【正文】 研究的重要基礎(chǔ)之一 [1]。殼聚糖具有天然抑菌性能，且抑菌譜廣，近年來殼聚糖在各個領(lǐng)域如農(nóng)業(yè)、醫(yī)學 [3]、制造 [4]、食品 [5]等方面中的運用受 到很大的重視。 25 供試藥品 殼聚糖，有浙江澳興生物科技有限公司提供，分子量為 3kd（脫乙酰度〉 80%） ， 50kd（脫乙酰度〉 90%） ， 25kd（脫乙酰度〉 90%） [6]。 污染菌的鑒定 連續(xù)觀察純化后的菌落形態(tài)。產(chǎn)生白色菌絲 24h 后變?yōu)榫G色繼而變?yōu)楹稚?，菌絲發(fā)達，絨狀，培養(yǎng) 3d 左右，在褐色菌絲中間有白色絮狀的菌毛產(chǎn)生。 真菌純培養(yǎng)的形態(tài)特征及鑒定結(jié)果 菌落在 PDA 培養(yǎng)基上等徑生長，邊緣整齊，孢子萌發(fā)加入殼聚糖的PDA 培養(yǎng)基， 4d 后能明顯觀察到菌落周圍有黑色暈圈，且黑色暈圈隨著菌 26 落的生長而向外移。 相同濃度的三 種分子量殼聚糖抑菌效果的比較 濃度為 度 3 種分子量殼聚糖對 WCHPA菌落的抑菌率結(jié)果 子量殼聚糖之間沒有明顯的規(guī)律， 最高抑菌率出現(xiàn)在分子量為 5 萬的殼聚糖培養(yǎng)基中為 %。 在第 5d， 3000 分子量的抑菌率超過其它兩 種分子量的抑菌率，而 3000 分子量的抑菌率也達到最高值?？股厥乾F(xiàn)在組培中最常見 ， 分子量對殼聚糖抗菌性能有重要影響 ， 從實驗結(jié)果來看 5 萬和 25 萬殼聚糖的抑菌效果要好于3000 分子量的；最高抑菌率出現(xiàn)在 25 萬分子量 兩個濃度中。將殼聚糖用于花卉組織培養(yǎng)將有很好的前景。 濃度對殼聚糖抗菌性能有重要影響 鐘秋平 [11]的研究結(jié)果均表明殼聚糖的抑菌作用隨其濃度的增加而增大，本實驗結(jié)果支持上述研究結(jié)果。 3 討論與結(jié)論 殼聚糖成為新型抑菌劑的可能 植物組培的污染大致可分為兩種，一種是操作中產(chǎn)生得污染，主要是霉菌的污染；一種是外植體自身所帶雜菌主要是由真菌和細菌的污染 [10]。結(jié)果表明在[9]。對照菌落始終沒有出現(xiàn)這種現(xiàn)象。分生孢子單胞卵圓形、光滑。 抑菌試驗 稱取不同分子量殼聚糖用 1M 的乙酸溶液溶解后與 PDA 培養(yǎng)基混合，制成殼聚糖終濃度分別為（ 、 、 、 、 、 ） mg/ml 的培養(yǎng)基，用 1M 的氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié) pH 值為 ，對照除不加殼聚糖外，其他與加有殼聚糖的培養(yǎng)基相同 [7]。 試驗方法 污染菌的分離及純化 在超凈工作臺中挑出紅掌繼代培養(yǎng)基中的污染真菌，接到 PDA 培養(yǎng)基中。本實驗擬從污染的紅掌繼代培養(yǎng)基中提取、純化污染菌并進行鑒定， 用不同分子量及其不同濃度的殼聚糖對其進行抑制實驗， 摸索出抑菌效果最好的殼聚糖分子量及最佳抑菌濃度，為探索殼聚糖成為新型的抑菌劑提供具體信息。因此采取有效的防控措施，降低污染發(fā)生的機率，是組織培養(yǎng)成功的重要保障。結(jié)果表明：殼聚糖對該污染菌有抑制作用， 5 萬和 25 萬分子量的抑菌效果高于 3000 分子量，濃度越高，抑菌效果越好。 explants is itself brought about by bacteria primarily by fungal and bacterial contamination[10]. High inhibitory rate was as high as %. Antibiotics in tissue culture is now the most mon molecular weight of chitosan and have an important impact on antimicrobial properties of the experimental results from the 50,000 and 250,000 the bacteriostatic effect of chitosan molecular weight than that of 3000。 