植物組織培養(yǎng)實驗室的構(gòu)建與操作技術(shù)(文件)
【正文】 度滅菌 24h； 180200攝氏度滅菌 ） ⑷布質(zhì)制品的滅菌 濕熱滅菌 ⑸無菌操作室的滅菌 ? 2%新潔爾滅或 70%酒精擦拭（噴霧），紫外燈照射，定期甲醛和高錳酸鉀熏蒸。并且溫度一般控制在 25+2℃ 甚至更高。 ⑷無菌 ? 試管苗所在環(huán)境無菌，與外界有菌環(huán)境不同，試管苗也無菌，同時，培養(yǎng)瓶內(nèi)氣體環(huán)境較為特殊，與外界環(huán)境有很大差異。 嫁接移栽法 ? 用試管苗做 接穗 嫁接在同一植物的實生苗上。 說明外植體離體培養(yǎng)中污染的防治措施。 :13:3304:13Feb232Feb23 1故人江海別，幾度隔山川。 2023年 2月 上午 4時 13分 :13February 2, 2023 1行動出成果，工作出財富。 04:13:3304:13:3304:132/2/2023 4:13:33 AM 1成功就是日復(fù)一日那一點點小小努力的積累。 2023年 2月 2日星期四 上午 4時 13分 33秒 04:13: 1楚塞三湘接，荊門九派通。 , February 2, 2023 閱讀一切好書如同和過去最杰出的人談話。勝人者有力，自勝者強。 2023年 2月 2日星期四 4時 13分 33秒 04:13:332 February 2023 1一個人即使已登上頂峰，也仍要自強不息。 2023年 2月 2日星期四 上午 4時 13分 33秒 04:13: 1最具挑戰(zhàn)性的挑戰(zhàn)莫過于提升自我。 :13:3304:13Feb232Feb23 1越是無能的人，越喜歡挑剔別人的錯兒。 2023年 2月 2日星期四 4時 13分 33秒 04:13:332 February 2023 1空山新雨后，天氣晚來秋。 04:13:3304:13:3304:13Thursday, February 2, 2023 1不知香積寺，數(shù)里入云峰。 上午 4時 13分 33秒 上午 4時 13分 04:13: 沒有失敗，只有暫時停止成功！。 :13:3304:13:33February 2, 2023 1他鄉(xiāng)生白發(fā)，舊國見青山。 , February 2, 2023 雨中黃葉樹，燈下白頭人。 ② 適用范圍廣，也適用于弱苗或污染苗 ③ 需時間短， 20天成活，緩苗期 1015天 ④ 植株生長發(fā)育較快 名詞解釋：植物組織培養(yǎng)、愈傷組織、外植體、玻璃化、褐化 2 、說明植物離體培養(yǎng)的培養(yǎng)基制備程序。 原則 ? 逐步調(diào) 節(jié) 溫、濕、光、無菌等環(huán)境要素，循序漸進 馴化方法（煉苗） ? 培養(yǎng)室培養(yǎng) 半遮蔭的自然光，打開瓶蓋（無菌到有菌），注入少量自來水（逐漸降低幼苗溫度） ? 一般進行 12周 三、試管苗的移栽 常規(guī)移栽法 ? 將已誘導(dǎo)出大量根的試管苗，馴化 35天，移到無菌混合土中，當(dāng)長出 23片新葉時，栽到田間或盆缽中。 組織培養(yǎng)出來的苗通稱試管苗或組培苗 ⑵ 高濕 ? 試管瓶內(nèi)水分移動途徑有兩條： 試管苗水分從氣孔蒸騰 培養(yǎng)基向外蒸發(fā)，凝結(jié)后又進入培養(yǎng)基 ? 瓶內(nèi)相對濕度接近 100%，遠(yuǎn)遠(yuǎn)大于瓶外空氣濕度，故 試管苗蒸騰小 。 