【正文】 材料；③利用連鎖標(biāo)記生產(chǎn)雜交小麥種子等。 可以利用同工酶和核酸限制性片段長度多態(tài)性來檢測導(dǎo)入受體的外源染色體乃至染色體片段，并據(jù)此確定導(dǎo)入的外源染色體與被代換的受體親本染色體之間的部分同源關(guān)系。 （三）利用遺傳控制體系誘導(dǎo)染色體易位 ——ph基因 ? 如在小麥 5BL上的 ph1基因抑制部分同源染色體之間配對，在 5BS上存在染色體配對促進(jìn)基因；還有 3DS上的 ph2基因，以及 3A、 4D、2A等上的一些微效抑制基因。 （五）利用著絲粒融合誘發(fā)易位，以及利用“染色體組重建”基因誘發(fā)易位 ? 在減數(shù)分裂時，兩個非同源的單價染色體同時發(fā)生錯分裂，產(chǎn)生端著絲粒染色體。 ? 不管用什么方法誘導(dǎo)染色體易位，在育種上有用的易位 最好是攜帶有用基因的小片段中間插入易位 ，它們在細(xì)胞學(xué)和遺傳學(xué)上比較穩(wěn)定且容易通過基因重組轉(zhuǎn)入栽培品種并遺傳給后代。如，具有 1RS/1BL易位的許多小麥品種。又由于目標(biāo)染色體片斷 DNA的量很少，或者由于目標(biāo)基因大多數(shù)為單拷貝或寡拷貝，因此，常要借助 PCR技術(shù)。結(jié)合這些染后，再經(jīng)激光照射，染色體就會呈現(xiàn)不同的熒光帶。 顯微激光切割法： 將染色體標(biāo)本在底部貼有特殊薄膜的培養(yǎng)皿上制作，利用 激光共聚焦掃描顯微系統(tǒng)，依靠高能量激光照射非選擇細(xì) 胞或染色體，使其受熱蒸發(fā)，最后只留下目的染色體。 實際研究中常是根據(jù)不同的需要進(jìn)行構(gòu)建。而上述這些人工染色體都是針對基因克隆存在的一些問題而設(shè)計的。 基于 ARS、 CEN、 TEL是線性染色體穩(wěn)定的功能序列 ,人們利用這些序列構(gòu)建載體 , 重組后的 DNA以線性狀態(tài)存在 , 這樣不僅穩(wěn)定 ,而且大大提高了插入外源基因的能力 , 并且可以像天然染色體一樣在寄主細(xì)胞中穩(wěn)定復(fù)制和遺傳，稱為人工染色體。 第六節(jié) 染色體工程和作物育種 一、染色體工程中值得注意的問題 二、應(yīng)用染色體工程方法開展植物育種時應(yīng)注意的幾個方面 一、染色體工程中值得注意的問題 （ 1）外源基因能否在受體中表達(dá)，與受體的遺傳背景有關(guān)。 [復(fù)習(xí)思考題 ]： 染色體工程的概念和主要內(nèi)容是什么？ 單倍體在育種上的優(yōu)勢和不足分別是什么？ 三倍體無子西瓜是怎么形成的？ 如何應(yīng)用單體缺體進(jìn)行基因定位？ 三級三體大麥的保持和利用。 二、應(yīng)用染色體工程方法開展植物育種時應(yīng)注意的幾個方面 ? 染色體工程的產(chǎn)品主要是新的遺傳種質(zhì)而不是品種，在創(chuàng)造出新的遺傳種質(zhì)之后，還必須通過常規(guī)育種方法或綜合其它育種方法將外源基因組裝到綜合農(nóng)藝性狀好的親本中去。 酵母人工染色體的構(gòu)建 是基于大腸桿菌的 F 質(zhì)粒構(gòu)建的，高通量低拷貝的質(zhì)粒載體。 將 3個關(guān)鍵序列用分子生物學(xué)方法拼接起來就得到人造微小染色體（ artificial minichromosome），在大片段 DNA分子的克隆、基因組分析、基因功能鑒定、基因治療以及研究染色體結(jié)構(gòu)與功能關(guān)系等研究中得到了廣泛的應(yīng)用，具有極為重要的價值。細(xì)菌人工染色體（ BAC）和 P1克隆系列和源于 P1的 PAC可作為 YAC的重要補(bǔ)充，但它們都不能直接轉(zhuǎn)化植物細(xì)胞。它需要 3個關(guān)鍵序列，包括 自主復(fù)制 DNA序列 （ autonomously replicating sequence，ARS）、 著絲粒 DNA序列 （ centromere DNA sequence， CEN)和 端粒 DNA序列（ telomere DNA sequence, TEL）。 