最權(quán)威最齊全的pcr匯總及其原理-程序(文件)
【正文】 的降解，保持RNA的完整性。常用的內(nèi)參有G3PD（甘油醛3磷酸脫氫酶）、βActin（β肌動蛋白）等。 5． 防止DNA的污染： ?。?） 采用DNA酶處理RNA樣品。第二對引物稱為巢式引物（因?yàn)樗麄冊诘谝淮蜳CR擴(kuò)增片段的內(nèi)部）結(jié)合在第一次PCR產(chǎn)物內(nèi)部，使得第二次PCR擴(kuò)增片段短于第一次擴(kuò)增。第一對PCR引物擴(kuò)增片段和普通PCR相似。巢式PCR 原理 DNA的半保留復(fù)制是生物進(jìn)化和傳代的重要途徑。鏈互補(bǔ)的半保留復(fù)制鏈重復(fù)循環(huán)變性退火延伸三過程，就可獲得更多的“半保留復(fù)制鏈”，而且這種新鏈又可成為下次循環(huán)的模板。第二對引物的功能是特異性的擴(kuò)增位于首輪PCR產(chǎn)物內(nèi)的一段DNA片斷。 巢式PCR 應(yīng)用 一般應(yīng)用于動物方面。cDNA[1]巢式PCR 巢式PCR相對普通PCR的優(yōu)缺點(diǎn) 優(yōu)點(diǎn)克服了單次擴(kuò)增“平臺期效應(yīng)”的限制，使擴(kuò)增倍數(shù)提高，從而極大的提高了PCR的敏感性； 由于模板和引物的改變，降低了非特異性反應(yīng)連續(xù)放大進(jìn)行的可能性，保證了反應(yīng)的特異性； 內(nèi)側(cè)引物擴(kuò)增的模板是外側(cè)引物擴(kuò)增的產(chǎn)物，第二階段反應(yīng)能否進(jìn)行，也是對第一階段反應(yīng)正確性的鑒定，因引可以保證整個(gè)反應(yīng)的準(zhǔn)確性及可行性。但還是建議先排除一下其他可能因素，畢竟普通PCR簡單。探針完整時(shí)，報(bào)告基團(tuán)發(fā)射的熒光信號被淬滅基團(tuán)吸收；剛開始時(shí), 探針結(jié)合在DNA任意一條單鏈上。 食品安全：食源微生物、食品過敏源、轉(zhuǎn)基因、乳品企業(yè)阪崎腸桿菌等檢測。有時(shí)是乙丙型肝炎病毒重疊.②腸道致病性細(xì)菌的檢測，如傷寒，痢疾和霍亂，有時(shí)具有較相同的腸道癥狀，有時(shí)痢疾霍亂同存一病人并同時(shí)發(fā)病.③性病的檢測，如梅毒，淋病及艾滋病的診斷.④戰(zhàn)傷細(xì)菌及生物戰(zhàn)劑細(xì)菌的檢測，如破傷風(fēng)桿菌，產(chǎn)氣莢膜桿菌，炭疽桿菌，鼠疫桿菌等偵檢.⑤需特殊培養(yǎng)的無芽胞厭氧菌，如脆弱類桿菌、艱難桿菌的鑒定等. 某些病原微生物，某些遺傳病或癌基因，型別較多，或突變或缺失存在多個(gè)好發(fā)部位，多重PCR可提高其檢出率并同時(shí)鑒定其型別及突變等可系統(tǒng)應(yīng)用的有:乙型肝炎病毒的分型。PCR中引物的黏合溫度(annealing temperature)決定了黏合的特異性，溫度越高特異性越強(qiáng)，但過高則不能實(shí)現(xiàn)引物和模板的結(jié)合，而過低會產(chǎn)生大量非特異性產(chǎn)物。這樣在起初的幾個(gè)循環(huán)中，特異性擴(kuò)增序列可以相對非特異性序列多擴(kuò)增若干倍，從而減輕非特異性擴(kuò)增對結(jié)果的干擾。 。此外，遞減PCR還可與簡并引物(degenerate primer)結(jié)合使用，用來推出一段已知肽鏈的氨基酸序列所對應(yīng)的DNA堿基序列。遞減PCR開始先設(shè)定一個(gè)比較高的黏合溫度，每個(gè)循環(huán)黏合溫度下降1℃，到一個(gè)較低溫度以后每個(gè)循環(huán)的黏合溫度保持不變直到結(jié)束。單純皰疹病毒的分型。多種病原微生物的同時(shí)檢測或鑒定，是在同一PCR反應(yīng)管中同時(shí)加上多種病原微生物的特異性引物，可系統(tǒng)組合的有:①肝炎病毒的感染，在同一病人或同一供血者體內(nèi)，有時(shí)存在多種肝炎病毒重疊感染，有時(shí)是甲乙丙型肝炎病毒重疊。 應(yīng)用行業(yè)：各級各類醫(yī)療機(jī)構(gòu)、大學(xué)及研究所、CDC、檢驗(yàn)檢疫局、獸醫(yī)站、食品企業(yè)及乳品多重PCR 熒光量化PCR原理熒光定量PCR 應(yīng)用領(lǐng)域 TL988型實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀應(yīng)用領(lǐng)域臨床疾病診斷：各型肝炎、艾滋病、禽流感、結(jié)核、性病等傳染病診斷和療效評價(jià)；地中海貧血、血友病、性別發(fā)育異常、智力低下綜合癥、胎兒畸形等優(yōu)生優(yōu)育檢測；腫瘤標(biāo)志物及瘤基因檢測實(shí)現(xiàn)腫瘤病診斷；遺傳基因檢測實(shí)現(xiàn)遺傳病診斷。熒光定量PCR熒光定量PCR 概述 熒光定量PCR是( realtime fluorescence quantitative PCR，RTFQ PCR) 是1996 年由美國Applied Biosystems 公司推出的一種新定量試驗(yàn)技術(shù)，它是通過熒光染料或熒光標(biāo)記的特異性的探針，對PCR產(chǎn)物進(jìn)行標(biāo)記跟蹤，實(shí)時(shí)在線監(jiān)控反應(yīng)過程，
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