【正文】 有害的微生物統(tǒng)稱為雜菌。消毒原是醫(yī)學(xué)上的一個概念。是指用物理或化學(xué)的方法，殺死物體表面和孔隙內(nèi)的一切微生物或生物體，即把有生命的物質(zhì)全部殺死。 具有這種作用的藥劑為抑菌劑。 通過殺菌或抑菌達(dá)到防止物品腐敗霉變的目的。⑥無菌操作 ①干熱法 此方法的特點是操作簡便、滅菌迅速徹底。 (2)干熱滅菌其優(yōu)點是可以保持物品的干燥。主要介紹經(jīng)常用的巴斯德消毒法、間歇滅菌法、常壓滅菌法和高壓滅菌法。栽培食用菌時常用的培養(yǎng)料發(fā)酵，即利用這個原理殺死其中的有害微生物。如此連續(xù)三次，即可殺死滅菌物的全部芽孢，達(dá)到滅菌的目的。 做法與間歇滅菌法相似，但需延長熱處理的時間(4～8h)，使物品中的微生物營養(yǎng)體和芽孢全部死亡，達(dá)到一次性滅菌的目的。 (4)高壓蒸汽滅菌這樣殺滅細(xì)菌芽孢所需的時間可大大縮短，所以是一種最有效的滅菌方法。 ③紫外線滅菌紫外線滅菌是用紫外線燈管進(jìn)行的。紫外線對人的眼粘膜及視神經(jīng)有損傷作用，應(yīng)避免直接在紫外燈下工作，更不能直視燈管。 過濾器的種類很多，主要有瓷土制過濾器，硅藻土制過濾器、濾膜過濾器等。 現(xiàn)以濾膜過濾器為例介紹具體安裝和使用?！?，濾除一般細(xì)菌，～，過濾時間不宜過長，因低壓能使屈曲運動的細(xì)菌通過濾器；也要避免高度減壓，因微小顆粒會堵塞濾板，而失去過濾效能。 (2)氣體過濾理想的消毒劑應(yīng)是殺菌力強、價格低、能長期保存、無腐蝕性、對人無毒或毒性較小的化學(xué)藥品。 (1)氣態(tài)消毒法另一種方法是把要消毒的物品放在特殊的密閉容器中，先抽凈物品孔隙里的空氣，再通入殺菌氣體。 不同的消毒劑其殺菌或抑菌不同。 一般講，溫度越高，殺菌效果越好，作用的時間越長，殺菌效果越好。 (2)消毒劑的性質(zhì)與濃度消毒劑的濃度也直接影響它的殺菌力，一般消毒劑的濃度越大，其殺菌力越強。 (3)微生物的種類與芽孢此外，細(xì)菌的芽孢，對同一或不同化學(xué)藥品的抵抗力，比其營養(yǎng)體大得多。 ③化學(xué)消毒劑的配制配制消毒劑時常用到百分比濃度。 溶質(zhì)質(zhì)量 溶液百分比濃度＝ x100% 溶質(zhì)質(zhì)量＋溶劑質(zhì)量溶質(zhì)指被溶解的物質(zhì)；溶劑指能溶解溶質(zhì)的物質(zhì)，水是最常用的溶劑；質(zhì)量指重量，水的質(zhì)量一般以1g／ml計算。 例如：欲將95%的酒精配制成75%的酒精，按此方法計算，用75份濃酒精加入20份水，即為75%的酒精。 在每次接種前，應(yīng)將所需的器具一并移入接種室(箱)內(nèi)，然后打開紫外線燈進(jìn)行滅菌。照射時工作人員要離開室內(nèi)(避免肉眼觀看紫外線燈)，以防輻射影響身體健康。其缺點是：對真菌殺傷力差，穿透能力弱。 ①熏蒸前噴灑水霧，以增加殺菌效果②注意防止金屬品銹蝕乙醇（酒精）皮膚、器皿、分離材料的表面消毒配成70%～75%的溶液擦拭易燃，使用時注意安全苯酚（石炭酸）接種室、接種箱空間消毒及物體表面殺菌①配成5%溶液在空間或物體表面上噴霧②3%溶液用于器械浸泡對皮膚有腐蝕作用來蘇兒（含煤酚皂47%～53%）手及物體表面消毒①3%溶液浸泡器皿1h②1%～2%溶液擦洗接種箱、無菌室、用具以及手的浸泡漂白粉床架、地板、墻壁、用具等的消毒配成2%～5%水溶液洗刷殺菌效力持續(xù)時間短，應(yīng)隨配隨用高錳酸鉀床架、器皿等表面消毒%～%水溶液刷洗或浸泡隨配隨用新潔爾滅（含季胺鹽5%）皮膚和不耐熱物品的表面消毒%的水溶液刷洗或浸泡升汞分離材料、非金屬物品的表面殺菌%～%水溶液刷洗或浸泡①配制時，升汞先溶于濃鹽酸（）再用水稀釋②劇毒，使用時注意安全冰醋酸（冰乙酸）空間消毒、非金屬物品的表面殺菌①噴霧：%，空間5ml～8ml/m3。先密閉門窗，量取相應(yīng)的福爾馬林置于容器中，然后加入相應(yīng)的高錳酸鉀，操作者隨即離開接種室，熏蒸50分鐘即能達(dá)到消毒滅菌的目的。 接種室和接種箱的操作規(guī)程 (4)接種前，用70%的酒精棉球擦手，然后按常規(guī)在火焰上進(jìn)行各項操作。 (6)接種時如遇棉塞著火，用手緊握即可熄滅，或用濕布撲滅，切勿用嘴吹滅，以免擴大火焰。 ②接種箱的使用規(guī)程 (3)用70%酒精棉球擦手，然后伸進(jìn)接種箱內(nèi)操作。 玻璃器皿的洗滌與滅菌 ②玻璃器皿的滅菌玻璃器皿一般采用干熱滅菌，若用高壓蒸汽滅菌，滅菌后則要經(jīng)過干燥才能使用。 (1)培養(yǎng)皿 滴管滅菌前的包裝與移液管相同。 培養(yǎng)基滅菌效果的檢查如果培養(yǎng)基沒有什么變化，說明滅菌效果良好；如果某一位置的培養(yǎng)基出現(xiàn)了雜菌菌落，可能是擺放的太緊，導(dǎo)致蒸汽不暢，或鍋的結(jié)構(gòu)不合理等原因所致，應(yīng)根據(jù)上述情況進(jìn)行改進(jìn)；如果大部分或全部菌種瓶都出現(xiàn)雜菌，說明滅菌溫度或滅菌時間不夠，應(yīng)提高壓力或延長滅菌時間。 ①檢查方法 (1)平板法然后一起放在30℃下培養(yǎng)48h后檢查有無菌落出現(xiàn)。 按無菌操作各將其中一管棉塞打開，把棉塞放入滅菌的培養(yǎng)皿內(nèi)，經(jīng)過一定時間再將棉塞塞好，連同對照一起放入培養(yǎng)室培養(yǎng)，溫度和時間同前。 用常規(guī)培養(yǎng)基如肉湯瓊脂，馬鈴薯葡萄糖瓊脂等，分別倒成平板，每種兩個，放入接種室或接種箱。常用的檢查方法有平板法和斜面法兩種 接種室(箱)消毒滅菌效果的檢驗 每采用一種新的培養(yǎng)基，或使用一種新的滅菌設(shè)備，以及變更滅菌的壓力和時間，都必須進(jìn)行滅菌效果的檢驗。 消毒與滅菌的效果，直接影響菌種成品率的高低。 塞好后用酒精燈火焰將露在管口外的棉花燒掉，然后用4cm～5cm寬的報紙條，以45度角螺旋形將每根移液管分別卷好，兩端不可外露，再根據(jù)需要將若干支扎成一束，即可滅菌。 試管也可若干支扎在一起，棉塞外再包一層報紙。 洗凈后烘干或晾干，然后按每5～7套用牛皮紙或報紙包好，也可裝在大飯盒或特制的盒內(nèi)，即可滅菌。