Chromosomes of Chinese Spring stained with Carbo Fuchsin ,One of chromosome 6B indicated in A was microdissected into R1,R2,R3 and R4 sections (B) Bar represents 10181。 染色體分離的基本原理 由于熒光染料 Hoechst 只對 AT特異性染色，而染料Chromomycin只對 GC特異性染色。 第五節(jié) 染色體微切割和人工染色體 一、染色體微切割 二、人工染色體構(gòu)建的依據(jù) 一、染色體微切割 ? 指在顯微鏡下利用特種工具對某個特定的染色體片斷切割加工。使用的方法通常是染色體分帶、分子原位雜交、生化標(biāo)記和分子標(biāo)記等。 ? “染色體組重建”基因能誘發(fā)高頻率的染色體斷裂和重接。 （四）利用殺配子基因誘導(dǎo)染色體易位 ? 所謂殺配子基因，乃是當(dāng)載有這些基因的染色體處于半合雜合狀態(tài)時，不含該染色體的雌雄配子無受精能力，而這些染色體自身則優(yōu)先傳遞。 一、誘導(dǎo)染色體片段轉(zhuǎn)移的方法 （一）輻射誘導(dǎo)易位，最常用的電離輻射。通常發(fā)生在同一個部分同源群內(nèi)的不同染色體之間，又分為單體異代換系、二體異代換系等，根據(jù)代換的染色體不同，可分為同種染色體的代換和異種染色體的代換，同種染色體的代換系通常可以直接作為品種使用，而異種染色體的代換系通常是轉(zhuǎn)移有利基因的有效的中間材料。 （ 2）異附加系的鑒定： 形態(tài)標(biāo)記染色體計數(shù)和染色體構(gòu)型分析、 染色體分帶、 生化標(biāo)記（同工酶和蛋白質(zhì)）、 分子標(biāo)記、 原位雜交等方法鑒定異附加系。 谷子四體 異種染色體的添加 —— 異附加系 ? 異附加系：添加有外源染色體的個體。（但較復(fù)雜） 二、染色體的添加 ? 一個種的染色體組經(jīng)過雜交或其它方法導(dǎo)入同種或異種染色體叫染色體的添加。 例如，已知某植物的某對性狀是由 A和 a一對基因控制的，而且已獲得該植物的所有單體或缺體，用單體法或缺體法確定 A（ a）基因所在的染色體。因此，單體植株的保存很困難。 七、多倍育種中存在的問題 ? 準(zhǔn)確的處理時間； ? 誘導(dǎo)率、成活率及孵化率的提高； ? 準(zhǔn)確可靠的倍性鑒定方法的確定。生產(chǎn)上可以利用這個不育特性，將生殖腺發(fā)育消耗的能量用于動物生長上，避免因繁殖季節(jié)及肉質(zhì)下降而延誤上市時間或影響商品價值，也避免了生長停滯和死亡率的增高，縮短了養(yǎng)殖周期、減少了養(yǎng)殖成本，可養(yǎng)成大型個體。 六、多倍體動物的應(yīng)用及發(fā)展趨勢 ? 多倍體動物的生活力及生長能力。 ? 蛋白質(zhì)電泳： ? 生化分析：如在關(guān)東系銀鯽中，三倍體紅血球的丙酮酸激酶的含量含著高于二倍體。 化學(xué)方法 ? 細(xì)胞松馳素 B：能抑制肌動蛋白聚合成微絲，從而抑制細(xì)胞質(zhì)分裂。此法廉價、易操作，是誘導(dǎo)動物細(xì)胞多倍體化的常用手段，也有利于養(yǎng)殖場大規(guī)模生產(chǎn)使用。 典型例子：三倍體無籽西瓜 二倍體西瓜（ BB 2n＝ 2x＝ 22） %秋水仙素處理生長點 四倍體西瓜（ BBBB）♀ 二倍體西瓜♂ 三倍體西瓜（ BBB） （ *不育，不結(jié)籽， 在外界花粉刺激下可結(jié)實 ） 四、人工誘導(dǎo)多倍體的方法 生物學(xué)方法 ? Rasch等（ 1965）年首次證明了三倍體脊椎動物可以通過雜交產(chǎn)生，他們將雌核發(fā)育的二倍體帆鱂（ Poecilia formosa）與，得到三倍體后裔。如：小麥、燕麥、棉花等 ? 典型的例子是普通小麥和小黑麥 一粒小麥（ AA） 2n＝ 14 ？（ BB） AB