【正文】 濾紙片覆蓋，如某濾紙 片周圍有微生物生長圈，則為該營養(yǎng)物的營養(yǎng)缺陷 型。 ? A．夾層培養(yǎng)法（ “ 三明治 ” 狀） ?③ 步 檢出缺陷型 現(xiàn)舉出四種方法： 小菌落是第二次長起來的（營養(yǎng)缺陷型） ? B．限量補充培養(yǎng)法 在基本培養(yǎng)基上，加微量的天然成分（不同于補充培養(yǎng)基），營養(yǎng)缺陷型形成微菌落，而野生型形成正常大小的菌落。 方法：將誘變后的孢子培養(yǎng)到含制霉菌素的基本培 養(yǎng)基上，基本培養(yǎng)基長出菌絲者為營養(yǎng)缺陷型。 ? A．抗生素法（最常用）。該型非自身合成。 一般地，完全培養(yǎng)基是天然或半人工合成的。 ⑦ 設(shè)計或創(chuàng)造高效篩選方案。 ⑤ 充分利用復(fù)合處理的協(xié)同效應(yīng)。 目的：使每個細胞均勻接觸誘變劑并防止長出不純 菌落。 。（無目的的誘變，有目的的篩選） 誘變育種的基本環(huán)節(jié) 出發(fā)菌株 計算出 誘變 大多死亡 少數(shù)存活 存活率 多數(shù)未變 少數(shù)突變 突變率 多數(shù)負變 少數(shù)正變 正變率 多數(shù)幅度小 少數(shù)幅度大 高產(chǎn)率 投產(chǎn)率 多數(shù)不宜投產(chǎn) 少數(shù)適宜投產(chǎn) 誘變育種應(yīng)考慮的幾個原則： ? 選擇簡便有效的誘變劑，如紫外線、激光和離子束，烷化劑、堿基類似物等。 2)定向培育優(yōu)良菌株。 機理： 誘變形成的嘧啶二聚體在暗處結(jié)合光激活酶， 在有可見光的情況下，此酶吸收光能，解離嘧啶二聚體。 ? DNA復(fù)制過程中堿基配對錯誤引起 據(jù)統(tǒng)計， DNA鏈在每次復(fù)制中每個堿基對錯配頻率是1071011， 這樣一個基因的自發(fā)突變幾率約為 106。 總之，原核、真核微生物都存在染色體間畸變。 2〉 染色體間畸變：非同源染色體間的易位。 （ 3）染色體畸變 包括染色體結(jié)構(gòu)的缺失、重復(fù)、插入、易位、倒位 幾種情況，也包括染色體數(shù)目的變化。 ?堿基的置換 ?移碼突變 ?染色體畸變 （ 1） 堿基置換 它只涉及一對堿基被另一對堿基所置換，屬 于典型的點突變。 影印培養(yǎng)試驗 原始敏 感菌種 影印培養(yǎng) 無藥 培養(yǎng)基 含藥 培養(yǎng)基 結(jié)論： 對鏈霉素敏感的 K12細胞在未接觸過任何一點鏈霉素的條件下，由 1—— 2—— 4—— 5—— 6—— 8—— 9——10—— 12…… 的移種可篩選出大量抗鏈霉素的突變株。由突變型基因返回到原始的野生型基因，稱回復(fù)突變。 ④ 獨立性：某基因的突變率不受它種基因突變率的影響。 雙重或多重突變的幾率是各個基因突變幾率的乘積。若產(chǎn)量顯著高于原始菌株者稱正突變，反之則稱負突變。例如： S形菌落突變?yōu)?R形菌落，鞭毛有無或莢膜有無的突變。如一些抗生素抗藥性菌株。 第二節(jié)基因突變和誘變育種 一、基因突變 （一）突變類型 根據(jù)突變的菌株能否在 選擇性培養(yǎng)基 上 加以鑒別，可分為：選擇性突變和非選擇性 突變兩大類。 ⑥ 其他質(zhì)粒：降解性質(zhì)粒只存在于假單胞菌屬 ， 能夠編碼可降解復(fù)雜物質(zhì)的酶類 。 ③ Col質(zhì)粒：又稱大腸桿菌素質(zhì)粒 ， 許多細菌都能產(chǎn)生使其他原核生物抑制或致死的蛋白質(zhì)類細菌毒素 。 如假單胞菌屬 、 鏈球菌屬 。有些質(zhì)粒具有與核染色體 發(fā)生整合或脫離的功能，稱 附加體 .如 F因 子。 植物病毒的重建實驗 TMV HRV HRV TMV 原始株 拆開 重建 感染 分離純化 （一）七個水平 ? 細胞水平 ? 細胞核水平 ? 染色體水平 ? 核酸水平 ? 基因水平 ? 密碼子水平 ? 核苷酸水平 二、 遺傳物質(zhì)存在的部位和方式 質(zhì)粒 ：凡游離于原核生物核基因組以外，具有獨立復(fù)制能力的小型共價閉合環(huán)狀的 dsDNA分子。把 TMV放在水和苯酚中震蕩，可將病毒的蛋白質(zhì)外殼和 RNA分開，分開的蛋白質(zhì)外殼和RNA分子又能重新組合成具有感染力的完整病毒粒子。其中 Avery實驗進一步證明轉(zhuǎn)化因子 是 DNA。第八章 微生物的遺傳變異和育種 ? 第一節(jié) 遺傳變異的物質(zhì)基礎(chǔ) ? 第二節(jié) 基因突變和誘變育種 ? 第三節(jié) 基因重組 ? 第四節(jié) 基因工程 ? 第五節(jié) 菌種的衰退、復(fù)壯和保藏 第一節(jié) 遺傳變異的物質(zhì)基礎(chǔ) 一、 三個 經(jīng)典 實驗 （一） 經(jīng)典轉(zhuǎn)化試驗 F． Griffith（ 1928年） 肺炎雙球菌，可使人患肺炎，也可使小 白鼠患敗血癥而死亡。 F． Griffith作了 3組實驗如下圖 后來，有三位科學家將第三組實驗進行如下改進：從高溫滅活的 S型細菌中提取幾種細胞成分 (如DNA、蛋白質(zhì)、莢膜多糖等 )分別進行轉(zhuǎn)化實驗 —— Avery實驗，如圖示： 以上實驗說明：高溫滅活的 S型肺炎球菌的細胞內(nèi)存在一種物質(zhì)，能以某種方式進入 R型細胞使其表達出莢膜性狀?？稍跓煵萆弦鸩“?。 1956年， Fraenkelconrat利用這兩株植物病毒的核酸和蛋白質(zhì)的拆、合及相互對換進行實驗如下圖。 （二） 原核生物的質(zhì)粒 e)少量質(zhì)粒可在不同菌株間轉(zhuǎn)移，如： F 因子或 R因子等。 ① F因子：又稱性因子 ， 是 的質(zhì)粒 ， 當然除 ， 亦發(fā)現(xiàn)其他菌也有此質(zhì)粒 。 最初是在痢疾桿菌中提取出來 。 ⑤ 巨大質(zhì)粒：比一般質(zhì)粒大幾十倍至幾百倍 。 突變株：即野生型經(jīng)突變后形成的帶有新性狀的菌株。 ② 抗性突變型：由于基因突變，野生型菌株產(chǎn)生了對某種理化因子抗性的突變類型。 —— 非選擇性突變 ④ 形態(tài)突變型：指個體形態(tài)或群體形態(tài)因突變而與野生型不同。 ⑥ 產(chǎn)量突變型：通過基因突變而獲得在代謝產(chǎn)物產(chǎn)量上明顯有別于原始菌株的突變株。 突變是獨立發(fā)生的，互相不影響，同一細胞中同時發(fā)生兩個或兩個以上突變的幾率極低。 ③ 稀有性：一般突變尤其是自發(fā)突變，幾率極?。◣茁蕿?06109）。 ⑦ 可逆性：由野生型基因變異為突變型基因，稱正向變異。 變量試驗 大腸桿菌稀釋培養(yǎng)物