【正文】 07 菌株 2種菌株在搖床（ 28℃， 180rpm）中培養(yǎng)七天。代替原培養(yǎng)基中的 2%淀粉，制作培養(yǎng)基，通過高溫滅菌，冷卻至常溫，并接種 F02菌株；F07 菌株 2種菌株在搖床（ 28℃， 180rpm）中培養(yǎng)七天。 活性測定：取出各個(gè)培養(yǎng)基中的對應(yīng)菌液，以半葉枯斑法，采用健康，長勢基本一樣的心葉煙做活性測定。 D值：在 ELISA 檢測儀上，于 450nm(若以 ABTS 顯色，則 410nm)處，以空白對照孔調(diào)零后測各孔 O 4. 加底物液顯色：于各反應(yīng)孔中加入臨時(shí)配制的 TMB底物溶液 ， 37℃10～ 30 分鐘。然后洗滌。在每個(gè)聚苯乙烯板的反應(yīng)孔中加 ， 4℃過夜。在實(shí)際應(yīng)用中，通過不同的設(shè)計(jì)，具體的方法步驟可有多種。 TMV 病毒液制作：取癥狀明顯感染 TMV 病毒的煙草葉片，并稱取其質(zhì)量，將病毒葉放入研缽中，加入少量的石英砂和 PBS（ Phosphate Buffered Saline ） 進(jìn)行研磨，研磨大概 30分鐘，按照 1g 病毒葉配 100mLpbs 配置病毒液，完成后再加入適量的石英砂（有利于在接種的時(shí)候損傷葉片，從而更好的使煙草葉片感染 TMV），完成后將病毒液放入冰箱保存。 7H2O ；NaCl； FeSO4利用最優(yōu)碳源，氮源對培養(yǎng)條件進(jìn)行優(yōu)化實(shí)驗(yàn)。 微生物發(fā)酵的生產(chǎn)水平最基本的是取決于生產(chǎn)菌種的性能 , 但有了優(yōu)良的菌種之后 , 還需要有最佳的環(huán)境條件即發(fā)酵工藝加以配合 , 才能使其生產(chǎn)能力充分表現(xiàn)出來 。從而在未來的抗病毒，抗真菌，細(xì)菌的舞臺(tái)上，更多的需要依靠生物菌來防治病害，病毒等，這其中最主要的就是放線菌。 但是 化學(xué)農(nóng)藥的大量使用和長期延續(xù)，已給人類帶來了不利的影響，它不僅嚴(yán)重破壞了人們賴以生存的自然環(huán)境，影響了正常的生態(tài)循環(huán)，還危及到人類的健康。 目前臨床上常用的藥物主要有如下幾種：抗流感病毒及呼吸道病毒藥物：抗皰疹病毒藥物：抗巨細(xì)胞病毒藥物；抗肝炎病毒藥物：抗人類免疫缺陷病毒藥物。黃酮類化合物泛指具有 15個(gè)碳原子 (C6C3 一 C6)的多元酚化合物，廣泛存在于自然界中。目前研究發(fā)現(xiàn)的抗病毒活性物質(zhì)，既有生物小分子的次生代謝產(chǎn)物，也有大分子的多糖、核酸和蛋白質(zhì)等。迄今為止，幾乎沒有能有效地 從感染病毒的植物上除去病毒的化學(xué)藥劑。其次，農(nóng)業(yè)栽培措施壺于受耕作制度和社會(huì)經(jīng)濟(jì)發(fā)展的限制，在生產(chǎn)中有效的實(shí)施仍有一定難度，使用化學(xué)或生物制劑防治煙草花葉病不失為一種經(jīng)濟(jì)有效的措施。病毒粒子為剛直的長桿狀，長 300hm，直徑 18nm，螺旋對稱結(jié)構(gòu)，有 2130 個(gè)蛋白亞基以右手螺旋排列，螺距為 2． 3nm，負(fù)染色后在電鏡下中央軸槽清晰可見。藍(lán)藻是地球上最早出現(xiàn)的光合自養(yǎng)生物，在長期的演化過程中形成了廣泛的適應(yīng)性。