【正文】 微細(xì)胞 微細(xì)胞沉淀 線性梯度 BSA懸浮 分別離心 微細(xì)胞 細(xì)胞工程 染色體轉(zhuǎn)移 微細(xì)胞與受體細(xì)胞融合 微細(xì)胞（百萬(wàn)個(gè)） 含植物凝集素 P的無(wú)血清培養(yǎng)基 受體細(xì)胞 吸去植物凝集素 P 加 PEG1540 （ 30% ~50%） 吸去 PEG液 無(wú)血清培養(yǎng)基洗滌 3次 加完全培養(yǎng)基，胰酶消化 收獲離散細(xì)胞 分裝培養(yǎng)瓶 選擇培養(yǎng)基篩選 細(xì)胞工程 染色體轉(zhuǎn)移 懸浮液 細(xì)胞凝集 37 ℃ 10~15min 1 min 16~24h， 37 ℃ 細(xì)胞工程 動(dòng)物細(xì)胞工程 人類干細(xì)胞研究 干細(xì)胞（ stem cell）簡(jiǎn)介 ?干細(xì)胞是動(dòng)物（包括人）胚胎及器官中具有 自我復(fù)制 和 多向分化潛能 的原始細(xì)胞，能分裂、產(chǎn)生出表現(xiàn)型和基因型都和自己完全相同的子細(xì)胞，同時(shí)還能分化為各類 祖細(xì)胞 ，是重建、修復(fù)病損或衰老組織、器官功能的理想種子細(xì)胞。 …… 人類干細(xì)胞研究給 21世紀(jì)醫(yī)學(xué)的革命性發(fā)展帶來(lái)可能 ， 因此總的平衡利弊 ， 還是要支持 ” 。 ? 天津臍帶血庫(kù)還在國(guó)內(nèi)首創(chuàng)了自體血儲(chǔ)存，并創(chuàng)建公共儲(chǔ)存與自體儲(chǔ)存相結(jié)合模式，已在全國(guó) 19個(gè)省市建立 70多家分公司和工作站，儲(chǔ)存新生兒臍帶血干細(xì)胞 3萬(wàn)余份，為數(shù)十位患者提供了移植供體。 細(xì)胞工程 干細(xì)胞簡(jiǎn)介 獲得干細(xì)胞系 這是本研究最重要的第一步。 ? 干細(xì)胞能夠在這種 “ 腳手架 ” 上生長(zhǎng)、繁殖并分化成腦細(xì)胞。 胚胎干細(xì)胞 細(xì)胞工程 人類干細(xì)胞研究 胚泡中的胚胎干細(xì)胞 ? 受精后 5~7天，胚胎由大約 140個(gè)細(xì)胞組成，呈空心圓球狀，即 胚泡。 細(xì)胞工程 胚胎干細(xì)胞 桑椹胚 (囊胚 ) 細(xì)胞工程 胚胎干細(xì)胞 人早期胚胎 ——囊胚 細(xì)胞工程 胚胎干細(xì)胞 胚胎干細(xì)胞的特征 ?飼養(yǎng)層依賴的 ?有抑制因子存在時(shí)呈未 分化狀態(tài) ?無(wú)抑制因子存在時(shí)可被 誘導(dǎo)成各種細(xì)胞 ?懸浮培養(yǎng)時(shí)可形成擬胚 體，并有序分化 細(xì)胞工程 胚胎干細(xì)胞 胚胎干細(xì)胞的培養(yǎng) ? 將胚胎干細(xì)胞置于滋養(yǎng)層上； ? 放入 CO2（ 5%）培養(yǎng)箱中， 37~39℃, 飽和濕度； ? 培養(yǎng)液： DMEM + 15%胎牛血清 +LIF+EGF（表皮生長(zhǎng)因子） +IGF（胰島素樣生長(zhǎng)因子） +胰島素 +β 巰基乙醇。 細(xì)胞工程 胚胎干細(xì)胞 中國(guó)建立人胚胎干細(xì)胞 ? 2022年 10月廣州中山大學(xué)附屬第二醫(yī)院黃紹良教授等在國(guó)內(nèi)首次建立三個(gè)中國(guó)人胚胎干細(xì)胞系 CHE CHE2和 CHE3，并采用分階段方法成功誘導(dǎo)小鼠胚胎干細(xì)胞發(fā)育成造血干細(xì)胞。 細(xì)胞工程 造血干細(xì)胞 骨髓庫(kù) ? 建立骨髓庫(kù)是造血干細(xì)胞移植的必然需要； ? 美國(guó)骨髓供者庫(kù)是世界最大的骨髓庫(kù)，已有注冊(cè)志愿者 500多萬(wàn)人； ? 