【正文】 結(jié)合黃酮的結(jié)構(gòu)特點，調(diào)節(jié)微乳系統(tǒng)的極性，溫度和濕度，分離出銀杏葉提取物黃酮斑點 12 個?？梢约糸_斑點，溶于甲醇過濾后在 HPLC上精確分析。色譜圖的下部，是黃酮極性大的成分，如黃酮的鹽酸鹽等。紫外燈下各批次的黃酮斑點顏色為亮黃色。由色譜指紋圖譜可見，銀杏黃酮能被此微乳系統(tǒng)完全分離。 此外，展開板的種類、濕度、溫度等均對銀杏黃酮的分離有影響。而強酸易造成黃酮苷類分解，因此選擇弱酸：甲酸調(diào)節(jié)酸度。在含水量為 70％時，雖然斑點較多，但有少量拖尾，不能有效分離。實驗室樣品 GBE 在微乳液含水量較高時的砒值比對照品中國藥品生物制品檢定所高。 用定量毛細管吸取對照品溶液、對照標(biāo)液、 GBE 樣品液于聚酰胺膜上點樣，直徑約 1mm，吹干。 GBE液 取不同批次的銀杏葉，剪碎后用甲醇提取，收集甲醇提取液、干燥后為棕黃色粉末。本實驗用甲苯、醋酸乙酯和吡啶以不同比例作為展開劑，都僅能展開兩三個點。 62 實驗部分 2． 1銀杏葉中黃酮類化合物的含量測定 器與藥品 薄層色譜紫外分析儀 (天津市琛航科技儀器有限公司 )、自動點樣儀 (天津市琛航科技儀器有限公司 )、定量毛細管 (天津市琛航科技儀器有限公司 )、雙槽展開缸 (重慶玻璃儀器廠 )、電吹風(fēng)、聚酰胺預(yù)制板 (臺州四青生化材料廠 )、新型噴霧瓶 (華西醫(yī)科大學(xué)儀器廠 )，十二烷基硫酸鈉 (SDS)、正丁醇、正庚烷、三氯化鋁、乙醇均為分析純。丁青龍等 [17]曾對國內(nèi)不同廠家的制劑進行質(zhì)量測定，黃酮含量基本合格，但內(nèi)酯含量不足，故國內(nèi)銀杏葉制劑的質(zhì)量有待提高。 1990 年上海天工植物制品廠出品的銀杏葉干浸膏已銷往歐洲； 1990 年西安國藥廠與沈陽藥學(xué)院共同研制的出口用銀杏 葉標(biāo)準(zhǔn)提取物，其質(zhì)量與法國HawaiianAgronomicsSA 公司的標(biāo)準(zhǔn)相一致； 1991 年湖南醫(yī)工所與寧遠縣天然植物提煉廠合作研制，總黃酮含量按出口標(biāo)準(zhǔn)分別為 16%及 24%2種規(guī)格，收率為 2%～ 3%，已初步形成生產(chǎn)規(guī)模；上海藥物所與康恩貝制藥公司用銀杏葉開發(fā)的制劑天保寧已上市，臨床用作冠脈循環(huán)改善劑；國家“七五”中醫(yī)藥攻關(guān)項目銀杏口服液于 1992 年在遵化制藥廠投產(chǎn)。此外尚有兒茶素類化合物 4 種。 1． 3 銀杏葉的化學(xué)成分 黃酮類化合物是銀杏葉的主要藥用成分，其黃酮含量在很大程度上決定著銀杏葉的利用價值。魏恩會等觀察銀杏內(nèi)酯 B 對主動脈平滑肌細胞增殖的影響，結(jié)果發(fā)現(xiàn)無論是否用血管緊張素 II 誘導(dǎo)， GB 與銀杏內(nèi)酯 A 和 B的混合物均呈濃度依賴性地抑制SMC(主動脈平滑肌 )的增殖，其機制與阻止細胞有絲分裂期有關(guān)，說明GB 可抑制動脈壁 SMC 的增殖，該作用不完全取決于血小板活化因子受體的拮抗活性。另外還可以 使處于異常狀態(tài)下的血管功能恢復(fù)正常水平[13]。 血小板黏在一起，能使血凝塊的形成，而血凝塊會導(dǎo)致心臟病發(fā)作或中風(fēng)，如果通往心臟的動脈里有血凝塊，就會造成心臟病發(fā)作；如果血凝塊停留在通往腦部的動脈里，就會造成中風(fēng)。 冠心病是由于心肌的嚴重缺血而引起心肌的損傷和壞死，而急性心肌梗死是其臨床的主要表現(xiàn)。其中，對銀杏葉提取物，在臨床也取得了肯定療效。 目前，以腦梗死為代表的腦缺血性疾病已上升為人類第三大致死原因，成為倍受矚目的常見多發(fā)病。