多肽與蛋白質(zhì)類藥物(文件)
【正文】 工藝 胰島素制劑及結(jié)構(gòu)修飾 胰島素制劑： 按其作用時間分為速效、中效和長效； 給藥系統(tǒng)的不同分為眼用膜劑、鼻腔給藥的氣霧劑、直腸用栓劑、口服劑（脂質(zhì)體、微囊、乳劑等）。 ②胰糜含水量約 60％，第 1次提取用 86％乙醇，與胰糜混合后其最終體積分?jǐn)?shù)為70％左右，此體積分?jǐn)?shù)不僅能完全溶解胰島素，而且能抑制蛋白水解酶的活力。 ④提取溫度一般控制在 10～ 15℃ ，也有在室溫下進(jìn)行的對溫度不加控制，溫度偏高會增強(qiáng)酶對胰島素的破壞作用，會使油脂含量增加，影響分離工序。 ⑦ 濃縮除去乙醇后 ， 油脂與水呈乳濁液 ， 采取速熱速冷 ， 先熱后冷 ， 可將乳濁液破壞分成兩相 ， 分離油脂 ， 也可除去部分雜蛋白從油脂中回收胰島素 ， 用 3％ 氯化鈉蒸餾水洗滌 ， 有利油脂上浮 ， 易于分離 。 ② 鹽酸對胰島素提取有利 ， 但易使組織膠化 ， 造成過濾困難 ， 單用硫酸雖能克服膠化現(xiàn)象 ． 但提取量低 ， 用量大 ， 在加入氯化鋅時則生成溶解度較小的硫酸鋅 ， 消耗鋅離子 。 2022/10/23 生物制藥工藝學(xué) —— 多肽與蛋白質(zhì)類藥物 20 重組人紅細(xì)胞生成素生產(chǎn)工藝 種類 紅細(xì)胞生成素 （ erythropoietin， EPO） 對紅細(xì)胞生成的特異性刺激作用的細(xì)胞因子 。目前已知人紅細(xì)胞生成素有兩種存在形式 ， 即人 EPOα及人 EPOβ， 二者差別在于二者的糖型組成不同 ， EPOα含有較多的 N乙酰氨基葡萄糖和 N乙酰神經(jīng)氨酸， 總的含糖量也較 EPOβ高 。 成熟的紅細(xì)胞生成素是由 165個氨基酸殘基組成的糖蛋白 ， 糖基化位點(diǎn)為 Asn2Asn2 Asn83和 Ser126,有 2對半胱氨酸組成的二硫鍵 (Cys7Cys61和 Cys29Cys33)， 分子量為 34～ 36 ku (SDSPAGE)、 ku(超濾 )或 60 ku（ 凝膠電泳 ） 。 理化性質(zhì) 2022/10/23 生物制藥工藝學(xué) —— 多肽與蛋白質(zhì)類藥物 22 重組人紅細(xì)胞生成素生產(chǎn)工藝 表達(dá)系統(tǒng) ?Jacob等從 λ 噬菌體 cDNA文庫中篩選得到了編碼紅細(xì)胞生成素的 cDNA片段 ， 以此構(gòu)建了 SV40病毒啟動子驅(qū)動表達(dá)的載體 ， 在猴腎纖維母細(xì)胞COS1中進(jìn)行瞬時表達(dá) ， 測得了紅細(xì)胞生成素的生物活性 。 故現(xiàn)在工業(yè)生產(chǎn)中多采用動物細(xì)胞培養(yǎng)表達(dá)紅細(xì)胞生成素進(jìn)行大規(guī)模生產(chǎn) 。 將人紅細(xì)胞生成素基因與表達(dá)質(zhì)粒重組，導(dǎo)入哺乳動物細(xì)胞，經(jīng)篩選得到表達(dá)人紅細(xì)胞生成素的細(xì)胞株。 2022/10/23 生物制藥工藝學(xué) —— 多肽與蛋白質(zhì)類藥物 24 重組人紅細(xì)胞生成素生產(chǎn)工藝 構(gòu)建表達(dá)紅細(xì)胞生成素的細(xì)胞株 以二氫葉酸還原酶缺陷型的中國倉鼠卵巢細(xì)胞系（ CHO dhfr）為宿主細(xì)胞。 （ 4）細(xì)胞消化后接種，接種的細(xì)胞濃度約為 106個 /ml?？刂茥l件 ，攪拌轉(zhuǎn)速 50 r/min， 37℃ ， DO 50%～ 80%，進(jìn)行貼壁培養(yǎng)。 2022/10/23 生物制藥工藝學(xué) —— 多肽與蛋白質(zhì)類藥物 26 重組人紅細(xì)胞生成素生產(chǎn)工藝 培養(yǎng)工藝控制 攪拌速度： 先慢后快 溫度： 恒定的溫度 (37℃) pH值： 細(xì)胞生長與表達(dá)的 pH值為 ~。此外還應(yīng)監(jiān)測氨、乳酸鹽類等代謝廢物在培養(yǎng)基中的含量，維持在較低的濃度，減少對細(xì)胞損害。 ④收集活性洗脫峰 10 mmol/L Tris透析液透析過夜。 ④上凝膠柱（預(yù)先用 20 mmol/L檸檬酸鹽緩沖液平衡）， 20 mmol/L檸檬酸鹽緩沖液平衡并洗脫，收集活性洗脫峰（紅細(xì)胞生成素）。 各種激素對人體新陳代謝內(nèi)環(huán)境的恒定 ， 器官之間的協(xié)調(diào)以及生長發(fā)育等起調(diào)節(jié)作用 。 內(nèi)分泌腺是一種無管腺 ， 其所分泌的活性物質(zhì)稱為激素， 激素由腺細(xì)胞釋放入毛細(xì)血管和毛細(xì)淋巴管 ， 隨血液循環(huán)運(yùn)送到全身各器官和組織 ， 從而發(fā)揮其生理作用 。 ② 0～ 1 mol/L NaCl Tris洗脫液梯度洗脫，收集活性洗脫峰。 ②收獲培養(yǎng)基濾膜過濾后上 CM親和層析柱，平衡緩沖液平衡。） 氧濃度： 溶解氧應(yīng)在 10％ ~100％的范圍內(nèi)。 （ 4）更換為無血清合成培養(yǎng)基，由軟件控制溫度、溶氧、 pH值等培養(yǎng)條件，進(jìn)行連續(xù)灌流培養(yǎng)。 （ 2）將反應(yīng)器接入主機(jī)，連接氣體，校正電極，排出 P
環(huán)評公示相關(guān)推薦
鄂ICP備17016276號-1