【正文】 微細胞 微細胞沉淀 線性梯度 BSA懸浮 分別離心 微細胞 細胞工程 染色體轉(zhuǎn)移 微細胞與受體細胞融合 微細胞（百萬個） 含植物凝集素 P的無血清培養(yǎng)基 受體細胞 吸去植物凝集素 P 加 PEG1540 （ 30% ~50%） 吸去 PEG液 無血清培養(yǎng)基洗滌 3次 加完全培養(yǎng)基，胰酶消化 收獲離散細胞 分裝培養(yǎng)瓶 選擇培養(yǎng)基篩選 細胞工程 染色體轉(zhuǎn)移 懸浮液 細胞凝集 37 ℃ 10~15min 1 min 16~24h， 37 ℃ 細胞工程 動物細胞工程 人類干細胞研究 干細胞（ stem cell）簡介 ?干細胞是動物（包括人）胚胎及器官中具有 自我復(fù)制 和 多向分化潛能 的原始細胞，能分裂、產(chǎn)生出表現(xiàn)型和基因型都和自己完全相同的子細胞，同時還能分化為各類 祖細胞 ，是重建、修復(fù)病損或衰老組織、器官功能的理想種子細胞。 …… 人類干細胞研究給 21世紀(jì)醫(yī)學(xué)的革命性發(fā)展帶來可能 ， 因此總的平衡利弊 ， 還是要支持 ” 。 ? 天津臍帶血庫還在國內(nèi)首創(chuàng)了自體血儲存，并創(chuàng)建公共儲存與自體儲存相結(jié)合模式，已在全國 19個省市建立 70多家分公司和工作站，儲存新生兒臍帶血干細胞 3萬余份，為數(shù)十位患者提供了移植供體。 細胞工程 干細胞簡介 獲得干細胞系 這是本研究最重要的第一步。 ? 干細胞能夠在這種 “ 腳手架 ” 上生長、繁殖并分化成腦細胞。 胚胎干細胞 細胞工程 人類干細胞研究 胚泡中的胚胎干細胞 ? 受精后 5~7天，胚胎由大約 140個細胞組成，呈空心圓球狀，即 胚泡。 細胞工程 胚胎干細胞 桑椹胚 (囊胚 ) 細胞工程 胚胎干細胞 人早期胚胎 ——囊胚 細胞工程 胚胎干細胞 胚胎干細胞的特征 ?飼養(yǎng)層依賴的 ?有抑制因子存在時呈未 分化狀態(tài) ?無抑制因子存在時可被 誘導(dǎo)成各種細胞 ?懸浮培養(yǎng)時可形成擬胚 體，并有序分化 細胞工程 胚胎干細胞 胚胎干細胞的培養(yǎng) ? 將胚胎干細胞置于滋養(yǎng)層上； ? 放入 CO2（ 5%）培養(yǎng)箱中， 37~39℃, 飽和濕度； ? 培養(yǎng)液： DMEM + 15%胎牛血清 +LIF+EGF（表皮生長因子） +IGF（胰島素樣生長因子） +胰島素 +β 巰基乙醇。 細胞工程 胚胎干細胞 中國建立人胚胎干細胞 ? 2022年 10月廣州中山大學(xué)附屬第二醫(yī)院黃紹良教授等在國內(nèi)首次建立三個中國人胚胎干細胞系 CHE CHE2和 CHE3，并采用分階段方法成功誘導(dǎo)小鼠胚胎干細胞發(fā)育成造血干細胞。 細胞工程 造血干細胞 骨髓庫 ? 建立骨髓庫是造血干細胞移植的必然需要； ? 美國骨髓供者庫是世界最大的骨髓庫，已有注冊志愿者 500多萬人； ? 歐洲，約 300萬份； ? 日本， 18萬份； ? 臺灣骨髓捐贈中心已有志愿者 24萬人。植入的組織最終發(fā)育成只有普通大白鼠腎臟 1/10大小的人體腎臟組織。 細胞工程 造血干細胞 造血干細胞移植供者來源難題破解 ? 2022年 1月 8日，北京大學(xué)人民醫(yī)院報道：他們已建立了“ HLA不合造血干細胞移植技術(shù)體系 ” ，使六個位點中部分不合者也獲得治療機會。 ? 迄今采用該配型不合技術(shù)體系，完成 HLA不合移植 300多例，總體生存率達到 60％～ 70％。 細胞工程 造血干細胞 外周血干細胞移植治療下肢缺血性疾病 ? 2022年 8月國家干細胞工程技術(shù)研究中心主任韓忠朝教授報道，在國際上率先開展外周血干細胞移植治療下肢缺血性疾病的研究，建立了一個安全有效、簡單經(jīng)濟的新方法。 ? 臍帶血造血干細胞移植時雙方的白細胞組織相容性抗原無須完全相合， 同胞間有 75％的機會適合移植，非親屬間適合移植的機會相對較多，并且手術(shù)后也較少發(fā)生排異反應(yīng)。 細胞工程 造血干細胞 臍帶血干細胞修復(fù)脊髓 ? 2022年 12月，一名癱瘓長達 20年的韓國女子黃美順，在韓國科學(xué)家用臍帶血修復(fù)她受損的脊髓后，又重新獲得站立和蹣跚行走的能力。 細胞工程 造血干細胞 臍血庫建造 “ 生命銀行 ” 臍血庫被稱做 “ 生命的銀行 ” ，至 2022年 7月北京臍血庫已經(jīng)存儲 1萬多例臍血。 細胞工程 其他干細胞研究 神經(jīng)干細胞治腦癱 ? 