彭洪 [9]采用水蒸氣蒸餾及 GC／ MS 分析鑒定出銀杏揮發(fā)油 17 種化學(xué)成分；周維書 [10]按中國藥典法提取了揮發(fā)油并分析出 35種化學(xué)成分。 [3]”銀杏葉的研究始于本世紀(jì) 60 年代，由于發(fā)現(xiàn)其具有抑制血小板活化因子的作用，能夠改善心血管系統(tǒng)的滲透性、彈性及血液流變速度，對 機體組織具有抗缺氧的能力，故引起國內(nèi)外醫(yī)藥界的關(guān)注。 關(guān)鍵詞：銀杏葉黃酮含量薄層色譜生長時期高效 液相色譜 Title： InGingkoleafflavonoidcontentdetermination Liujiangnan DrugqualitytestingtechnologyAbstract ：Flavonoidsarethemainmedicinalponentsofginkgobiloba,itsflavonoidcontenttoalargeextentdeterminesthevalueofginkgobilobau(SDS)1butanol1heptanemicroemulsionsystemofwaterasthemobilephase,prepolyamidethinlayerplateasthestationaryphase,byadjustingthepolarityofthemicroemulsionsystem,tionalsystemtheanicsolutionsystems,themicroemulsionsystegrowthandflavonoidscontentduringtheparison,analysisofflavonoidsofGinkgobilobainthevariationwithgrowthphase,revealingtdthat:differentgrowthstagesofthecontentofflavonoidsinasignificantreductionin1yearintheflavonoidcontentof2timesthe 1peak,inAugustthefirstonepeakappears,4%,thendecreasedrapidlyinOctoberleavesyellowcolorafterrising%.KeyWords ：Ginkgobiloba,Flavonoidscontent,TLC,Growthperiod,HPLC . 21 前言 1． 1 銀杏葉的介紹 銀杏 (Ginkgobilobal，又名公孫樹，白果 )系裸子植物門銀杏科 植物，有“活化石”之稱，是當(dāng)今地球上最古老的樹種之一，為我國特產(chǎn)，我國銀杏資源擁有量占世界總量的 75％左右，占世界首位 [1,2]。以十二烷基硫酸鈉 (SDS)一正丁醇一正庚烷一水微乳系統(tǒng)為流動 相，預(yù)制聚酰胺薄層板為固定相，通過調(diào)節(jié)微乳系統(tǒng)的極性，較好地分離出十幾種銀杏葉黃酮。對學(xué)生無私的教誨，使我受益匪淺，終生難忘。如果能在活性方面 作深入的研究，開展構(gòu)效關(guān)系的分析，可以更有效地促進銀杏葉的開發(fā)和利用。為銀杏葉藥材的標(biāo)準(zhǔn)化種植，銀杏葉提取物及其制劑的質(zhì)量控制提供了簡便、經(jīng)濟可靠的方法 3 對銀杏葉發(fā)展的展 望 當(dāng)今國內(nèi)外對于銀杏葉的化學(xué)成分的研究很多，各國科學(xué)家已經(jīng)從銀杏葉中分離鑒定出很多成分，并從中發(fā)現(xiàn)了重要的活性成分。改善了 GBE 的薄層色譜分離技術(shù)，為平面色譜在中藥鑒定和色譜分析中的應(yīng)用展示了良好的前景。 