【正文】 R2 = R 值都在 以上，滿足線性回歸。 料液比的影響 精密稱取 5 份 的蓮房粉放入錐形瓶中，以選定溶劑為提取劑，微波功率為中火（ 80%功率）微波作用時(shí)間 90s 后，以提取率為衡量指標(biāo)考察了料液比（ 1： 1： 1 1： 1： 2 1： 1： 35（ M/V））對總酚和原花青素提取效果的影響。 單因素實(shí)驗(yàn) 溶劑選擇 精密稱取 4 份 的蓮房粉放入 100mL 的燒杯中，微波功率一定，料液比一定，微波作用一定時(shí)間，以提取綠為衡量標(biāo)準(zhǔn)，考察不同溶劑 [70%的丙酮、70%的乙醇、 70%的甲醇和水（加入亞硫酸氫鈉 1%） ]對總多酚和原花青素提取效果的影響，確定一種作為后續(xù)溶劑。 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制：精密稱取兒茶素（對照品） 用去離子水定容到 ，得 。 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制：精確稱取沒食子酸 用水溶解并定容到 10mL 得，精確吸取對照樣品溶液 、 、 、 、 、 于 10mL 容量瓶中，再加入 1mL Folinclocalteau 試劑，搖勻后再加入 2mL 15%碳酸鈉溶液，定容到 10mL，室溫下反應(yīng) 2 小時(shí)后測定 A760，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。 1 材料與方法 試劑與儀器 試劑 沒食子酸 生物試劑 中國藥品生物檢定所 兒茶素 生物試劑 中國藥品生物檢定所 乙醇 分析純 江蘇省宜興市興洋企業(yè) 濃鹽酸 分析純 溫州天盛電化有限公司 香草醛 分析純 青島裕達(dá)精細(xì) 化工有限公司 甲醇 分析純 江蘇省宜興市興洋企業(yè) NaHCO3 分析純 上海四星醫(yī)藥科技工貿(mào)公司 Folinclocalteau 分析純 Sigma 公司 兒茶素，沒食子酸 分析純 Sigma 公司 蓮房，蓮子殼， 分析純 Sigma 公司 器材與儀器 722 分光光度計(jì) 上海精密科學(xué)儀器有限公司 14 微波爐 LG 電子（天津）電器有限公司 恒溫烘箱 101A－ 3S 上海意豐電爐有限公司 電子天平 上海精密科學(xué)儀器有限公司 大小燒杯、錐形瓶若干、不同規(guī)格的離心管、滴管、移液管、玻璃 棒、移液槍等。因此迫切需要改進(jìn)提取原花青素的方法，經(jīng)過科研工作者的不斷努力、實(shí)驗(yàn)，終于探究出了利用改變外界條件的方法來輔助提取原花青素的方法。旨在為提高蓮房、蓮子殼中原花青素的提取率， 為提高蓮房，蓮子殼的利用率和應(yīng)用價(jià)值，包括在藥理方面、營養(yǎng)方面和人類生命方面等的產(chǎn)品的 開發(fā)提供參考，為蓮資源開發(fā)應(yīng)用開辟新途徑。 原花青素經(jīng)過多年的開發(fā)研究和臨床應(yīng)用，以其優(yōu)越的抗氧化活性為人們所青睞。一方面，它可促進(jìn)膠原蛋白形成適度的交聯(lián)，維護(hù)膠原的生合成；另一方面，它作為一種有效的自由基清除劑，可預(yù)防“過度交聯(lián)”這種反常生理狀況的發(fā)生，從而 阻止了皮膚皺紋和囊泡的出現(xiàn)，保持皮膚的柔順光滑。 原花青素作為具有極強(qiáng)抗氧化性的天然功能性成分，在歐美被廣泛加入到各種普通食品如蛋糕、奶酪中，既作為營養(yǎng)強(qiáng)化劑，又作為天然防腐劑來替代合成防腐劑 (如苯甲酸等 )，符 合人們回歸自然的要求，提高了食品的安全性。在 Masquelier 發(fā)現(xiàn)花青素之前，動(dòng)物實(shí)驗(yàn)表明：天 然來源的抗壞血酸防止壞血病的能力比較高，而純化了的或合成的抗壞血酸活性比較低。人們還需要補(bǔ)充花青素，使維生素 C 發(fā)揮最大效益。研究表明，缺少維生素 C 的人是很普遍的。 