洗滌時要分類進(jìn)行，以免浪費洗滌藥劑和洗滌時間；對附有瓊脂培養(yǎng)基的器皿，應(yīng)先用水蒸煮融化后趁熱倒出，再用清水洗滌；對沾有蠟的器皿，應(yīng)先加熱使之融化后擦掉，再用清水沖洗干凈；對沾有焦油、樹脂的器皿，可用40%氫氧化鈉溶液洗滌。 (2)新的玻璃器皿因附有游離堿，不能直接使用，應(yīng)先在1%～2%的鹽酸溶液中浸泡10個h，再用清水沖洗干凈備用。 為了保證制種工作的順利進(jìn)行，提高制種成品率，應(yīng)首先對玻璃器皿進(jìn)行嚴(yán)格的洗滌和滅菌。 (1)每次接種前用5%石炭酸在接種箱內(nèi)壁和空間噴霧。用畢的火柴桿，廢紙不要扔在地上，應(yīng)放在專用的瓷盆里。 (2)進(jìn)入緩沖室，穿上無菌工作服、鞋、戴好口罩、工作帽，然后用2%煤酚皂液將手浸洗2分鐘。 要想達(dá)到無菌操作的目的，必須嚴(yán)格在接種室和接種箱的操作規(guī)程。 接種箱較小，%的升汞溶液進(jìn)行噴霧，達(dá)到消毒滅菌。 石炭酸噴霧的優(yōu)點是：操作簡易、性質(zhì)穩(wěn)定。缺點是：有一定的毒性和刺激氣味，且受溫度影響大。無論哪一種方法熏蒸，都應(yīng)隔天才能接種。②噴霧法：按1：50的比例配成水溶液噴射在物體上①福爾馬林有白色沉淀時，可加幾滴硫酸溶液②熏蒸法房間必要預(yù)先噴濕③對眼睛刺激性強，應(yīng)注意防護(hù)硫磺接種室、接種箱、培養(yǎng)室空間消毒或物體表面殺菌熏蒸法：按15g/m3的用量置磁碗內(nèi)，用紙片引火點燃。 使用時應(yīng)注意，當(dāng)細(xì)菌接受致死量紫外線照射后，隨即給予可見光照射，其中有一部分細(xì)菌又有可能復(fù)活(稱光復(fù)活現(xiàn)象)。 ①紫外線照射 (1)百分比濃度的計算不同微生物對各種消毒劑的敏感度不同，這主要是與其細(xì)胞的結(jié)構(gòu)有關(guān)。消毒劑的化學(xué)性質(zhì)決定其殺菌力，它必須溶解于水，方可滲入微生物體內(nèi)而發(fā)揮作用。影響消毒劑上述作用的主要因素有以下幾種。 ②影響消毒劑作用的因素一般用于劇毒藥劑熏蒸和某些不耐熱物品的徹底消毒滅菌。用加熱、焚燒、氧化等方法，使化學(xué)藥劑為氣體狀態(tài)擴散到空中，殺死空氣和物體表面的微生物。 用于殺滅雜菌的藥物稱為消毒劑。在生產(chǎn)液體菌種的深層發(fā)酵工藝中，需要大量無菌空氣，采用氣體過濾方法，使空氣通過多層棉花和活，哇炭，濾除空氣中的微生物。將膜剪成與特制過濾器的漏斗直徑大小相仿的圓片，置漏斗上，再將過濾器裝在抽濾瓶上，以橡皮管連接抽濾瓶與安全瓶(中間可連一水銀檢壓計)，最后將安全瓶用橡皮管接于真空泵上(圖4—6)。常見的試管口上加棉塞，就是起過濾除菌作用。 由于紫外線穿透物質(zhì)的能力很差，所以只適用于空氣和物體表面的滅菌。紫外線滅菌是利用輻射因素來滅菌的方法之一。以上兩種蒸汽滅菌法，由于是在常壓下進(jìn)行，蒸汽溫度只有100℃左右，熱處理較長。間歇滅菌法常用于不耐高溫物品的滅菌。