由十二烷基硫酸鈉 — 正庚烷 — 正丁醇以 ： ： 的比例溶于67％的水中組 成的微乳體系，適合于分離銀杏葉黃酮。中部為槲皮素和蘆丁，槲皮素是蘆丁的一種分解產(chǎn)物。但由于隨著季節(jié)和采摘時間的不同，銀杏葉黃酮的成分有差別 [18]，所以斑點顏色有深淺。樣品 3 即中國藥品生物制品檢定所提供的銀杏黃酮和其它樣品一樣，分離出 12 個點。硅膠類展開板對銀杏黃酮吸附能力差，只能分離 2～ 3 個斑點；選擇聚酰胺薄層板分離效果最好；展開通風(fēng)櫥內(nèi)濕度以相對濕度為 68％為最好；溫度為室溫。實驗證明，選擇含展開劑體積 8％的甲酸對銀杏黃酮展開效果最好。綜合考慮，宜選擇含水量 67％微乳液作為銀杏黃酮分離的展開劑。 8隨著微乳液含水量的降低，兩者的 Rf值相差不大，當(dāng)含水量為 65％～75％時，兩者 Rf 值相同。以不同含水量的微乳液為展開劑，于已飽和的雙槽展開缸中展開 10cm，取出烘干。分別稱取各批粉末適量配制甲醇溶液。不能較好分離銀杏黃酮。 對照品：蘆丁、槲皮素、 GBE樣品 (均為中國藥品生物制品檢定所出品 )。 1． 5 我國銀杏葉制劑的發(fā)展前景 雖然我國在銀杏葉制劑開發(fā)中還有很大空缺，但這主要是因為國際上還沒有統(tǒng)一的質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)，不少廠家雖已生產(chǎn)出高質(zhì)量的 Egb，但由于競爭原因不 肯公布其質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)；另外國內(nèi)提取銀杏葉中有效成分的技術(shù)低、生產(chǎn)條件差、研究進展緩慢，也影響了銀杏葉制劑的質(zhì)量。國外銀杏葉提取物 (Egb)劑型較豐富，有片劑、滴劑、薄膜片劑、膠囊、注射液、外用劑、酊劑、液體噴霧劑、洗劑、軟膏、霜劑、氣霧劑和口服液等 [16]。銀杏葉含有的二萜內(nèi)酯和倍半萜內(nèi)酯均為其特有成分。銀杏葉中黃酮類化合物含量較高，用紫外分光光度法測得我國泰興銀杏葉中所含黃酮類物質(zhì)占 %[15]。 總的來說，銀杏葉片制品臨床用于治療冠心病、心絞痛、腦梗死等疾病已收到滿意效果。 血管平滑肌細胞 (VSMC)遷移和過度增殖是高血壓、動脈粥樣硬化及血管成形術(shù)后再狹窄等血管增生性疾病的基本特征。 黃酮類化合物對于抑制血小板凝集也有顯著作用：黃酮類化合物對凝血因子具有較強的抑制作 用，故表現(xiàn)出較好的抗凝血作用。急性心肌梗死在歐美國家已成為嚴重的健康問題，美國每年大約有 150 萬人發(fā)生，其中大約有 1／ 3 的人死亡。研究證實，銀杏葉片提取物中的黃酮類物質(zhì)可明顯增加腦的血流量，提高腦組織耐缺氧能力；銀杏內(nèi)酯類物質(zhì)中的內(nèi)酯 A、 B，尤其是苦內(nèi)酯 B 可以保護腦組織免受損傷；內(nèi)酯類物質(zhì) 中的白果內(nèi)脂可以保護神經(jīng)細胞免受缺血性損傷。發(fā)病患者急性期過后常留下許多后遺癥，如行為功能障礙，認知障礙等，給患者及其家庭都造成很大的痛苦。 臨床研究發(fā)現(xiàn)，銀杏提取物能使血液粘稠度降低，并調(diào)節(jié)血脂，抑制血小板聚集，增加紅細胞的變形能力，減少或抑制微血栓的形成，并增加心腦的供血。利用銀杏果葉的有效化學(xué)成分和特殊醫(yī)藥保健作用加工生產(chǎn)保健食品，藥物和化妝品，正引起國內(nèi)外研究、開 發(fā)、生產(chǎn)單位的重視，各國眾多企業(yè)競相研制生產(chǎn)以銀杏為原料的天然綠色產(chǎn)品，替代對人體健康有較大副作用的合成化學(xué)品，從而為中國的銀杏資源的開發(fā)利用開辟了無比廣闊的前景，迅速提高了銀杏的利用價值及其對經(jīng)濟、社會和生態(tài)的影響，為社會創(chuàng)造了就業(yè)和財富，為人類帶來了健康和長壽。