維生素 C 的增效 劑 維生素 C 又叫抗壞血酸，維生素 C 和它的輔助因子是產(chǎn)生細(xì)胞內(nèi)部材料必需的成份，這些材料支持結(jié)締組織，形成像膠結(jié)劑那樣的物質(zhì)，用于修理骨骼、毛細(xì)血管、軟骨和牙質(zhì)。毛細(xì)血管的阻力減少和滲透性改善，使細(xì)胞更容易吸收養(yǎng)分與排除廢物。參加者分成兩組，一組是晚上開車的司機(jī)，一組是 10 整天和電腦屏幕為伴的人。法國允許用花青素治療該病已經(jīng)很多年了。花青素也抑制組胺產(chǎn)生，因而可減輕炎癥，幫助動(dòng)脈抗拒那些引發(fā)心血管病的誘變因素的沖擊。在羅馬尼亞，一種商品名為 Endotelon 的原花青素制劑已上市用于治療毛細(xì)血管疾病。 9 本項(xiàng)目是在前人研究發(fā)現(xiàn)蓮，特別是其非可食部分 — 蓮房中含有與人體健康和生命密切相關(guān)的重要天然活性物質(zhì)原 花青素，含量高于目前國內(nèi)外研究和利用最多的葡萄籽和皮，有望成為原花青素利用的新資源的基礎(chǔ)上開展的 ！ 2 原花青素的應(yīng)用 在藥物方面的應(yīng)用 在法國，用葡萄籽原花青素制成的專利產(chǎn)品用于治療微循環(huán)疾病，包括眼睛與外周毛細(xì)血管通透性疾病及靜脈與淋巴功能不全。皮膚 作為人體最大器官也有其固有的抗氧化酶系統(tǒng)，這種酶系統(tǒng)的平衡對于維持皮膚正常功能及延緩皮膚衰老具有重要的意義。葡萄籽原花青素能激活正常人外周血 Th1 細(xì)胞產(chǎn)生 IFNγ（γ 干擾素），由 RTPCR 證明原花青素能有效促進(jìn) IFNγ mRNA 的轉(zhuǎn)錄 ，得到原花青素能促進(jìn) IFNγ的合成和分泌來增強(qiáng)免疫功能。1低水平者能顯著性提高 TGF223。同時(shí)觀察 PHA 刺激的單核細(xì)胞轉(zhuǎn)錄水平即IL1223。原花青素從五聚體到十聚體隨著聚合度的增加能顯著刺激 IL1223。 Gerardo G M 等 探討兒茶素、表兒茶素和原花青素二聚體 B，對 PMA刺激 T 細(xì)胞 NFκB活性的影響。 原花青素對機(jī)體免疫功能調(diào)節(jié)作用也可以間接的對皮膚產(chǎn)生保護(hù)作用?，F(xiàn)在，我們身體過多地承受了來自 食品、飲用水、空氣和動(dòng)植物（如花粉）的化學(xué)物質(zhì)及污染物，其結(jié)果，過敏便成了非常普遍的疾病。 免疫調(diào)節(jié)作用 花青素不僅幫助減緩心血管發(fā)炎，且也幫助治療許多疾病，例如，過敏、氣喘、支氣管炎、花粉熱、類風(fēng)濕動(dòng)脈炎、運(yùn)動(dòng)受傷、壓力潰瘍等。 原花青素的保濕作用基于原花青素具有多羥基結(jié)構(gòu)。 茶單寧和葡萄單寧在 100mg/mL 濃度下即可完全抑制因蛋白質(zhì)氨基和核酸氨基發(fā)生的美拉德反應(yīng)，從而抑制了脂褐素、老年斑 的形成，起到美白的作用。因原花青素作為氧自由基清除劑和抗氧化劑可清除活性氧和還原黑色素中間體，抑制黑色素的生成。 皮膚黑化、雀斑、褐斑和老年斑的出現(xiàn)，都與體內(nèi)酪氨酸酶活性增高密切相關(guān)?；ㄇ嗨夭粌H幫助膠原蛋白纖維形成交聯(lián)結(jié)構(gòu)，而且可以幫助恢復(fù)因受傷和自由基所引起的過度交聯(lián)的損害。膠原蛋白是皮膚的基本成份，并且是一種使我們身體成為一個(gè)整體的膠狀物質(zhì)。同樣給老齡大鼠每天連續(xù)灌胃200mg/ 和 400mg/ 原花青素 30d，結(jié)果 200mg/ 劑量組顯著降低老齡大鼠血清中 MDA 和腦組織脂褐素含量 (P)， 400mg/ 劑量組提高老齡大鼠血清 SOD 活性 (P)。 另一方面，原花青素的抗氧化作用也是其抗衰老作用的基礎(chǔ)。相關(guān)報(bào)道同樣證明原花青素可改善皮膚皺紋和調(diào)節(jié)皮膚功能。