18 外文資料翻譯 CHITOSAN ON ANDRAEANUM TISSUE INHIBITION OF BACTERIA CONTAMINATION Abstract: The fungi was isolated and purified from polluted anthuriu m subculture medium, identified to be DeuteromycotinaHyphpmycetes Hyphomycetales Dematiaceae and trichoderma. The inhibition effect of the three kinds of chitosan on the fungi res ults showed that the chitosan had inhibition effect on the fungi. The higher concentrations of chitosan had a betteinhibition effect than the lower inhibition effect of 50000 and 250000 molecular weight chitosan is better than that of the3000 molecular weight. It is preliminarily proved that chitosan had good inhibition effect on the fungi from polluted tissue culture , andwill have good application value in the fields of pollution prevention in flowers tissue culture. Key words: tissue culture。另外，由于消毒劑必須溶解于水才能發(fā)揮作用，所以要制成水溶狀態(tài)，如升汞與高錳酸鉀。熏蒸時，房間可預(yù)先噴濕以加強效果。紫外線的波長為 200～ 300nm，其 17 中以 260nm 的殺菌能力最強，但是由于紫外線的穿透物質(zhì)的能力很弱，所以只適于空氣和物體表面的滅菌，而且要求距照射物以不超過 120 cm為宜。可用無菌的孔徑 ～ 的硝酸纖維素膜過濾菌類，當溶液通過濾膜后，細菌的細胞和真菌的孢子等因大于濾膜直徑而被阻，在需要過濾滅菌的液體量大時，常使用抽濾裝置；液量小時，可用注射器。滅菌時應(yīng)漸進升溫，達到頂定溫度后記錄時間。 C 的溫度來殺死微生物。 灼燒滅菌（用于無菌操作的器械）在無菌操作時，把鑷子、剪子、解剖刀等浸入 95%的酒精中，使用之前在酒精燈火焰 上 灼燒 滅 菌。高壓滅菌通常會使培養(yǎng)基中的蔗糖水解為單糖 16 從而改變培養(yǎng)基的滲透壓。高壓后培養(yǎng)基 pH 值的變化方向和幅度取決于多種因素。而培養(yǎng)基要嚴格遵守保壓時間，既要保壓徹底，又要防止培養(yǎng)基中的成分變質(zhì)或效力降低，不能隨意延長時間。高壓滅菌放氣有幾種不同的做法，但目的都是要排凈空氣，使鍋內(nèi)均勻升溫，保證滅菌徹底。 高壓滅菌 方法是最常用的物理滅菌方法， 高壓滅菌的原理是：在密閉的蒸鍋內(nèi)，其中的蒸氣不能外溢，壓力不斷上升，使水的沸點不斷提高，從而鍋內(nèi)溫度也隨之 增加。 本文是在 老師的精心指導(dǎo)下完成的， 在此我謹向趙老師致以崇高的敬意。同學們也不亦樂乎的為我提供幫助，他們積極的為我查資料并相互檢查錯誤共同提高。 12 謝 辭 本課題在選題及研究過程中得到老師的悉心指導(dǎo)。 在紅掌組織培養(yǎng)中，一般的污染較容易控制，要達到接種的無菌環(huán)境條件，無菌操作要求和無菌操作水平。 