物品放在蒸鍋或蒸籠內(nèi)，加熱至蒸汽上冒后，再繼續(xù)蒸煮15～20分鐘(根據(jù)不同的物品而定)，以殺死其中的微生物營養(yǎng)細(xì)胞。 即用較低的溫度(60℃～700℃)殺死物品中的病原菌和大多數(shù)細(xì)菌白勺營養(yǎng)體。 如用熱水、熱蒸汽殺死微生物。 將需要滅菌的物品置于干燥箱中，加熱到160℃，保持1～2h，利用箱內(nèi)的熱空氣殺死物體上的微生物。嚴(yán)重污染雜菌的菇體和物體也可用火焰灼燒而滅菌。在干燥的條件下，加熱進(jìn)行滅菌。 物理方法 即操作的空間(如接種室、接種箱的空間)，使用的器皿和工具，操作者的衣著和手都不帶任何活著的微生物。⑤防腐　經(jīng)過滅菌后的物品就是無菌的。 具有這種效力的藥劑稱為殺菌劑。 滅菌就食用菌生產(chǎn)而言，消毒是殺死、消除或充分抑制部分微生物，使之不再危害食用菌的生長發(fā)育。消毒 微生物在自然界中無處不有，土壤里、水中、空氣里、人體上、動植物體上以及培養(yǎng)食用菌的培養(yǎng)料、設(shè)備、工具上都有微生物存在。 塑料鑒別可采用簡便易行的灼燒法。 聚氯乙烯塑料有毒，不到100℃就軟化。　進(jìn)行高壓蒸汽滅菌時，宜用聚丙烯塑料袋，(6絲)為宜。其中高壓聚乙烯塑料袋透．明度高于低壓聚乙烯塑料袋，(厚度相同時)，且低壓聚乙烯能耐120℃高溫。 塑料容器較輕便，成本低，但較易污染雜菌，且不易重復(fù)使用(薄膜容器)。 電熱干燥箱 顯微鏡是貴重的光學(xué)儀器，使用時應(yīng)嚴(yán)格操作程序，平時應(yīng)避免和酸堿、氯仿、乙醚、酒精等放在一處，以免受腐蝕。 孢子采集器 無條件的單位自己可制造干濕球溫度計。其中1支溫度表的水銀柱頭，用易吸水的紗布條包裹扎牢，紗布的另一端放入裝有清水的小瓶內(nèi)作為濕球，即成為自制干濕球溫度計。 旋轉(zhuǎn)制動螺絲，對準(zhǔn)其差數(shù)，差數(shù)與干球溫度垂直交叉處的讀數(shù)即為空氣的相對濕度。 干濕溫度計 實驗室常用的儀器設(shè)備有天平、干濕溫度計、玻璃器皿和器具、孢子采集器、光學(xué)顯微鏡、電冰箱、冷藏箱及電熱干燥箱等，可根據(jù)單位的具體條件設(shè)置。旋轉(zhuǎn)式的耐用，效果較好。 食用菌進(jìn)行深層培養(yǎng)或制備液體菌種時，需設(shè)置搖瓶機。 在制作母種和少量原種時，可采用恒溫培養(yǎng)箱，根據(jù)需要使溫度保持在一定范圍內(nèi)進(jìn)行培養(yǎng)。 恒溫培養(yǎng)室用于培育栽培種或培育較多的母種和原種。用于原種和栽培種轉(zhuǎn)接的工具，因培養(yǎng)基比較粗糙緊密，可用比較粗大的不銹鋼制成。 接種工具 由于潔凈的氣流是勻速平行地向著一個方向。 超凈工作臺 箱前(或箱后)的兩個圓孔裝上40cm長的布袖套或橡皮手套，雙手由此伸入操作。目前多數(shù)生產(chǎn)者采用木材和玻璃自己加工制作成一人或雙人操作箱，其樣式和大小大致。 接種室外面設(shè)緩沖間，面積約2m2。生產(chǎn)量較大的菌種廠，應(yīng)充分注意各個工作間的位置安排，總體布局參見下圖。 