2022年 6月 6日海軍總醫(yī)院宣布為一名剛出生 70多天的腦癱患兒娜娜進行神經(jīng)移植手術(shù)取得了成功。 細胞工程 其他干細胞研究 干細胞形成腦組織 ?2022年 10月韓國與美國的科學(xué)家把干細胞置于可被吸收的生化塑料小架子上，再放到受中風(fēng)嚴(yán)重破壞的老鼠腦部。 細胞工程 其他干細胞研究 干細胞治尿失禁 ? 2022年 10月，奧地利因斯布魯克醫(yī)科大學(xué)科學(xué)家報告說，他們從 20名患有尿失禁癥女性的手臂取干細胞，培養(yǎng) 6周后，借助超聲波三維顯示，將干細胞注入她們的尿道和括約肌。幾乎囊括了胰腺、肝臟與肺在內(nèi)的所有內(nèi)臟器官細胞。 。 ? 關(guān)鍵在于，科學(xué)家成功地將胚胎干細胞轉(zhuǎn)變?yōu)橐环N 內(nèi)臟原始細胞 。一年之后，其中 18名患者都能自控小便。受損的部位已經(jīng)大部分恢復(fù)。 17天后，娜娜會笑了，眼神靈活了，可以玩撥浪鼓，還能認(rèn)出媽媽，智力發(fā)育已經(jīng)追上了同齡嬰兒。 細胞工程 人類干細胞研究 其他干細胞研究 干細胞長成牙冠 ?2022年 9月美國波士頓弗西斯研究中心從小豬體內(nèi)提取牙齒干細胞，用酶催化后，放入可降解牙模中，再植入小鼠腹部。 1998年存有 8 700份， 2022年約存有 80 000份臍血。 ? 目前治療嚴(yán)重肝病只能依靠肝臟移植，但肝臟的來源得不到保證；用人體胚胎干細胞生成肝細胞正在研究之中，但存在倫理方面的爭議。 細胞工程 造血干細胞 臍血干細胞 ?臍帶血的優(yōu)點： ? 含豐富的造血干細胞和（或）祖細胞（約 1%，與骨髓相同，為外周血的 12～ 16倍）； ? 免疫原（抗原）性較弱（主要含不成熟 T細胞）； ? 增殖快，集落形成率高； ? 所需細胞數(shù)少； ? 來源廣泛。 ?缺點： 細胞少，僅占外周血有核細胞的 %～%，相當(dāng)于骨髓干細胞的 1%~ 10%；操作較復(fù)雜；要有一定條件和設(shè)備；費用比骨髓干細胞移植高。 ? 他們已使 3/6相合的親屬間骨髓移植成為常規(guī)。等大網(wǎng)膜內(nèi)的血管延伸到移植組織后，這些組織就能過濾尿液。 ? 兩天后，人體干細胞就分化為承擔(dān)腎臟主要功能的絲球體和尿細管。 ② 可分化為各類血細胞 (不對稱分裂 )。 細胞工程 胚胎干細胞 胚胎干細胞生成牛微型腎 ? 2022年 2月美國馬薩諸塞州的先進細胞技術(shù)公司從母牛耳朵取皮膚細胞的細胞核，與去核卵電激融合，形成早期胚胎。 ? 胚泡囊胚腔一側(cè)的細胞群即為 胚胎干細胞。 細胞工程 干細胞簡介 干細胞治療的優(yōu)點 ?低毒性 （ 或無毒性 ） ， 一次治療有效； ?不需要完全了解疾病發(fā)病的確切機理； ?用自身干細胞移植，可避免產(chǎn)生免疫排斥反應(yīng)。 ?培養(yǎng)液 細胞工程 干細胞簡介 建立干細胞誘導(dǎo)分化模型 ?可利用基因工程手段引入外源目 的基因（對原有致病基因進行置 換改造） ?探索誘導(dǎo)干細胞向特定組織、器 官分化的化學(xué)和（或）物理條件 細胞工程 干細胞簡介 效果考察 ? 將上述干細胞或干細胞培育體系植入動物或人的相應(yīng)器官或組織中，考察其效果。 ?建立干細胞誘導(dǎo)分化模型 。 細胞工程 干細胞簡介 國家干細胞基地通過驗收 ? 天津國家干細胞工程產(chǎn)品產(chǎn)業(yè)化基地建筑面積 m2，建設(shè)總投資 ， 2022年初建成。 ? 除了在細胞治療、組織器官移植、基因治療具重要意義外，還將在新基因發(fā)現(xiàn)與基因功能分析、發(fā)育生物學(xué)研究、新藥開發(fā)與藥效以及毒性評估等領(lǐng)域產(chǎn)生極其重要的影響。詹姆士 2022年 11月 16日對外宣布，她向德克薩斯州奧斯汀的ViaGen公司支付了 15萬美元 ,在四次嘗試失敗后，最終在今年 8月 8日成功克隆了她的賽馬 ——奪得過十項世界冠軍的“斯卡普”，產(chǎn)下小馬駒“克萊頓” 細胞工程 體細胞克隆 東北農(nóng)業(yè)大學(xué)劉忠華教授帶領(lǐng)的課題組，把水母綠色熒光蛋白基因轉(zhuǎn)移到豬胎兒成纖維細胞的基因組中，再把轉(zhuǎn)基因體細胞的細胞核移植到成熟的去核豬卵母細胞中構(gòu)建成轉(zhuǎn)基因胚胎。 o 離心法 PEG1000 30% ~40%，離心 5~8min。