影響因素 ⑴ 選擇 適宜的外植體 及 最佳培養(yǎng)基 ⑵提高 轉(zhuǎn)管 率 ⑶加 抗氧化劑 （抗壞血酸、 PVP、牛血清白蛋白等） ⑷加 活性炭 %活性炭 褐變的防止措施 ?組培苗外觀形態(tài)呈 半透明狀的生長異常現(xiàn)象 ?葉、嫩梢呈水晶透明或半透明 水浸狀 ；矮小 腫脹失綠 ；葉片皺縮卷曲、 脆弱易碎 ?葉表幾 無角質(zhì)層 蠟質(zhì)，沒有功能性氣孔，不具有柵欄組織，僅有海綿組織 ?體內(nèi) 含水量高 ，干物質(zhì)低， 光合能力和酶活性降低 ，組織畸形 ， 器官功能不全 ，分化能力降低 ?生根困難 ，很難繼續(xù)培養(yǎng)和移栽成活 ⑴ 激素 ： CTK濃度、比例過高（繼代次數(shù)太多） ⑵ 瓊脂 ：瓊脂濃度低（培養(yǎng)基太 “ 稀 ” ） ⑶ 溫度 ： ⑷ 光照 時間：光照太多、太強 ⑸ 通風(fēng) 條件：氣體交換不良 (6)離子 水平：無機離子種類及比例不當(dāng) N 主要原因 ① 提高蔗糖和瓊脂濃度（提高 滲透勢 ） ② 適當(dāng)降低細(xì)胞分裂素和赤霉素濃度，增加生長素比例 ③ 適當(dāng)增加 Ca、 Mg、 Mn、 K、 P、 Fe、 Cu，降低 N（ 銨態(tài)氮 ）和 Cl（ 重選或改良培養(yǎng)基配方 ） ④ 增加 自然光照 ，控制光照時間 812h。 ? 污染途徑：周圍環(huán)境不清潔；超凈工作臺過濾裝置失效；培養(yǎng)瓶的口徑過大 在組織培養(yǎng)過程中培養(yǎng)基和培養(yǎng)材料滋生雜菌，導(dǎo)致培養(yǎng)失敗的現(xiàn)象 污染的預(yù)防措施（ 6點） （１）防止材料帶菌的措施 ? 莖尖作外植體時，進行 預(yù)培養(yǎng) （無糖）或暗培養(yǎng)，以 新抽嫩枝 作外植體。 固體培養(yǎng)中 ， 如瓶塞不透氣 ， 培養(yǎng)物也不能生長 ， 要選擇通氣性好的培養(yǎng)瓶蓋 ， 增加可利用的氧氣 ， 迅速除去釋放出來的CO2， 有利于外植體外層細(xì)胞開始分裂 。 2℃ 。 ? 主要因素： 光照、溫度、濕度、氧氣 １、光照 光照強度 、 光質(zhì)以及光照時間 ， 對細(xì)胞的增殖 、 器官的分化都有很大影響 。 （ 2）將培養(yǎng)基放入超凈工作臺內(nèi)， 火焰灼燒培養(yǎng)基瓶口 ，然后打開培養(yǎng)瓶口，置培養(yǎng)瓶為 斜角 ，避免灰塵雜菌落入瓶中。 最好采用莖尖 ，后代性狀較穩(wěn)定，攜帶細(xì)菌較少。 激素難溶于水，配制母液時用 95%酒精 或 1NHCl， 1NNaOH溶解后再定容。 （３）鐵鹽 硫酸亞鐵 和 EDTA鈉鹽 易沉淀，需單獨配制，配成100— 200倍 鰲合劑 不易沉淀。 ? KM— 8P培養(yǎng)基 有機成分較復(fù)雜，它包括了所有的單糖和維生素，廣泛用于原生質(zhì)融合的培養(yǎng)。 ? White培養(yǎng)基 1963年又作了改良 ， 稱作 White改良培養(yǎng)基 。 完全 培養(yǎng)基：包含使植物離體生長全面營養(yǎng)。 １、培養(yǎng)基種類 ? 根據(jù)作用分： 誘導(dǎo) 培養(yǎng)基：誘導(dǎo)外植體啟動生長。 Growth medium is optimised for regenerat
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