某公司pcr系列產(chǎn)品操作培訓(xùn)教材(文件)
【正文】 315個(gè)循環(huán)的平均熒光信號作為基線再分析 Ct值。 ? 針對泌尿生殖道樣本 （棉拭子樣本） ，先用細(xì)胞保存液 /生理鹽水洗脫，收集沉淀，而后與上述操作一致 PCR試劑配制 ?按樣本數(shù)加入所需溶液的對應(yīng)量，充分混勻再分裝 對照設(shè)置 ?定性試驗(yàn) 每次試驗(yàn)都必須設(shè)置陰陽性對照 ?定量試驗(yàn) 個(gè)別醫(yī)院要求定量結(jié)果，需增加標(biāo)準(zhǔn)品 （ 10 10 10 108 copies） 標(biāo)準(zhǔn)品一般可以反復(fù)凍融 34次，超過 5次，則不建議使用 標(biāo)準(zhǔn)品置于 20℃ 中保存 操作注意事項(xiàng) ?PCR試劑保存配制 ?PCR試劑應(yīng)放于 20℃ 避光保存 ?PCR試劑應(yīng)避免反復(fù)凍融 ?試劑配制時(shí)不能佩戴有粉手套 ?PCR mix與 Taq酶充分混勻 ?加模板時(shí)應(yīng)避免吸到沉淀 漂浮的雜質(zhì)常粘附于管壁，中間吸樣較安全 ?切勿在 PCR管上做標(biāo)記，但應(yīng)注意樣本順序 ?上機(jī)前應(yīng)離心去除氣泡 ?標(biāo)準(zhǔn)品加樣時(shí)應(yīng)盡量避免加樣誤差，影響標(biāo)準(zhǔn)曲線 儀器檢測通道選擇 乙肝病毒定量產(chǎn)品 ? 對臨床血清標(biāo)本中的乙型肝炎病毒（ HBV）核酸 DNA的 定量檢測 樣本類型 采集方法 ?血清樣本 用無菌注射針頭抽取患者靜脈血 2 ml，于無菌收集管中，室溫放置不超過 4 h， 1500 rpm離心 5 min，吸取血清轉(zhuǎn)入 ml離心管中備用。 ?棉拭子樣本應(yīng)在真空管中保存，要操作前再加生理鹽水 /細(xì)胞保存液進(jìn)行洗脫。 ?泌尿生殖道標(biāo)本 用細(xì)小棉拭子伸入尿道約 24厘米，捻動(dòng)拭子采集上皮細(xì)胞，將棉拭子置入無菌玻璃管，密閉送檢（采集標(biāo)本前 2小時(shí)禁小便）。 DNA提取 取 800ul樣本離心得沉淀 ↓ 加入細(xì)胞裂解液 50ul，煮沸 10min ↓ 12023離心 10min即可上機(jī) 若肉眼未見沉淀，可增加取樣量，再次離心收集沉淀； 若沉淀雜質(zhì)較多，可用細(xì)胞保存液洗滌 12次； 血液多樣本，用蒸餾水洗滌 12次； 粘液多樣本，取樣時(shí)盡量去除粘液。 （防止血液過多，可能會(huì)抑制 PCR反應(yīng)） ?注意避免 交叉污染 。 ?特殊樣本 TCT采集系統(tǒng)樣本 ：可以使用，但可根據(jù)所剩細(xì)胞濃度 競品采樣系統(tǒng)樣本 ：亞能、港龍等采樣系統(tǒng)樣本均可用， HC2采樣系統(tǒng)要確保未經(jīng)過處理方可使用 采樣前注意事項(xiàng) ?不可在 碘試驗(yàn)和醋酸試驗(yàn) 之后采集樣本。 起點(diǎn)定量 終點(diǎn)定量 ? 起始 DNA量：樣本中原有的量，更有意義； ? 終點(diǎn) DNA量：經(jīng) PCR過程加工，不是研究所需要的數(shù)據(jù)； ? 起點(diǎn)定量誤差小，終點(diǎn)定量誤差大。熒光 PCR系列產(chǎn)品 操作培訓(xùn) 一、實(shí)時(shí)熒光 PCR平臺簡介 二
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