基因工程載體人工染色體載體(文件)
【正文】 侵染性具有寄主特異性 ? 改建： 野生型最多只能包裝其基因組長度的 DNA分子 ? 其他： 痘苗病毒 DNA作載體，表達(dá)乙肝表面抗原 用家蠶的核多角體病毒表達(dá)人 α 干擾素 SV40作為克隆載體有其局限性： ① SV40基因組的晚期功能區(qū)的裂解性，不利于外源 DNA的重組和表達(dá)； ②早期功能區(qū)與病毒的致癌性有關(guān)，使用時有顧慮； ③重組 DNA片段的大小受體限制。它在猴腎中增殖。使載體及其攜帶的外來序列能方便地在細(xì)菌中繁殖和克隆，然后再引入真核細(xì)胞。構(gòu)建的含35S啟動子的系列克隆載體可在植物細(xì)胞內(nèi)高效表達(dá)基因。該區(qū)中含有與毛狀根形成有關(guān)的 rolA、 B、 C、 D基因群。 ?Ri質(zhì)粒的結(jié)構(gòu)與 Ti質(zhì)粒的結(jié)構(gòu)很相似，可以分為 T區(qū)、 vir區(qū)、 ori區(qū)和其它區(qū)域等幾個部分。 （ 2）共整合載體（ integrated vector） 共整合載體系統(tǒng)包括在 TDNA上的激素合成區(qū)經(jīng)過突變后的 Ti質(zhì)粒和中間載體兩部分。 ?在有關(guān)的植物細(xì)胞酶體系的催化作用下，合成互補(bǔ)鏈形成雙鏈形式的 TDNA分子。 （ 3） Con區(qū) (regions encoding conjugations) 該區(qū)段上存在著與細(xì)菌間接合轉(zhuǎn)移的有關(guān)基因（ tra），調(diào)控 Ti質(zhì)粒在農(nóng)桿菌之間的轉(zhuǎn)移 。 ? TDNA區(qū)域內(nèi)的所有基因與轉(zhuǎn)移無關(guān) ， 所以將致瘤基因全部缺失即卸甲 (disarmed)后， 將細(xì)菌抗生素的抗性基因或其它序列插入到這個區(qū)域 ， 形成的 TDNA仍可將 RB至 LB內(nèi)的序列轉(zhuǎn)移并整合到植物基因組 。 ?TDNA兩端各有一段 25bp的重復(fù)序列 (LB, RB)。 25個堿基對的序列稱為 TDNA的邊界序列 (TDNA border sequence)。 ◆ 帶有外源片段的 BAC載體在細(xì)菌細(xì)胞中通常僅單個拷貝，這一特點(diǎn)有利于保持 DNA大分子，在細(xì)胞內(nèi)穩(wěn)定復(fù)制而不發(fā)生重組。 （ 4）克隆位點(diǎn) 插入失活選擇： SUP4酶失活的酵母菌落呈 紅色； 不失活的菌落是白色。 正常酵母人工染色體含有： * 四膜蟲端粒（ tel) * 酵母自主復(fù)制序列（ ARS) * 酵母著絲點(diǎn) (CEN) * 酵母的選擇標(biāo)記 (TRPURA1) YAC載體 the capacity to clone large exogenous DNA fragments (up to 2 Mb) has made YACs a vital tool in physical mapping The functional elements of a yeast chromosome （ 1）著絲粒區(qū)（ CEN） A A GTCACGTG T TGTTTCTGNTTTCCGAAA YAC的組成結(jié)構(gòu) 酵母染色體著絲粒區(qū)的保守序列 : 7886bp I II III 由三個區(qū)組成 酵母端粒保守序列是 (G4T2)n 重復(fù)序列。第三節(jié) 其他載體 其他載體 ? 一、人工染色體 ? 二、植物基因工程載體 ? 三、動物基因工程載體 一、人工染色體 人基因組十分龐大，約含 4 109bp，建立和篩選人的基因組文庫，要求有容量更大的載體，酵母人工染色體（yeast artificial chromosome,YAC）載體應(yīng)運(yùn)而生。 ◆ YAC可以接受 1001000 kb的外源 DNA片段，這一特點(diǎn)使 YAC成為人類基因組計(jì)劃及圖位克隆分離基因的重要工具，并促進(jìn)了發(fā)展人類人工染色體 (human artificial chromosome，HAC)的研究。 位于 SUP4 基因內(nèi)部。將 F因子經(jīng)基因工程改良構(gòu)成的 BAC載體，可用于克隆 100 kb以上的 DNA片段。 ? 結(jié)構(gòu)特點(diǎn)：兩端具有 25個堿基對的順向重復(fù)序列，但重復(fù)不是完全的。長度約 35kb，和 TDNA處于不同位置 植物 Ti質(zhì)粒載體 （ 1） TDNA區(qū)（ transferredDNA regions） TD
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