體內(nèi)研究結(jié)果表明，當(dāng)將原花青素注入幼兔皮膚內(nèi)時(shí)，可束縛皮內(nèi)彈性纖維。 Masqudier J 和美國專利均有報(bào)道，低聚原花青素的分子配置對膠原質(zhì)的穩(wěn)定性最適合，對膠原纖維的彈性恢復(fù)、交聯(lián)及穩(wěn)定效果最好。今天，科學(xué)家認(rèn)為，起因于自由基對細(xì)胞的傷害，是引發(fā)大量疾病的首要因素，這 5 些疾病包括癌癥、心血管問題、關(guān)節(jié)炎、糖尿病、中風(fēng)、白內(nèi)障等。說明原花青素在體內(nèi)可以保護(hù)紅細(xì)胞膜中的 VE和減少 DNA 氧化損傷。 )mg/g 增加到 (177。 Maffei F R 等研究高相對分子質(zhì)量兒茶素寡聚體在 ～ 時(shí)能防止細(xì)胞膜中 VE損失，顯著減少膜脂質(zhì)過氧化，明顯推遲細(xì)胞溶血的發(fā)生時(shí)間。葡萄和葡萄籽提取物原花青素對Cu2+/AAPH 或 SIN1 和單核巨噬細(xì)胞過氧化物釋放而誘導(dǎo)的 LDL 氧化有較好的保護(hù)作用。 Bagchi D 等在對醋酸酚（ TPA）誘導(dǎo)的小鼠大腦和肝臟脂質(zhì)過氧化和 DNA 損傷研究中，指出了葡萄籽原花青素對小鼠大腦和肝臟脂質(zhì)過氧化和 DNA 損傷都有較強(qiáng)的抑制作用，并與原花青素存在劑量依賴關(guān)系。 原花青素的聚合度對其抗氧化活性也有很大影響。葡萄籽 原花青素能有效 地清除 O2 Noda 等，通過 ESR 分析技術(shù)對天然植物、健康食品和抗氧化物質(zhì)進(jìn)行 O2 抗氧化活性 原花青素 清除自由基和 抗氧化活性的顯著作用已得到國內(nèi)外學(xué)者和人們的肯定。不同聚合度的原花青素其生化、藥理活性不盡相同。 經(jīng)過 40 多年廣泛臨床、毒理學(xué) 、藥物動(dòng)力學(xué)研究證明，其無毒、非致癌、非致畸，并以安全、 高效、高生物利用度著稱已有 20 年 。 原花青素 是一種很強(qiáng)的天然抗氧化劑和VE 再生劑，能顯著抑制肝、腦中 TPA 誘導(dǎo)的脂質(zhì)過氧化和 DNA 分裂，效果明顯優(yōu)于 VE、 VC和 β胡蘿卜素 。原花青素最具特征性的化學(xué)反應(yīng)是在酸性溶液中加熱可降解和氧化形成花色素 (Bate— Smith 反應(yīng) )。葡萄籽提取物原花青素呈棕色粉末．溶于水、乙醇、甲醇、丙酮，也可溶于乙酸乙酯，不溶于乙醚、氯仿、苯等。按聚 合度的大小分類，通常將二 四聚體稱為低聚體(procyanidolic o1igomers、簡稱 OPC， s)、將五聚體以上的稱為高聚體(procyamdolic polymers)簡稱 PPC。隨著分離鑒定技術(shù)的提高和對此類物質(zhì)的深入研究與深刻認(rèn)識(shí)，現(xiàn)已成為獨(dú)樹一幟的一大類物質(zhì)并稱之為原花青素。起初統(tǒng)歸于縮合鞣質(zhì)或黃烷醇類。最簡單的原花青素是兒茶素與表兒茶素形成的二聚體，此外還有三聚體、四聚體等直至十聚體。三聚體中，也因組成的單體及其相連接碳原子位置的不同形成各種各樣的結(jié)構(gòu) 并命名為 CC2??等，其中 C1 在自然界中分布最豐富。高品質(zhì)的低聚原花青素在水和醇中有良好的溶解性，色澤亮麗。目前對葡萄 OPC的研究一直處于領(lǐng)先地位共分離鑒定 出 16 種 PC， 2 其中有 8 種二聚體、 4 種三聚體的 OPC。而現(xiàn)代藥理學(xué)研究表明：低聚原花青素可保護(hù)心血管系統(tǒng)、改善微循環(huán)、抗腫瘤、抗突變、抗衰老、抗菌抗病毒、抗?jié)?、改善視力、改善腦功能等與 80 多種疾病有關(guān)。 低聚原花青素結(jié)構(gòu) 1 原花青素的生化活性研究進(jìn)展 自二十世紀(jì) 80 年代以來，人們對數(shù)十種植物的原花青素低聚體和高聚體進(jìn)行了生化、藥理活性的研究。