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2024-09-12 03:17 上一頁面

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【正文】 supE44,hsdS20(rBmB-),recA13,ara-14,proA2,lacY1,galK2,rpsL20,xyl5,mtl1,leuB6,thi1M110或 SCS110大多數(shù)大腸桿菌菌株中含有Dam甲基化酶和Dcm甲基化酶,前者可以在GATC序列中腺嘌呤N6位上引入甲基,后者在CCA/TGC序列的第一個胞嘧啶 C5位置上引入甲基。而要解除這種限制修飾作用通常有兩種方法:(1)選用上述酶的同功酶,如Sau3AI,DNA識別切割位點與MboI相同;但不受甲基化影響;(2)利用甲基化酶缺失的受體細(xì)胞進行DNA的制備, JM110和鏈霉菌等,前者Dam和Dcm甲基化酶已敲出,而后者細(xì)胞內(nèi)本就沒有甲基化酶,從這些細(xì)胞中抽提的 DNA就能被上述酶切割。
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