【正文】 ork: Oxford University Press, 20xx, 171188 3. 應(yīng)用 DNA 微陣列分析卵巢漿液性乳頭狀囊腺癌的基因表達(dá)譜 . 中華婦產(chǎn)科雜志 （待發(fā)） 4. Chang K, Pastan I. Molecular cloning of mesothelin, a differentiation antigen present on mesothelium, mesotheliomas, and ovarian cancers. Proc. Natl. Acad. Sci. USA 1996。文獻(xiàn)檢索未見其國內(nèi)他單位的報(bào)道，參見第五部分所附的省科技情報(bào)所查新報(bào)告 。有的學(xué)者進(jìn)行有關(guān)血清檢測 MSLN 的方法學(xué)研究 [18]。但此次選題與以往不同，我們是對(duì)研究的對(duì)象（卵巢癌）采用了高通量的基因芯片進(jìn)行了侯選目標(biāo)的篩查，在分析卵巢癌基因表達(dá)譜的基礎(chǔ)上，復(fù)習(xí)文獻(xiàn)，奠定了課題立項(xiàng)的客觀性。 ⑹ 初步的研究提示 MSLN 的過度表達(dá)可能會(huì)阻止 CA125 從癌組織釋放，因此，導(dǎo)致癌組織中 CA125 高表達(dá)的卵巢癌患者的血清中的 CA125 不高或正常 [6]。 ⑷ Pastan 等 [5]發(fā)現(xiàn)轉(zhuǎn)染 MSLN 的細(xì)胞較對(duì)照細(xì)胞有更強(qiáng)的黏附力，推測 MSLN 可能與細(xì)胞的黏附有關(guān)。⑵ 同 CA125一樣， MSLN是可分泌的蛋白，血清中可檢測。 ⑶ MSLN 可能影響卵巢癌細(xì)胞的生長和轉(zhuǎn)移方式，與 CA125 有某種功能的關(guān)聯(lián)，二者的相互作用可能與卵巢癌細(xì)胞的生長和增殖、脫落、與腹膜間皮細(xì)胞特異性黏附、種植有關(guān)，最終導(dǎo)致腹腔廣泛轉(zhuǎn)移。目前科學(xué)界公認(rèn)卵巢癌（上皮癌）起源于卵巢表面上皮，而卵巢表面上皮就是分化修飾后的間皮細(xì)胞。 C末端，有跨膜部分和短的胞漿尾。我們檢索了所有與 MSLN 有關(guān)的文獻(xiàn)（ 43 篇），意外地發(fā)現(xiàn)， 20xx 年 3 月最新的研究提示人 CA125 是鼠 MSLN 相應(yīng)的受體，二者可能有某種功能關(guān)聯(lián)。與正常卵巢相比，發(fā)現(xiàn)了 56 條上調(diào)和 23 條下調(diào)的基因，79 條表達(dá)差異的基因中，間皮素（ mesothelin, MSLN）的變化最為顯著，在卵巢癌中顯著上調(diào)表達(dá) [3]。 ③ 15%的晚期卵巢癌 CA125 陰性。臨床實(shí)踐中，由于卵巢位于盆腔深部，一般臨床查體難于直接接觸，早期發(fā)病無特異癥狀，患者通常是有明顯的癥狀后方就診，此時(shí)多已屆臨床晚期，所以尋找有價(jià)值的早期診斷方法是臨床迫切需要的，而 CA125 難以滿足這以要求。 CA125是血清檢測，故簡便、經(jīng)濟(jì)、微創(chuàng)。 CA125 是由單克隆抗體OC125 識(shí)別的一種高分子量的糖蛋白，是近 20 年婦科領(lǐng)域應(yīng)用廣泛的生物標(biāo)記物。純基礎(chǔ)研究，著重結(jié)合國際科學(xué)發(fā)展趨勢(shì)，論述項(xiàng)目的科學(xué)意義；應(yīng)用基礎(chǔ)研究著重結(jié)合學(xué)科前沿，圍繞國民經(jīng)濟(jì)和社會(huì)發(fā)展中的科技問題，論述其研究特色及應(yīng)用前景 ) 90%的卵巢惡性腫瘤是卵巢上皮性癌（以下簡稱卵巢癌）， 是婦科腫瘤領(lǐng)域內(nèi)死亡率最高的疾病， 5年生存率長期徘徊在 30%左右 [1。 (2)將 MSLN 的表達(dá)與 CA125 的表達(dá)相聯(lián)系，試圖發(fā)現(xiàn)其內(nèi)在聯(lián)系，如能達(dá)到預(yù)期的目的，不僅為臨床實(shí)踐提供價(jià)值很高的標(biāo)志物，也將為研究 MSLN 和CA125 的功能開辟新的途徑。因此，本課題擬用分子生物學(xué)和 免疫組織學(xué)技術(shù)，分析 MSLN 在健康婦女血清和臨床各期卵巢癌患者的血清、腹水、組織標(biāo)本中的表達(dá)，探討與 CA125 表達(dá)及定位的關(guān)系、與臨床分期、荷瘤量和疾病進(jìn)展的關(guān)系，總結(jié) MSLN 是否可作為卵巢癌早期診斷、術(shù)前輔助診斷和病情監(jiān)測標(biāo)記物； MSLN 是否可與 CA125 互補(bǔ)應(yīng)用于卵巢癌的診斷和病情監(jiān)測。 七、使用基金會(huì)辦公室提供的錄入系統(tǒng)填寫申請(qǐng)書，由申請(qǐng)者所在單位審查、篩選后統(tǒng)一報(bào)基金會(huì)辦公室，一式六份，其中 原件一份。青年專項(xiàng)基金項(xiàng)目負(fù)責(zé)人，實(shí)足年齡在 35 歲及以下，項(xiàng)目組成員主要是年輕人?！邦A(yù)期水平”欄中選擇國際領(lǐng)先、國際先進(jìn)、國內(nèi)領(lǐng)先、國內(nèi)先進(jìn)之一。 二、“學(xué)科”分 7 大類，即∶數(shù)理、化學(xué)、生命、地球、材料與工程、信息、管理。分子生物學(xué)省重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室 婦科學(xué)博士點(diǎn) **省自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目 申請(qǐng)書 項(xiàng)目名稱 卵巢上皮性癌的間皮素（ Mesothelin)表達(dá)及與 CA125 的功能關(guān)系 所屬學(xué)科 生命 學(xué)科代碼 C030304 申 請(qǐng) 人 *** 申請(qǐng)單位 醫(yī)科大學(xué) 通訊地址 郵政編碼 歸口單位 教育廳 合作單位 申請(qǐng)時(shí)間∶ 20xx 年 06 月 10 日 填 寫 說 明 一、填寫前要認(rèn)真查閱省自然科學(xué)基金管理的有關(guān)規(guī)定。首次出現(xiàn)的外文縮寫標(biāo)明外文全稱。 三、項(xiàng)目名稱限制在 30 個(gè)漢字以內(nèi)，關(guān)鍵詞最多不超過 30 個(gè)漢字長度。參加人為實(shí)際從事本研究工作的人員，顧問等指導(dǎo)性工作人員不列入其中。應(yīng)充分利用已有條件和可以利用的協(xié)作條件，多渠道積極爭取經(jīng)費(fèi)。最新研究提示 CA125 是鼠 MSLN 的受體。截止本申請(qǐng)撰寫時(shí)，國內(nèi)外未見相關(guān)研究的報(bào)道。 關(guān)鍵詞 卵巢上皮性癌；間皮素； CA125 項(xiàng)目組 總?cè)藬?shù) 高級(jí) 中級(jí) 其他 其 中 博士后 博士 博士生 碩士 碩士生 3 1 2 0 1 2 2 申請(qǐng)者及項(xiàng)目主要成員情況 姓 名 性別 年齡 職稱 學(xué)位 專業(yè) 單位 項(xiàng)目分工 年月 *** 女 39 教授 博士 婦科 醫(yī)科大學(xué) 項(xiàng)目設(shè)計(jì) 08 *** 女 30 講師 碩士 分子生物學(xué) 醫(yī)科大學(xué) 動(dòng)物實(shí)驗(yàn) 09 ** 女 27 講師 碩士 細(xì)胞生物學(xué) 醫(yī)科大學(xué) 實(shí)驗(yàn) 09 二、經(jīng)費(fèi)收入、支出計(jì)劃 (金額單位∶萬元 ) 金 年 額 度 來 源 20xx 20xx 20xx 合計(jì) 申 請(qǐng)省基金 3 2 1 6 單位自籌 其他 渠道 撥款 廳 1 1 2. 