初始污染菌檢驗規(guī)程(文件)
【正文】 與熔化的瓊脂混合，隨后澆到平板中，放至凝固。 由于可澆倒的洗提液數(shù)量有限，所以，本方法可能會對微生物低濃度懸浮液不具備所要求的靈敏度。 使用群落計算的計數(shù)方法時，應(yīng)考慮所產(chǎn)生群落的數(shù)量。 不同技術(shù)人員的測定結(jié)果的可變性應(yīng)予以評估。這包括新陳代謝物測定和熒光法。 釋出物對生物負載估計不利影響的檢驗 檢驗的目的是研究從產(chǎn)品向懸液中釋出的物質(zhì)對脆弱微生物的影響，這里列舉了一個方法。為了確定洗提液的效果，應(yīng)將已知低數(shù)量的微生物嫁接到產(chǎn)品上，嫁接后的產(chǎn)品在洗提液留置與常規(guī)生物負載測定所需相等的時間。所用微生物的數(shù)量應(yīng)接近100。結(jié)果評價參見 。可能有必要引進稀釋物、中和或者過濾來減少阻止活動，或者消除抑制性物質(zhì)。但是還應(yīng)將洗脫液對從產(chǎn)品上獲取的存活微生物的影響考慮在內(nèi)。 應(yīng)對測定回收率的產(chǎn)品或部件進行選擇。該技術(shù)應(yīng)用于同一產(chǎn)品的過程可重復(fù)進行一定的次數(shù)。這可以通過下列方法得到:a) 用熔化的回收培養(yǎng)基涂在產(chǎn)品表面上，等到培養(yǎng)基變硬，然后使產(chǎn)品作用于規(guī)定的培養(yǎng)條件下對 培養(yǎng)形成的菌落計數(shù)。 獲取方法初始應(yīng)用計數(shù)之后的群落數(shù)量，可以表述為計數(shù)之后的總?cè)郝鋽?shù)量的分數(shù)。每重復(fù)一次后，從產(chǎn)品上或產(chǎn)品部分上將洗脫液全部回收并計數(shù)。 修正系數(shù)計算舉例 本例中，表 ，這些數(shù)據(jù)表示了一個醫(yī)療器械的5個平行結(jié)果。平行計數(shù) 4 70 12 1 04 1 2 64 第一次處理: 70 79 95 % 平均回收率= % 某些醫(yī)療器械的特性可能會無法用瓊脂覆蓋。 =1,15 87,2在有些應(yīng)用中，可以決定使用取下率范圍中最低值，以反應(yīng)出最壞情況。使用植物微生物時，由于干燥過程降低其活性，實際應(yīng)用中存在一定困難。接種體的數(shù)量級應(yīng)與產(chǎn)品上的自然污染相同。如果樣品是經(jīng)環(huán)氧乙烷滅菌，則應(yīng)經(jīng)過充分通風(fēng)來降低殘留物的影響。 脫離后微生物的數(shù)量可以表示為接種到產(chǎn)品上的微生物的數(shù)量的一部分。 制備枯草桿菌黑色變種芽抱水懸液，并用最佳培養(yǎng)條件測定懸液中的存活微生物數(shù)。 回收率的校正系數(shù)計算如下:100/35=2,9 m L該稀釋懸液，并在層流下進行干燥。 從包括直接接種的生物負載回收確認的結(jié)果，不能夠完全模仿真實生物負載回收的結(jié)果。將懸液分布于產(chǎn)品上時，應(yīng)包括最難取下自然污染的部位。有必要進行預(yù)備試驗來確立適宜的稀釋液 應(yīng)選擇一定數(shù)量的用于測定回收率的無菌產(chǎn)品或部件。作為接種用微生物應(yīng)能抵抗干燥，這一點十分重要，因此經(jīng)常使用需氧菌芽抱。 產(chǎn)品接種 產(chǎn)品接種確認 由接種某一已知數(shù)量的微生物到某一產(chǎn)品，可以制造一個人工生物負載，用以確定回收效率。 () 82 % 78 % 49 64 總數(shù) : 55 50 58 0平均菌落數(shù) 2 1 2 2 452 60 2 但是應(yīng)注意的是，本方法不是很精確。 條款給出了一個示例。在浸于液體培養(yǎng)基并培養(yǎng)之后，如果在產(chǎn)品的一小部分上出現(xiàn)活微生物，可以用MPN法的計數(shù)結(jié)果。預(yù)試驗可用于確定重復(fù)的次數(shù)。此方法通常是用于測定生物負載方法之一。有時它是指“完全回收”。應(yīng)評價這些力對生物負載估計值的影響。如果某一醫(yī)療器械中伴有抗菌物質(zhì)，并可緩慢釋放到培養(yǎng)基，那么，應(yīng)適用在培養(yǎng)階段后期將產(chǎn)品培養(yǎng)基暴露于少量微生物中。實驗中，產(chǎn)品與少量微生物一同引進到培養(yǎng)基，并與常規(guī)生物負載測定所需條件相同情況下進行培養(yǎng)。藥典中詳細記載了可以使用的微生物。如果洗脫技術(shù)中用到洗脫液，如果產(chǎn)品直接放人培養(yǎng)基中。這些技術(shù)的一個主要限制就是需要相對較高的微生物數(shù)懸浮在樣品洗脫液中。 對于自動計數(shù)方法，體系操作應(yīng)符合ISO/IEB 1702
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