【正文】 混勻，置37℃水浴10分鐘．500nm波長(zhǎng)空白管調(diào)零，讀取測(cè)定管和標(biāo)準(zhǔn)管的A值。操作步驟一總SOD(TSOD)活力的測(cè)定：按試劑盒測(cè)定步驟進(jìn)行，具體操作如下：試劑 測(cè)定管 標(biāo)準(zhǔn)管1號(hào)試劑（ml） 1%肝勻漿（μl） 50 —蒸餾水（ml） 2號(hào)試劑（ml） 3號(hào)試劑（ml） 4號(hào)試劑（ml） 用旋渦混勻器充分混勻，置37℃恒溫水浴40分鐘。 50% （NU/mg protein） 對(duì)照管吸光度 反應(yīng)液總體積（ml）—————————— 247。因此測(cè)定其活性可以糖尿病小鼠的糖代謝狀況。上述溶液混勻后置30℃預(yù)溫5min，再加肝勻漿上清液20ul反應(yīng)。首先將準(zhǔn)備好的原材料粗老綠茶按照工藝：粗提取——茶多糖的離交換柱層析和凝膠柱層析純化——純化組分糖含量測(cè)定——糖組分體外活性分析。小鼠再禁食12小時(shí)后，腹腔注射四氧嘧啶(200mg/Kg體重)；造模后實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組均不再進(jìn)行灌胃；造模后3天測(cè)定小鼠空腹血糖。測(cè)定時(shí)取出。社會(huì)的快速發(fā)展促使人們生活水平的不斷提高，糖尿病作為一種由此導(dǎo)致的“富貴病”已經(jīng)成為繼腫瘤、心血管疾病之后的第三大嚴(yán)重慢性非傳染性疾病。近年來(lái)國(guó)內(nèi)外對(duì)茶葉的深入研究也表明，茶葉富含多種礦物質(zhì)、氨基酸等營(yíng)養(yǎng)成分以及茶多酚、茶色素等具有多種保健作用的功能因子，特別是對(duì)茶葉降糖作用的研究成果為糖尿病患者提供了一種簡(jiǎn)便易行、便于長(zhǎng)期堅(jiān)持且十分經(jīng)濟(jì)的控制病程發(fā)展的方法。以往的研究表明，茶葉中除含有茶多酚、生物堿、揮發(fā)油等成分外，近年來(lái)還發(fā)現(xiàn)有另一種組分為茶多糖（TPS）。但是茶多糖到底是怎樣在機(jī)體內(nèi)作用，怎樣達(dá)到降低血糖的目的，到目前為止還沒(méi)有文章把這復(fù)雜的機(jī)制研究明白。本設(shè)計(jì)采用層析的方法將粗提取的綠茶多糖進(jìn)行純化，期望得到的綠茶多糖含量高并且具有較高的活性，使在作用于試驗(yàn)用糖尿病小鼠是有較好的降血糖作用，有利于實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)的測(cè)量和機(jī)理的探究分析。 綠茶多糖對(duì)糖尿病小鼠胰島素產(chǎn)量影響以往的研究實(shí)驗(yàn)是通過(guò)直接測(cè)定代謝情況和胰島素產(chǎn)生水平。對(duì)于我，科研性質(zhì)的專業(yè)論文可以說(shuō)是可望而不可及的東西，雖然我的專業(yè)需要學(xué)生廣泛閱讀相關(guān)期刊文獻(xiàn)，但我由于自己的惰性和自以為無(wú)用的思想，一直未曾碰觸。因此我決定自己的研究課題從此著手。把這些東西落實(shí)成為思路順暢、切實(shí)可行的實(shí)驗(yàn)指導(dǎo)真不是一件容易的事情，細(xì)心、耐心、信心、恒心一樣都不能少。參考文獻(xiàn)[1] 劉超, [J]. 安徽中醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào), 1999, 18(5): 8385. [2] 易鳳英, 劉素純, [J]. 安徽農(nóng)業(yè)科學(xué), 2010, 38(6): 29112913. [3] 李雷, 汪東風(fēng), [J]. 茶葉科學(xué), 2006, 26(2): 102107. [4] [J]. 生意通, 2007(6): 79. [5] 陳海霞, [J]. 營(yíng)養(yǎng)學(xué)報(bào). 2002, 24(1): 8586. [6] 傅博強(qiáng), 謝明勇, 、組成及藥理作用研究進(jìn)展[J]. 南昌大學(xué)學(xué)報(bào)(理科版), 2001, 25(4): 358364. [7] [J]. 