合 計(jì) 4 2 1 7 ㈠ 省基金經(jīng)費(fèi)使用計(jì)劃 預(yù)算支出科目 金額 計(jì)算依據(jù) (實(shí)驗(yàn)動(dòng)植物購置和種植、養(yǎng)殖費(fèi)，計(jì)算、測試分析費(fèi)，國內(nèi)調(diào)研和學(xué)術(shù)會(huì)議費(fèi)，業(yè)務(wù)資料、報(bào)告、論文印刷費(fèi)，臨時(shí)用工勞務(wù)費(fèi)、必需的國際合作研究費(fèi) ) 用于數(shù)據(jù)分析、統(tǒng)計(jì)、日常消耗、 參加學(xué)術(shù)會(huì)議和論文版面費(fèi)等 (原材料、試劑、藥品等消耗性物品的購置費(fèi)，標(biāo)本、樣 品采集加工費(fèi)，運(yùn)雜包裝費(fèi) ) 購置細(xì)胞系、抗體、 RNA干擾技術(shù)所用試劑、動(dòng)物實(shí)驗(yàn)、分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)和細(xì)胞培養(yǎng) (專用儀器設(shè)備的購置費(fèi)，運(yùn)雜包裝費(fèi)，自制專用儀器設(shè)備的材料、配件和外協(xié)加工費(fèi) ) ＊＊＊儀器 (根據(jù)研究工作需要所進(jìn)行的實(shí)驗(yàn)室簡單改裝 ) (外單位協(xié)作者承擔(dān)研究工作所需經(jīng)費(fèi) ) (經(jīng)費(fèi)自立的單位項(xiàng)目管理費(fèi)不超過資助金額的 5%，最高不超過 ) 管理費(fèi) ㈡ 單位自籌及其他渠道撥款使用計(jì)劃 省衛(wèi)生廳經(jīng)費(fèi)主要用于實(shí) 驗(yàn)材料的 1萬元 ㈢ 需購買的主要儀器、設(shè)備 儀器、設(shè)備名稱 規(guī)格型號(hào) 數(shù)量 產(chǎn)地 資金來源 ＊＊＊ 1－ 6 1 中國 省基金 三、立論依據(jù) (包括科學(xué)意義和應(yīng)用前景，國內(nèi)外研究概況，主要參考文獻(xiàn)目錄。 卵巢癌的術(shù)前輔助診斷和病情監(jiān)測的首選方法之一是血清 CA125 的測定 。卵巢癌的治療是長期的過程，術(shù)后應(yīng)給予多個(gè)療程的化學(xué)治療（化療），治療過程中根據(jù)腫瘤對(duì)化療的敏感度及時(shí)調(diào)整治療方案也很重要；此外，卵巢癌的復(fù)發(fā)率很高， CA125 的陽性預(yù)測率高達(dá) 90%，因此 CA125 也被用于病情監(jiān)測。 ② 早期病例陽性率低。由此可見卵巢癌早期診斷困難之一斑。為這 一目的，在 20xx 年我們采用了高通量的 DNA 微陣列（基因芯片）技術(shù)，所用的 cDNA 微陣列含 8000 條人基因，分析了卵巢癌和正常卵巢的基因表達(dá)譜，結(jié)合生物信息學(xué)統(tǒng)計(jì)處理，進(jìn)行了深入的數(shù)據(jù)分析和數(shù)據(jù)挖掘。 MSLN 的 cDNA 編碼 69 kDa 多肽，糖基化后被蛋白酶水解為 40 kDa 和 31 kDa 的片段， 40 kDa 通過糖基磷酯酰肌醇（ glycosylphosphatidylinositol）與胞膜相連， 31 kDa 脫落成可溶片段。 N末端的胞外功能區(qū)的有 N和 O糖基化部位，由 60 余個(gè)串聯(lián)的重復(fù)的?；?motif）組成，?；?156 個(gè)氨基酸，主要是富含絲氨酸和蘇氨酸的序列，正是這個(gè)功能單位和 MSLN、 OC125 抗體和 M11（識(shí)別 CA125 的 B 單位）抗體結(jié)合 [7]。 通常細(xì)胞發(fā)生惡性轉(zhuǎn)化時(shí)出現(xiàn)了新的表型及與之相隨的分子改變，這些變化不僅使惡性細(xì)胞獲得了與正常細(xì)胞不同的生長特性，也為我們尋找新的腫瘤診斷標(biāo)記物和新的藥物作用靶提供了線索。（ 2） MSLN 和 CA125的表達(dá)可能有關(guān)聯(lián)， MSLN 的過度表達(dá)可能影響 CA125 的釋放而導(dǎo)致血清 CA125 水平的降低，二者可能有互補(bǔ)性應(yīng)用的臨床價(jià)值。 