《糖基化工程》ppt課件(文件)
【正文】 ,而無(wú)雜合型糖鏈。此外，哺乳動(dòng)物細(xì)胞中存在著 α 2， 6唾液酸轉(zhuǎn)移酶，而植物細(xì)胞無(wú)此酶，故其糖鏈結(jié)構(gòu)上也無(wú)唾液酸成分。然而．哺乳動(dòng)物細(xì)胞株在糖基化的機(jī)制上，與人類組織仍然有顯著的差異。 在特定的條件下，中國(guó)倉(cāng)鼠卵巢 (CHO)細(xì)胞株和鼠類細(xì)胞株重組能夠產(chǎn)生一種寡聚糖抗體，這種寡聚糖抗體帶有 N羥乙酞基神經(jīng)氨酸（ NeuGc)殘基或者。采用 ICH一生物技術(shù)產(chǎn)品標(biāo)準(zhǔn)規(guī)格以確保每批產(chǎn)品都發(fā)生連續(xù)的人類糖基化反應(yīng)，這樣可以大大降低生物技術(shù)產(chǎn)品的安全性隱患和療效隱患。我們知道，生物膜中含有一定量的糖類，主要以糖蛋白和糖脂的形式存在。另一方面，凝集素具有多價(jià)結(jié)合能力，能與 熒光素 、 生物素 、 酶 、膠體金和 鐵蛋白 等示蹤物結(jié)合，從而在光鏡與 /或電鏡水平顯示其結(jié)合部位。 一種凝集素具有對(duì)某一種特異性糖基專一性結(jié)合的能力，如刀豆素與 α — D— 吡喃糖基甘露糖（ α — D—Mannopyranosy）結(jié)合；麥芽素與 N— 乙酰糖胺（ N—acetyl glucosamine）結(jié)合；菜豆凝集素與 N— 乙酰乳糖胺結(jié)合（見(jiàn)本章 表 6— 1）。凝集素具有一個(gè)以上同糖結(jié)合的位點(diǎn)，因此能夠參與細(xì)胞的識(shí)別和粘著 ,將不同的細(xì)胞聯(lián)系起來(lái)。 此外，那些發(fā)生異常糖基化批次的產(chǎn)品可能產(chǎn)生非標(biāo)準(zhǔn)化的治療效果。故某些鼠源細(xì)胞株合成的末端 α1 ， 3Gal糖鏈，在人體內(nèi)可引起免疫反應(yīng)。同樣的，對(duì)植物中表達(dá)的重組蛋白進(jìn)行改造 (使之帶有滯留信號(hào)序列 )，能讓其留在內(nèi)質(zhì)網(wǎng)中，避免進(jìn)入高爾基體被植物系統(tǒng)糖基化； (2)利用基因工程技術(shù)，使植物高爾基體中糖基轉(zhuǎn)移酶突變 [knockout)或增添新酶，然后讓糖蛋白最終貯存在如液泡或非原質(zhì)體中。 如植物復(fù)雜型糖鏈包括 α1→3Fuc ，哺乳動(dòng)物中主要為αl→6Fuc ；另外植物五糖核心結(jié)構(gòu)上連 → 接了 β1→2Xyl ，而哺乳動(dòng)物中無(wú) Xyl糖基修飾方式。 在植物中，序列子 AsnXSer／ Thr中 Asn，與哺乳動(dòng)物一樣，是作為 N糖鏈接受體。而一個(gè)甘露糖合成途徑的雙突變株，可表達(dá)非免疫原性、非過(guò)度糖基化的重組蛋白。此外，酵母表達(dá)系統(tǒng)還可在蛋白糖鏈上添加 α l， 3甘露糖基，井因此抗原表位而在人體內(nèi)引起強(qiáng)烈的免疫反應(yīng)。另外，由于其較低的轉(zhuǎn)化效率，基因背景了解不充分，以及細(xì)胞外大量分泌蛋白酶的存在，使得異源蛋白的表達(dá)較為困難。另外，已出現(xiàn)將幾種關(guān)鍵性的糖基轉(zhuǎn)移酶克隆進(jìn)大腸桿菌中共表達(dá)，重新構(gòu)建重組糖蛋白表面糖鏈結(jié)構(gòu)的報(bào)道。還有研究證實(shí)糖基化可以降低病毒的免疫原性。很少量病例對(duì) rhEPO產(chǎn)生的抗體也能識(shí)別而中和內(nèi)源性 EPO導(dǎo)致抗體介導(dǎo)的單純紅細(xì)胞再生障礙 (PRCA)。由于血漿半衰期提高了 2倍，單劑量注射的情況下，糖基化 IL3刺激骨髓中組氨酸羧化酶的活性比非糖基化的 IL3提高了 30%一 40 % 。 糖基化和高糖基化蛋白在體內(nèi)活性的增強(qiáng)是由于血漿半衰期或者循環(huán)駐留時(shí)間的延長(zhǎng)。 當(dāng)藥物每周僅注射一次的時(shí)候這種差別擴(kuò)大到了 13倍。就胞內(nèi)的信號(hào)而言， rhEPO和 DA的反應(yīng)動(dòng)力學(xué)和反應(yīng)量相當(dāng)，說(shuō)明加成的糖并沒(méi)有鈍化生物學(xué)效應(yīng)。例如粘蛋白是高度 O一連接糖基化的，因?yàn)樗鼈冇泻芨叩耐僖核岷慷尸F(xiàn)凝膠樣的性質(zhì)。然而，糖基化的 rhEPO卻表現(xiàn)為可逆性的折疊并且仍然可溶。糖也可使暴露于熱環(huán)境中的白細(xì)胞介素一 5（ IL5）的分子構(gòu)象穩(wěn)定。 物理性質(zhì) 穩(wěn)定性是治療蛋白最重要的性質(zhì)，而糖基化在維持蛋白分子完蔡性上起著重要的作用。 糖基化對(duì)治療蛋白性質(zhì)的影響 治療蛋白革命性地改變了很多疾病的治療結(jié)果，但體內(nèi)活性低和
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