歐洲，約 300萬(wàn)份； ? 日本， 18萬(wàn)份； ? 臺(tái)灣骨髓捐贈(zèng)中心已有志愿者 24萬(wàn)人。植入的組織最終發(fā)育成只有普通大白鼠腎臟 1/10大小的人體腎臟組織。 細(xì)胞工程 造血干細(xì)胞 造血干細(xì)胞移植供者來(lái)源難題破解 ? 2022年 1月 8日，北京大學(xué)人民醫(yī)院報(bào)道：他們已建立了“ HLA不合造血干細(xì)胞移植技術(shù)體系 ” ，使六個(gè)位點(diǎn)中部分不合者也獲得治療機(jī)會(huì)。 ? 迄今采用該配型不合技術(shù)體系，完成 HLA不合移植 300多例，總體生存率達(dá)到 60％～ 70％。 細(xì)胞工程 造血干細(xì)胞 外周血干細(xì)胞移植治療下肢缺血性疾病 ? 2022年 8月國(guó)家干細(xì)胞工程技術(shù)研究中心主任韓忠朝教授報(bào)道，在國(guó)際上率先開展外周血干細(xì)胞移植治療下肢缺血性疾病的研究，建立了一個(gè)安全有效、簡(jiǎn)單經(jīng)濟(jì)的新方法。 ? 臍帶血造血干細(xì)胞移植時(shí)雙方的白細(xì)胞組織相容性抗原無(wú)須完全相合， 同胞間有 75％的機(jī)會(huì)適合移植，非親屬間適合移植的機(jī)會(huì)相對(duì)較多，并且手術(shù)后也較少發(fā)生排異反應(yīng)。 細(xì)胞工程 造血干細(xì)胞 臍帶血干細(xì)胞修復(fù)脊髓 ? 2022年 12月，一名癱瘓長(zhǎng)達(dá) 20年的韓國(guó)女子黃美順，在韓國(guó)科學(xué)家用臍帶血修復(fù)她受損的脊髓后，又重新獲得站立和蹣跚行走的能力。 細(xì)胞工程 造血干細(xì)胞 臍血庫(kù)建造 “ 生命銀行 ” 臍血庫(kù)被稱做 “ 生命的銀行 ” ，至 2022年 7月北京臍血庫(kù)已經(jīng)存儲(chǔ) 1萬(wàn)多例臍血。 細(xì)胞工程 其他干細(xì)胞研究 神經(jīng)干細(xì)胞治腦癱 ? 2022年 6月 6日海軍總醫(yī)院宣布為一名剛出生 70多天的腦癱患兒娜娜進(jìn)行神經(jīng)移植手術(shù)取得了成功。 細(xì)胞工程 其他干細(xì)胞研究 干細(xì)胞形成腦組織 ?2022年 10月韓國(guó)與美國(guó)的科學(xué)家把干細(xì)胞置于可被吸收的生化塑料小架子上，再放到受中風(fēng)嚴(yán)重破壞的老鼠腦部。 細(xì)胞工程 其他干細(xì)胞研究 干細(xì)胞治尿失禁 ? 2022年 10月，奧地利因斯布魯克醫(yī)科大學(xué)科學(xué)家報(bào)告說(shuō)，他們從 20名患有尿失禁癥女性的手臂取干細(xì)胞，培養(yǎng) 6周后，借助超聲波三維顯示，將干細(xì)胞注入她們的尿道和括約肌。幾乎囊括了胰腺、肝臟與肺在內(nèi)的所有內(nèi)臟器官細(xì)胞。 。 ? 關(guān)鍵在于，科學(xué)家成功地將胚胎干細(xì)胞轉(zhuǎn)變?yōu)橐环N 內(nèi)臟原始細(xì)胞 。一年之后，其中 18名患者都能自控小便。受損的部位已經(jīng)大部分恢復(fù)。 17天后，娜娜會(huì)笑了，眼神靈活了，可以玩撥浪鼓，還能認(rèn)出媽媽，智力發(fā)育已經(jīng)追上了同齡嬰兒。 細(xì)胞工程 人類干細(xì)胞研究 其他干細(xì)胞研究 干細(xì)胞長(zhǎng)成牙冠 ?2022年 9月美國(guó)波士頓弗西斯研究中心從小豬體內(nèi)提取牙齒干細(xì)胞，用酶催化后，放入可降解牙模中，再植入小鼠腹部。 1998年存有 8 700份， 2022年約存有 80 000份臍血。 ? 