基因工程的基本操作程序新(文件)
【正文】 一般用于目的基因比較小，且序列又已知 ) 思考： 人工合成的目的基因 和 真正的基因 之間的序列是否是完全一致的？ 二、基因表達(dá)載體的構(gòu)建 —— 基因工程的 核心 目的： 使目的基因在受體細(xì)胞中穩(wěn)定存在，并且可以遺傳給下一代 ，同時(shí)使目的基因能夠表達(dá)和發(fā)揮作用。 ④ 目的基因不能單獨(dú)進(jìn)入受體細(xì)胞， 必需以表達(dá)載體的方式攜帶進(jìn)去?？茖W(xué)家又在有啟動子、抗蟲基因的質(zhì)粒中插入 終止子 (抗蟲基因末端 )后，導(dǎo)入棉花受精卵，結(jié)果長成的植株，有了抗蟲能力。 適用于 單子葉植物 （ 3）花粉通道法 植物花粉在柱頭上萌發(fā)后，花粉管要穿過花柱直通 胚囊 。 基因探針通過分子雜交與目的基因結(jié)合，產(chǎn)生雜交信號，能從浩翰的基因組中把目的基因顯示出來。 怎樣檢驗(yàn)抗蟲基因在棉細(xì)胞內(nèi)是否表達(dá)呢？ 沒有抗蟲基因 的棉植株 有抗蟲基因的棉植株 棉鈴蟲 蟲沒有死 蟲被殺死 沒有表達(dá) 目的基因表達(dá) （二）鑒定（個(gè)體生物學(xué)水平） 抗蟲鑒定、抗病鑒定、活性鑒定等 ， 錯(cuò)誤的是 （ ） A、 DNA連接酶將黏性末端的堿基對連接起來 B、 限制性內(nèi)切酶用于目的基因的獲得 C、 目的基因須由運(yùn)載體導(dǎo)入受體細(xì)胞 D、 人工合成目的基因不用限制性內(nèi)切酶 A 隨堂練習(xí) （ ） A、 限制酶只在獲得目的基因時(shí)才用 B、 重組質(zhì)粒的形成在細(xì)胞內(nèi)完成 C、 質(zhì)粒都可作為運(yùn)載體 D、 蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)可為合成目的基因提供資料 D DNA分子水平上進(jìn)行設(shè)計(jì)施工的 。（填“ a”或“ b”） a a 為擴(kuò)大可耕地面積，增加糧食產(chǎn)量，黃河三角洲等鹽堿地的開發(fā)利用備受關(guān)注。 （ 4）為了確定耐鹽轉(zhuǎn)基因水稻是否培育成功，既要用放射性同位素標(biāo)記的 作探針進(jìn)行分子雜 交檢測，又要用 方法從個(gè)體水平鑒定水稻植株的耐鹽性。 （ 2）將重組 DNA分子導(dǎo)入水稻受體細(xì)胞的常用方法有農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法和 法。我國科學(xué)家應(yīng)用耐鹽基因培育出了耐鹽水稻新品系。 檢測目的基因是否轉(zhuǎn)錄出了 mRNA ①方法 : 分子雜交（ DNA和 RNA之間） ②過程 :用上述探針和轉(zhuǎn)基因生物的 mRNA雜交,若出現(xiàn)雜交帶 ,表明目的基因轉(zhuǎn)錄出了 mRNA。 適用于 被子植物 將目的基因?qū)雱游锛?xì)胞 方法 : 顯微注射技術(shù) 操作程序 : 提純含目的基因表達(dá)載體 動物的受精卵 顯微注射 移植到代孕母體的子宮 胚胎發(fā)育 新性狀動物胚胎早期培養(yǎng) 轉(zhuǎn)入生長素基因 新性狀動物 將目的基因?qū)胛⑸锛?xì)胞 常用法 ： Ca2+處理法 /CaCl2法 /感受態(tài)細(xì)胞法 常用菌 ：大腸桿菌 微生物作受體細(xì)胞原因： 繁殖快 、多為單細(xì)胞、遺傳物質(zhì)相對少 過程： Ca2+處理大腸桿菌 感受態(tài)細(xì)胞 表達(dá)載體與感受態(tài)細(xì)胞混合 感受態(tài)細(xì)胞吸收DNA 思考：為什么要用 Ca2+處理受體細(xì)胞？ 用 Ca2＋ 處理，增加細(xì)菌細(xì)胞壁的通透性 四、目的基因的檢測與鑒定 ? 檢測 : ? 是否插入目的基因 ? 是否轉(zhuǎn)錄 ? 是否翻譯 ? 鑒
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