接種室采用蒸籠滅菌時，密閉條件較差，由于鍋內(nèi)溫度最高是100℃，所以滅菌時間從溫度達(dá)100℃開始計時，需保持6～9h。 門上附有放溫度計的小孔，鐵鍋上沿設(shè)有進(jìn)出水管。 ①土蒸鍋 鍋口用緊固的螺絲擰緊密封，鍋上安裝壓力表、溫度計、安全閥、放氣閥、水位計、進(jìn)出水管等設(shè)備。 ③自制簡易高壓鍋較輕便、經(jīng)濟(jì)。 滅菌鍋消毒的原理，是利用水吸收一定的熱量之后而成為飽和蒸汽，當(dāng)蒸汽冷凝時就會釋放出一定的熱量。 采用手工裝料，無需特殊設(shè)備，只要備一塊墊瓶(袋)底的木板和一根丁字形搗木(供壓料時用)。 拌料必備的用具有鐵鏟，鋁鍋，電爐或煤爐，水桶，專用掃帚和簸箕等。 拌料機具 食用菌的菌種生產(chǎn)，基本上是按菌種分離→母種擴大培養(yǎng)→原種培養(yǎng)→栽培種培養(yǎng)的程序進(jìn)行。它是母種和栽培種之間的過渡種。一般把從自然界中，首次通過孢子分離或組織分離而得到的純菌絲體稱為母種，或稱一級種。常言道：“有收無收在于種，收多收少在于管”，可見菌種在生產(chǎn)中的重要性。因此，通常所指的菌種，實際上是經(jīng)過人工培養(yǎng)并進(jìn)一步繁殖的食用菌的純菌絲體。第二章 食用菌制種技術(shù)食用菌生產(chǎn)所用的菌種，是提供繁殖而分級制作的菌絲體培養(yǎng)物，相當(dāng)于高等植物的種子?！　?生長因子　　生長因子又稱生長因素，是指機體本身不能利用簡單物質(zhì)合成而必須靠外源提供才能維持正常生理功能的物質(zhì)，統(tǒng)稱為生長因子?！　∥⒘吭亍　♀?是許多酶的激活劑，鉀對糖代謝有促進(jìn)作用，鉀還可以控制原生質(zhì)的膠態(tài)和細(xì)胞膜的通透性。食用菌能利用的含硫化合物包括硫酸鈣、硫酸鎂、硫酸鋅、含硫氨基酸、烷基磺酸鹽等。磷可參與代謝轉(zhuǎn)化中的磷酸化過程，生成高能磷酸化合物，在高能磷酸鍵中貯存能量?！　∈秤镁谏L發(fā)育過程中需要的礦質(zhì)元素有P、S、K、Mg、Ca、Fe、Mo、Mn、Zn、Co等?！　≡谧訉嶓w形成時，培養(yǎng)料中氮素的含量必須低于菌絲生長期的氮素含量，濃度過高反而有礙于子實體的分化和生長。近年來，美國、日本在廄肥、木屑等培養(yǎng)料中添加1％~5％的亞油酸、棉籽油和動物油脂(經(jīng)乳化處理)，對提高栽培產(chǎn)量有促進(jìn)作用?！　　√荚础　》彩菢?gòu)成食用菌細(xì)胞和代謝產(chǎn)物中碳素來源的物質(zhì)，稱為碳源物質(zhì)或碳源?！　」采?不能獨自從枯死的木本、草本植物中吸收營養(yǎng)，必須靠活的樹木供給養(yǎng)分，且樹木和菌類雙方互利，如松口蘑、牛肝菌等。食用菌對營養(yǎng)物質(zhì)的要求　　　食用菌的營養(yǎng)類型主要有四種：　　腐生菌類 需要的營養(yǎng)物質(zhì)是從枯死的木本、草本植物中吸收，目前能夠人工栽培的食用菌基本屬于腐生菌類，如香菇、草菇、銀耳等。木霉能分泌的一種毒素，對食用菌菌絲有較強的殺傷力，因此對食用菌的栽培威脅很大。在食