目前治療嚴(yán)重肝病只能依靠肝臟移植，但肝臟的來(lái)源得不到保證；用人體胚胎干細(xì)胞生成肝細(xì)胞正在研究之中，但存在倫理方面的爭(zhēng)議。 細(xì)胞工程 造血干細(xì)胞 臍血干細(xì)胞 ?臍帶血的優(yōu)點(diǎn)： ? 含豐富的造血干細(xì)胞和（或）祖細(xì)胞（約 1%，與骨髓相同，為外周血的 12～ 16倍）； ? 免疫原（抗原）性較弱（主要含不成熟 T細(xì)胞）； ? 增殖快，集落形成率高； ? 所需細(xì)胞數(shù)少； ? 來(lái)源廣泛。 ?缺點(diǎn)： 細(xì)胞少，僅占外周血有核細(xì)胞的 %～%，相當(dāng)于骨髓干細(xì)胞的 1%~ 10%；操作較復(fù)雜；要有一定條件和設(shè)備；費(fèi)用比骨髓干細(xì)胞移植高。 ? 他們已使 3/6相合的親屬間骨髓移植成為常規(guī)。等大網(wǎng)膜內(nèi)的血管延伸到移植組織后，這些組織就能過(guò)濾尿液。 ? 兩天后，人體干細(xì)胞就分化為承擔(dān)腎臟主要功能的絲球體和尿細(xì)管。 ② 可分化為各類血細(xì)胞 (不對(duì)稱分裂 )。 細(xì)胞工程 胚胎干細(xì)胞 胚胎干細(xì)胞生成牛微型腎 ? 2022年 2月美國(guó)馬薩諸塞州的先進(jìn)細(xì)胞技術(shù)公司從母牛耳朵取皮膚細(xì)胞的細(xì)胞核，與去核卵電激融合，形成早期胚胎。 ? 胚泡囊胚腔一側(cè)的細(xì)胞群即為 胚胎干細(xì)胞。 細(xì)胞工程 干細(xì)胞簡(jiǎn)介 干細(xì)胞治療的優(yōu)點(diǎn) ?低毒性 （ 或無(wú)毒性 ） ， 一次治療有效； ?不需要完全了解疾病發(fā)病的確切機(jī)理； ?用自身干細(xì)胞移植，可避免產(chǎn)生免疫排斥反應(yīng)。 ?培養(yǎng)液 細(xì)胞工程 干細(xì)胞簡(jiǎn)介 建立干細(xì)胞誘導(dǎo)分化模型 ?可利用基因工程手段引入外源目 的基因（對(duì)原有致病基因進(jìn)行置 換改造） ?探索誘導(dǎo)干細(xì)胞向特定組織、器 官分化的化學(xué)和（或）物理?xiàng)l件 細(xì)胞工程 干細(xì)胞簡(jiǎn)介 效果考察 ? 將上述干細(xì)胞或干細(xì)胞培育體系植入動(dòng)物或人的相應(yīng)器官或組織中，考察其效果。 ?建立干細(xì)胞誘導(dǎo)分化模型 。 細(xì)胞工程 干細(xì)胞簡(jiǎn)介 國(guó)家干細(xì)胞基地通過(guò)驗(yàn)收 ? 天津國(guó)家干細(xì)胞工程產(chǎn)品產(chǎn)業(yè)化基地建筑面積 m2，建設(shè)總投資 ， 2022年初建成。 ? 除了在細(xì)胞治療、組織器官移植、基因治療具重要意義外，還將在新基因發(fā)現(xiàn)與基因功能分析、發(fā)育生物學(xué)研究、新藥開發(fā)與藥效以及毒性評(píng)估等領(lǐng)域產(chǎn)生極其重要的影響。詹姆士 2022年 11月 16日對(duì)外宣布，她向德克薩斯州奧斯汀的ViaGen公司支付了 15萬(wàn)美元 ,在四次嘗試失敗后，最終在今年 8月 8日成功克隆了她的賽馬 ——奪得過(guò)十項(xiàng)世界冠軍的“斯卡普”，產(chǎn)下小馬駒“克萊頓” 細(xì)胞工程 體細(xì)胞克隆 東北農(nóng)業(yè)大學(xué)劉忠華教授帶領(lǐng)的課題組，把水母綠色熒光蛋白基因轉(zhuǎn)移到豬胎兒成纖維細(xì)胞的基因組中，再把轉(zhuǎn)基因體細(xì)胞的細(xì)胞核移植到成熟的去核豬卵母細(xì)胞中構(gòu)建成轉(zhuǎn)基因胚胎。 o 離心法 PEG1000 30% ~40%，離心 5~8min。