瀘州醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào), 2004, 27(3): 258259. [8] 芮莉莉. 蕭建中, [J]. 中日友好醫(yī)院學(xué)報(bào). 2005, 19(2): 9396. [9] 吳建芬, 馮磊, [J]. 浙江預(yù)防醫(yī)學(xué), 2003, 15(9): 1011, 13. [10] 徐梓輝, 周世文, 、SOD活性變化的影響[J]. 成都中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào), 2002, 25(1): 38. [11] 徐梓輝, 周世文, [J]. 中國(guó)糖尿病雜志, 2002, 10(1): 4448. [12] 徐梓輝, 周世文, 、T淋巴細(xì)胞亞群的影響[J]. 湖南中醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào), 2001, 21(1): 1719. [13] 倪德江, 陳玉瓊, . 茶葉科學(xué), 2003, 23(1): 1115. [14] 楊澤, [J]. 中國(guó)糖尿病雜志, 2003, 11(2): 78. [15] 倪德江, 陳玉瓊, [J]. 2004, 26(1): 5760. [16] 王黎明, [J]. 2010, 29(3): 354358. 21。雖然困難重重，自己的設(shè)計(jì)也不盡完美，但是我仍然感謝，因?yàn)檫@只是我學(xué)業(yè)路上一個(gè)新的起點(diǎn)。我的設(shè)計(jì)《綠茶多糖對(duì)Ⅱ型糖尿病小鼠治療機(jī)制研究的設(shè)計(jì)》也正是以此為突破口，希望能有所成果。老師的指點(diǎn)也讓我少走了很多彎路：先查資料——確定大體知識(shí)范圍——整理內(nèi)容——撰寫(xiě)內(nèi)容——根據(jù)內(nèi)容——擬定題目，按照這個(gè)步驟我一步步摸索前行。通過(guò)為期三周的課設(shè)，我有很多的收獲。王黎明等[16]研究時(shí)采用測(cè)定糖類(lèi)物質(zhì)在代謝途徑中量的改變，得出茶多糖影響糖代謝的結(jié)論。因此我在借鑒前人實(shí)驗(yàn)的基礎(chǔ)上，更加具體詳盡了實(shí)驗(yàn)步驟，運(yùn)用了更加精確的實(shí)驗(yàn)儀器，進(jìn)行全面的深入的分析，下面我分點(diǎn)介紹本設(shè)計(jì)的特點(diǎn)。茶葉中具有降血糖效果的成分是TPS，國(guó)內(nèi)外對(duì)TPS的組分及降糖作用也有報(bào)道[14]。其中以茶多糖的降糖作用最為突出。對(duì)于Ⅱ型糖尿病德預(yù)防和治療，已經(jīng)成為當(dāng)今社會(huì)的最熱點(diǎn)為題之一。對(duì)于C和c組，C組以最適濃度的綠茶多糖、c組以等體積生理鹽水連續(xù)灌胃8周。8周末時(shí)處死動(dòng)物后，取出肝臟,.測(cè)定肝臟SOD和GSH—Px活性以及葡萄糖激酶活性。實(shí)驗(yàn)組分別以最適濃度的綠茶多糖、對(duì)照組以等體積生理鹽水連續(xù)灌胃。酶比活性計(jì)算：計(jì)算公式為：△A／min I／ V總／V樣10001000，其中△A是每分鐘吸光度的變化，．V總表示反應(yīng)總體積，V樣表示吸取上清液的量，兩個(gè)1000分別是毫摩爾轉(zhuǎn)化為微摩爾和單位IU轉(zhuǎn)化為mlU的轉(zhuǎn)化系數(shù)，酶比活性單位為mlU／min／g肝組織。 mol／L。在上述反應(yīng)中谷胱甘肽過(guò)氧化物酶是整個(gè)反應(yīng)體系的限速步驟，因此NADPH的減少量和谷胱甘肽過(guò)氧化物酶的活力線性相關(guān)，可以直接用谷胱甘肽過(guò)氧化物酶檢測(cè)試劑盒進(jìn)行測(cè)定。組織中SOD活力計(jì)算：定義：每毫克組織蛋白在lml反應(yīng)液中SOD抑制率達(dá)50％時(shí)所對(duì)應(yīng)的SOD量為一個(gè)亞硝酸鹽單位(NU)。(SOD) [9]原理：通