銀杏是中國特有而豐 富的經(jīng)濟植物資源，是一種歷史悠久的植物，除具有很高的觀賞價值外，銀杏的果實和葉片也有很高的藥用價值。與傳統(tǒng)的流動相系統(tǒng) — 有機溶液系統(tǒng)相比，微乳系統(tǒng)顯示出較強的分離優(yōu)勢。以十二烷基硫酸鈉 (SDS)一正丁醇一正庚烷一水微乳系統(tǒng)為流動相，預(yù)制聚酰胺薄層板為固定相，通過調(diào)節(jié)微乳系統(tǒng)的極性，較好地分離出十幾種銀杏葉黃酮。 關(guān)鍵詞：銀杏葉黃酮含量薄層色譜生長時期高效液相色譜 Title： InGingkoleafflavonoidcontentdetermination Liujiangnan DrugqualitytestingtechnologyAbstract ：Flavonoidsarethemainmedicinalponentsofginkgobiloba,itsflavonoidcontenttoalargeextentdeterminesthevalueofginkgobilobau(SDS)1butanol1heptanemicroemulsionsystemofwaterasthemobilephase,prepolyamidethinlayerplateasthestationaryphase,byadjustingthepolarityofthemicroemulsionsystem,tionalsystemtheanicsolutionsystems,themicroemulsionsystegrowthandflavonoidscontentduringtheparison,analysisofflavonoidsofGinkgobilobainthevariationwithgrowthphase,revealingtdthat:differentgrowthstagesofthecontentofflavonoidsinasignificantreductionin1yearintheflavonoidcontentof2timesthe 1peak,inAugustthefirstonepeakappears,4%,thendecreasedrapidlyinOctoberleavesyellowcolorafterrising%.KeyWords ：Ginkgobiloba,Flavonoidscontent,TLC,Growthperiod,HPLC . 21 前言 1． 1 銀杏葉的介紹 銀杏 (Ginkgobilobal，又名公孫樹，白果 )系裸子植物門銀杏科植物，有“活化石”之稱，是當(dāng)今地球上最古老的樹種之一，為我國特產(chǎn)，我國銀杏資源擁有量占世界總量的 75％左右，占世界首位 [1,2]。 [3]”銀杏葉的研究始于本世紀(jì) 60 年代，由于發(fā)現(xiàn)其具有抑制血小板活化因子的作用，能夠改善心血管系統(tǒng)的滲透性、彈性及血液流變速度，對機體組織具有抗缺氧的能力，故引起國內(nèi)外醫(yī)藥界的關(guān)注。彭洪 [9]采用水蒸氣蒸餾及 GC／ MS 分析鑒定出銀杏揮 發(fā)油 17 種化學(xué)成分；周維書 [10]按中國藥典法提取了揮發(fā)油并分析出 35種化學(xué)成分。 目前，以腦梗死為代表的腦缺血性疾病已上升為人類第三大致死原因，成為倍受矚目的常見多發(fā)病。其中，對銀杏葉提取物，在臨床也取得了肯定療效