污染 造成的后果是嚴重的，它會增加接種源及 污染 的幾率，對 花卉 造成傷害，耗工耗時，提高生產(chǎn)成本。在紅掌的組織培養(yǎng)中，除去培養(yǎng)基中的 VB VB煙酸等（保留肌醇）有機成分，經(jīng) 2～ 3 代培養(yǎng)后，能抑制細菌生長，對叢生芽生長增殖沒有影響。（ 2）可通過在培養(yǎng)基中加入抗菌劑來防止。同時，培養(yǎng)瓶在使用之前要洗凈（包括瓶內(nèi)瓶外），滅好菌的培養(yǎng)瓶不要放在空氣中太久，一般出鍋后 1～ 2 天內(nèi)接完種最好， 以減少培養(yǎng)瓶表面的微生物引起的污染。 經(jīng)常檢查消毒鍋的滅菌質(zhì)量 消毒鍋的壓力表降到零后不能馬上出鍋。 去濕：保持室內(nèi)空氣干燥，如使用空調(diào)“除濕”功能，也可減少真菌生長繁殖。 用抗生素等殺菌藥劑的處理，雖有不少報道，但至今還未發(fā)現(xiàn)那種抗生素能夠?qū)Ω鞣N菌都有效，并且常常也會影響紅掌材料的正常生長分化。可能是接種用具滅菌不徹底，接種時材料被污染；或者是未及時發(fā)現(xiàn)污染苗，接種過程交叉感染；若是外植體，菌類從材料培養(yǎng)基以上部分長起，而不是從培養(yǎng)基先長起，且發(fā)生在 5 天以后，則說明是材料帶的內(nèi)生菌。在紅掌初代培養(yǎng)或前幾代的繼代培養(yǎng)中存在的污染，并不形成明顯的菌落而只在培養(yǎng)基內(nèi)部形成“絲狀物”，“暈狀物”，不易被肉眼發(fā)現(xiàn)的，對紅掌中的內(nèi)生細菌，由于它潛伏得較深，表面消毒方法無法將其消滅。主要有以下幾類：黃單胞菌屬、芽孢桿菌屬、假單胞菌屬、土壤桿菌屬、棒狀桿菌屬、歐文氏菌屬等。李穎等的實驗研究證明，如果繼代培養(yǎng)中只有真菌污染，采用 3%的多菌靈無菌液浸泡 以上即可，用無菌水沖洗后接種或不用無菌水沖洗直接接種都可消除真菌污染。 7 第 4 章 紅掌誘導(dǎo)與繼代培養(yǎng)過程中的污染 初代培養(yǎng)獲得的無菌材料在后期或繼代培養(yǎng)也可能出現(xiàn)污染，這一方面是由于操作不慎的原因，另外即是由于初代培養(yǎng)中使用了營養(yǎng)相對簡單的培養(yǎng)基有可能使污染不易表現(xiàn)出來，有時繼代材料在培養(yǎng)室則可能被螨傳播的真菌污染。不準講話，亦不準對著操作區(qū)呼吸，以免微生物污染材料、培養(yǎng)基和用具。因為有很多組織培養(yǎng)的失敗，從材料、培養(yǎng)基條件等方面檢查均無問題，只是由于操作技術(shù)不熟練，如脫毒培養(yǎng)抽取莖尖很小，操作時間長了就會使莖尖失水變干，或不慎感染雜菌，再同時接種的環(huán)境又不是絕對無菌的。污染中特別注意一種呈乳白色的細菌污染，這種細菌為芽孢桿菌。但它應(yīng)置放在潔凈的房間，窗戶密封，并定期清洗過濾膜，以延長使用壽命。 布質(zhì)制品的滅菌 工作人員使用的工作服、帽子、口罩等，要經(jīng)常保持干凈，并定期進行消毒。 常用消毒劑的消毒效果比較見表 21: 表 21 常用消毒劑的消毒效果比較 消毒劑 使用濃度（ %） 去除難易 消毒時間（ min） 效果 次氯酸鈣 9～ 10 易 5～ 30 很好 次氯酸鈉 2 易 5～ 30 很好 漂白粉 飽和溶液 易 5～ 30 很好 過氧化氫 10～ 12 最易 5～ 15 好 升汞 ～ 1 較難 20～ 30 好 酒精 70～ 75 易 幾秒至幾分鐘 好 抗菌素 4～ 5(mg/L) 中 30～ 60 較好 5 第 3 章 接種前的準備工作 器皿、工具的滅菌 器皿與金屬器械的滅菌 玻璃器皿的滅菌 可采用濕熱滅菌法，即將玻璃器皿包扎后置入蒸汽滅菌器中進行高溫高壓滅菌，滅菌時間可長到 25～ 30min。也可在菌類長入組織內(nèi)部時，除去韌皮組織，只接種內(nèi)部的分生組織可防止材料帶菌。當其冷卻至 45。另外，只有當高壓鍋的壓力表指針回到零時，才能打開滅菌鍋。