由于植物病毒對寄主細(xì)胞具有絕對寄生性，以及植物缺乏與動(dòng)物類似的免疫代謝系統(tǒng)，使得植物一旦被感染就處于終身受害 的狀態(tài)，這給農(nóng)業(yè)生產(chǎn)帶來相當(dāng)大的破壞。由于植物病毒屬絕對內(nèi)寄生生物，自身無能量代謝系統(tǒng)，對寄主植物細(xì)胞具有高度依賴性，因而植物病毒病的防治一直是植物病害防治中的一大難題。植物病毒病的危害，已經(jīng)遠(yuǎn)遠(yuǎn)超過真菌、細(xì)菌病害，而且近些年來由于全球一體化進(jìn)程的發(fā)展，國際商品貿(mào)易日趨發(fā)達(dá)，農(nóng)產(chǎn)品流通迅速，加快了植物病毒病在世界范圍內(nèi)的傳播。 病毒是一類形態(tài)最小，結(jié)構(gòu)最簡單的細(xì)胞內(nèi)寄生微 生物。病毒沒有細(xì)胞結(jié)構(gòu)，由于沒有實(shí)現(xiàn)新陳代謝所必需的基本系統(tǒng)，所以病毒自身不能復(fù)制。提高鏈霉菌防治植物病害效果的途徑有誘變育種、固定化技術(shù)和改良發(fā)酵工藝等，其目標(biāo)是為了提高目標(biāo)產(chǎn)物的產(chǎn)量和純度，減少副產(chǎn)物，改變生物合成途徑，以獲得高產(chǎn)的新產(chǎn)品。 拮抗放線菌生物防治病害的途徑主要有兩種途徑：一是寄生在植物組織體內(nèi)，誘導(dǎo)植物自身產(chǎn)生抗病性或代謝出一些具有抑菌作用的活性物質(zhì)（抗生素）影響病原菌的新陳代謝過程，從而達(dá)到防病治病的目的；二是在寄主體外利用 。隨著抗生素?cái)?shù)量的不斷增加，從鏈霉菌中篩選到的新抗生素就變得越來越困難，篩選得到的化學(xué)物質(zhì)重復(fù)率非常高。 土壤中存在 各種脅迫壓力 （ 化學(xué) 、 物理和生物的 ）， 而鏈霉菌是靜止生物 ，面對脅迫相對被動(dòng) 。鏈霉菌基因組是目前己知的最大的原核生物基因組，其基因組染色體呈線狀，而且具有復(fù)雜的結(jié)構(gòu)。 鏈霉菌是抗生素產(chǎn)生最豐富最多的放線菌種屬，長期以來一直被開發(fā)各種用途的抗生素，隨著天然產(chǎn)物化學(xué)和病理學(xué)研究的不斷深入，人們從鏈霉菌中逐漸發(fā)現(xiàn)的生物活性物質(zhì)除了抗生素外，還有酶制劑、免疫調(diào)節(jié)物質(zhì)、藥理活性物質(zhì)、抗菌劑、植物生長調(diào)節(jié)劑、殺蟲殺螨和除草劑等多種物質(zhì)?；钚晕镔|(zhì) 。 抗病毒生防菌 F01 菌株發(fā)酵條件優(yōu)化 摘 要 ： 以高氏 1號培養(yǎng)基為基礎(chǔ) , 通過單因素分析和正交試驗(yàn) , 對 抗病毒生防菌 F01菌株 最佳培養(yǎng)基和最優(yōu)培養(yǎng) 、 條件進(jìn)行了研究。 關(guān)鍵詞 ： 抗病 毒生防菌 。孢子不能運(yùn)動(dòng)，外鞘上常有疣、刺或毛發(fā)等狀飾物。 放線菌中以鏈霉菌合成抗生素次生代謝產(chǎn)物的能力最強(qiáng)， 鏈霉菌可產(chǎn)生多種次生代謝產(chǎn)物，包括水解酶與抗生素等物質(zhì)，其在醫(yī)藥、飼料添加劑等領(lǐng)域有廣泛的應(yīng)用，而且在植物保護(hù)方面發(fā)揮了相當(dāng)大的作用。鏈霉菌染色體富含次生代謝基因簇和調(diào)控基因 ,鏈霉菌中某一特定次生代謝途徑相關(guān)的基因通常以基因簇 7VK6MAI的形式存在線狀染色體上 ,鏈霉菌基因組富含次生代謝物合成基因簇 .