速度就會很慢，當 4區(qū)被轉(zhuǎn)錄完成時，核糖體才進行到 1區(qū)（或停留在兩個相鄰的 trp密碼子處），這時的前導區(qū)結(jié)構(gòu)是 23配對，不形成 34配對的終止結(jié)構(gòu)，所以轉(zhuǎn)錄可繼續(xù)進行，直到將 trp操縱子中的結(jié)構(gòu)基因全部轉(zhuǎn)錄。 42℃ 時，突變體中 Trp操縱子的表達不受色氨酸濃度的調(diào)控。 ? 細菌中為什么要有弱化子系統(tǒng)呢？ 一種可能是阻遏物從有活性向無活性的轉(zhuǎn)變速度極低，需要有一個能更快地做出瓜的系統(tǒng)，以保持培養(yǎng)基中適當?shù)纳彼崴健? ? 那