20xx 年下半年，美國學(xué)者用同樣技術(shù)也有類似發(fā)現(xiàn) [9]。這一結(jié)果提示，血清 MSLN 有可能用于癌的早期診斷。 上述結(jié)果提示人 CA125可能是鼠 MSLN 的相應(yīng)受體，但人體細(xì)胞系或人體組織細(xì)胞中 CA125 和 MSLN 是否存在這樣的關(guān)系尚未得知 。 我們課題組近年一直致力于卵巢癌的臨床應(yīng)用基礎(chǔ)研究。在卵巢癌方面，最早識(shí)別和克隆 MSLN 是在卵巢癌細(xì)胞系OVCAR3 細(xì)胞 [4， 12,13]，一些研究集中在發(fā)展抗 MSLN 的免疫治療方面 [1417]。 在國內(nèi)，我們課題組首先開始 MSLN 的研究。 參 考 文 獻(xiàn) 1. Gerrnle RT, HillHarmon MB, Murray T, et al. Cancer Statistics. 20xx. CA Cancer J Clin 20xx。Brien TJ, Beard JB, Underwood LJ, et al. The CA 125 gene: an extracellular superstructure dominated by repeat sequences. Tumour Biol. 20xx。 362: 161217 10. Kui Wong N, Easton RL, Panico M, et al. Characterization of the oligosaccharides associated with the human ovarian tumor marker CA125. J Biol Chem. 20xx。 1: 595600. 14. Bera TK, WilliamsGould J, Beers R, et al. Bivalent disulfidestabilized fragment variable immunotoxin directed against mesotheliomas and ovarian cancer. Mol Cancer Ther. 20xx。 96: 115316. 18. Urban N, MicIntosh MW, Andersen M, et al. Ovarian cancer screening. Hematl. Oncol. Clin. North Am. 20xx, 17: 9891005 四、研究內(nèi)容和預(yù)期成果 (說明項(xiàng)目的具體研究內(nèi)容和重點(diǎn)解決的關(guān)鍵問題，預(yù)期 成果和提供的形式。對(duì) MSLN 和 CA125 均表達(dá)的標(biāo)本，用免疫熒光方法并借助共聚焦顯微鏡分析 MSLN 與CA125的表達(dá)定位的關(guān)系，觀察二者在人體卵巢癌細(xì)胞中是否存在共表達(dá)和重疊分布狀態(tài)。 3． 用免疫熒光法分析一些卵巢癌細(xì)胞系的 MSLN 和 CA125 的表達(dá)定位。 6． 異種細(xì)胞黏附實(shí)驗(yàn)：由于迄今僅有鼠的 MSLN 的封閉抗體，所以本課題應(yīng)用異型細(xì)胞黏附實(shí)驗(yàn)觀察在表達(dá) MSLN和 CA125的細(xì)胞間的黏附過程中 MSLN所起的作用。 擬解決的關(guān)鍵問題： 1 目前尚無系統(tǒng)研究 MSLN 用于卵巢癌的診斷和病情監(jiān)測的報(bào)告，因此，本研究要解決的首要問題是MSLN 是否有作為卵巢癌的診斷標(biāo)記物的價(jià)值。 3 卵巢癌的主要轉(zhuǎn)移途徑是直接在腹腔的腹膜種植形成轉(zhuǎn)移灶，腹膜間皮是人體表達(dá) MSLN 的主要細(xì)胞。 預(yù)期研究結(jié)果： 1． 本課題經(jīng)過 3 年左右的研究，將對(duì) MSLN 在卵巢癌診斷（含早期診斷 ）和病情監(jiān)測的價(jià)值基本得出