鏈霉菌基因組同樣富含編碼調(diào)控蛋白的基因 ,鏈霉菌這種基因組構(gòu)成特點(diǎn)與其生存在高度競爭的土壤環(huán)境中相適應(yīng) 。 由于抗生素的廣泛及長期應(yīng)用，細(xì)菌對抗生素的耐藥性問題日益嚴(yán)重，因此迫切要進(jìn)一步發(fā)現(xiàn)和開發(fā)新型、高效 、低毒的抗耐藥菌抗生素。 鏈霉菌是存在于土壤當(dāng)中的一類重要的微生物類群，其可以產(chǎn)生豐富的次生代謝產(chǎn)物，是重要的天然抗生素來源，一些鏈霉菌代謝產(chǎn)生的抗生素類的次生代謝產(chǎn)物可以有效抑制水稻紋枯病的發(fā)生 。由于鏈霉菌防治植物病害時(shí)存在防治效果難以穩(wěn)定、持久等缺點(diǎn)，尋找提高鏈霉菌防治植物病害效果的途徑顯得十分重要。病毒個(gè)體微小，結(jié)構(gòu)簡單。病毒的結(jié)構(gòu)、酶和復(fù)制機(jī)制是抗病毒藥物的作用靶點(diǎn)，所以抗病毒藥物在攻擊病毒的同時(shí)，往往對宿主產(chǎn)生毒性反應(yīng) 。植物病毒種類多、繁殖速率快、傳播途徑廣，并且缺少有效的防治藥劑和應(yīng)對措施，植物病毒病一旦發(fā)生流行，就會(huì)造成嚴(yán)重的損失。 植物病毒病有“植物癌癥”之稱，是農(nóng)業(yè)生產(chǎn)上重要病害之一。煙草花葉病流行年份田間發(fā)病率一般在 3050％，通常受 TMV 侵染的煙草植株體內(nèi)代謝會(huì)受到嚴(yán)重影響，葉片不均勻地褪綠、枯黃，光合速率下降，這使得植株生長矮小，干物質(zhì)積累減少，一般年份減產(chǎn) 2030％，流行年份則毀種甚至絕收，不僅造成煙草的產(chǎn)量損失，而且使煙葉的質(zhì)量嚴(yán)重下降，特別是中上等煙葉比例和內(nèi)在質(zhì)量下降使得煙草花葉病已成為煙葉優(yōu)質(zhì)生產(chǎn)栽培的重大障礙，造成極大的經(jīng)濟(jì)損失，挫傷了煙農(nóng)的生產(chǎn)積極性。天然產(chǎn)物是研究開發(fā)薪藥的重要資源，自 1983～ 1994 年間．約 60％被批準(zhǔn)應(yīng)用的抗癌和抗感染藥物來源于天然產(chǎn)物“’。該屬病毒為正義單鏈RNA(positiveSENSE singlestrandedRNA， +ssRNA)病毒，病毒復(fù)制時(shí)正鏈基因組 RNA 首先復(fù)制出負(fù)鏈 RNA(negmive senseRNA，． RNA)，再以負(fù)鏈 RNA 為模版產(chǎn)生正鏈基因組及亞基因組 RNA。對煙草花葉病 (Tobacco Mosaic Virus，簡稱 TMV)的防治，國內(nèi)外已做了大量的研究，特剃是在植物抗病毒基因研究上取得了一系列進(jìn)展，但是由于 遠(yuǎn)緣雜交的不親和性，使由抗性基因轉(zhuǎn)移翡難度很大。有效地控制病毒的為害是農(nóng)業(yè)生產(chǎn)上的當(dāng)務(wù)之急。自 1925 年Duggur 等從商陸 (phytolacca）上發(fā)現(xiàn)第一個(gè)植物病毒抑制物以來 [14]，陸續(xù)開發(fā)了很多抗病毒制劑，像病毒 A、植病靈、金葉寶等。在如今的抗動(dòng)物病毒活性成分化合物中，主要都是黃酮類相關(guān)的化合物。自從