原花青素的多羥基結(jié)構(gòu)賦予其特殊的抗氧化活性和清除自由基能力，為其在保護(hù)皮膚的化妝品領(lǐng)域應(yīng)用提供了可靠的基礎(chǔ)。至此，關(guān)于原花青素清除各類自由基和抗氧化作用相繼報(bào)道。OH 能力強(qiáng)于銀杏提取物，在抗氧化方面則強(qiáng)于β 兒茶素和茶葉提取物。OH 引起的氧化損傷 。Plumb 等對兒茶素和原花青素抗氧化活性研究發(fā)現(xiàn)，原花青素抗氧化活性在油相中隨聚合度而降低；在水相中抗氧化活性從單體到三聚體是增加的，而三聚體到五聚體的抗氧化活性則逐漸下降，兒茶素與原花青素二聚體棓?；a(chǎn)物抗氧化活性在油相中減弱，而在水相中 增強(qiáng)；對兒茶素糖基化實(shí)驗(yàn)證明其產(chǎn)物在油、水兩相中抗氧化活性均下降 。原花青素對 H2O2誘導(dǎo)的 大鼠 FaO 肝癌 細(xì)胞氧化有較好的抑制作用，能降低 MDA 和 LDH 含量，顯著增加還原型 /氧化型谷胱甘肽的比例， 維持過氧化氫酶水平，使谷胱甘肽過氧化物酶活性增強(qiáng)，并提高谷胱甘肽還原酶和谷胱甘肽轉(zhuǎn)移酶活性。 人體每天食用 （含兒茶素、表兒茶素和原花青素 B2）對 AAPH 誘導(dǎo)的人紅細(xì)胞氧化溶血有較好的保護(hù)作用，并達(dá)到顯著性差異（ P）。健康人 每天食用原花青素 110mg，連續(xù) 30d，可以使紅細(xì)胞膜中 VE 的水平從 (177。 ，并能提高紅細(xì)胞膜不飽和脂肪酸含量 。許多物質(zhì)和某些環(huán)境（如陽光曝曬）會(huì)在人體內(nèi)產(chǎn)生自由基，這些植物化學(xué)物質(zhì)也保護(hù)我們身體免受這些自由基傷害。 原花青素抗衰老研究較早。 而兒茶素對豬胰彈性蛋白酶抑制率僅為 %，對人白細(xì)胞彈性蛋白酶無抑制作用。原花青素對 Vc 保護(hù)和再生的同時(shí)，對維持膠原質(zhì)的彈性和強(qiáng)度也起作用。此外，臨床研究表明原花青素能有效的改變刺激過程。腦脂褐質(zhì)水平下降。因?yàn)樗芑謴?fù)膠原蛋白活力，使皮膚平滑而有彈性?；ㄇ嗨剡B接在膠原蛋白上，可以阻止那些破壞膠原蛋白的酶的危害?；ㄇ嗨匾彩蔷植渴┯玫钠つw霜的極好添加劑。另一方面，在黑色素顆粒的成長中，即由體內(nèi)的酪氨酸在酪氨酸酶催化下轉(zhuǎn)化為多巴、多巴醌、多巴色素、吲哚、吲哚醌，最終轉(zhuǎn)變?yōu)榫酆象w的色素顆粒，一直是一個(gè)氧化過程，活性氧在其中表現(xiàn)出重要的作用。其機(jī)理尚不清楚，可能是與原花青素具有金屬絡(luò)合特性有關(guān) 。因此開發(fā)出含單寧的抑汗劑，調(diào)整型 收斂液。日本開發(fā)出含有 4%肉桂單寧的提高皮膚濕度的化妝品，是基于原花青素的分子中含有親水性的酚羥基結(jié)構(gòu)這一特性?；ㄇ嗨厥墙M胺的著名的抑制劑，但它并不阻礙其它的酶。還有報(bào)道，花青素改善許多人的關(guān)節(jié)炎癥。原花青素對因甲醇或感染鼠逆轉(zhuǎn)錄病毒引起的 小鼠免疫功能不全具有動(dòng)態(tài)調(diào)節(jié)作用，能促進(jìn)小鼠體內(nèi) IL2 的產(chǎn)生，減少感染逆轉(zhuǎn)錄病毒的小鼠細(xì)胞所產(chǎn)生 IL6 的數(shù)量，降低食用甲醇小鼠脾細(xì)胞所產(chǎn)生 IL10 的水平，同時(shí)還可增加自然殺傷細(xì)胞的細(xì)胞毒性。 8 原花青素單體到十聚體對植物凝集素（ PHA）刺激外周血單核細(xì)胞（ PBMC）的轉(zhuǎn)錄水平和蛋白分泌均有不同程度影響。表達(dá)增加 7%～ 19%，六到十聚體能抑制 PHA 誘導(dǎo)的IL4 的轉(zhuǎn)錄，抑制率達(dá) 71%～ 86%。結(jié)果，原花青素單體和二聚體對外周血 TGF223。1 水平，其抑制率達(dá) 28%～ 42%。這些作用都間接增強(qiáng)其對皮膚的保護(hù)作用。為了改變這種狀況，必須尋找可利用的新資